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减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量：4
1
作者 尚珂 张俊峰 +6 位作者 程相朝 张春杰 李银聚 陈桂华 颜云飞 翟崇凯 赵战勤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期358-363,共6页
目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493... 目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。 展开更多
关键词 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(PYA3493) 口服活疫苗载体
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鼠伤寒沙门菌SL1344株侵袭性蛋白B缺失株asd平衡致死系统的构建及特性的研究 被引量：2
2
作者 张春杰 陈松彪 +8 位作者 程相朝 廖成水 李静 何雷 张明亮 郁川 余祖华 贾艳艳 赵战勤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期210-213,共4页
目的:为研究用于能够稳定携带外源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究以减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipB为研究对象,利用自杀性质粒pREΔasd介导的细菌同源重组技术,构建SL1344ΔsipBΔasd宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特... 目的:为研究用于能够稳定携带外源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究以减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipB为研究对象,利用自杀性质粒pREΔasd介导的细菌同源重组技术,构建SL1344ΔsipBΔasd宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果表明SL1344ΔsipBΔasd构建成功。生物学特性结果表明SL1344ΔsipBΔasd的血清型与SL1344ΔsipB相同,并能够稳定遗传缺失后的asd基因;其生长速度和生化特性与亲本株SL1344基本相同,并且该缺失株仍然具有运动性的能力,小鼠攻毒试验表明SL1344ΔsipBΔasd电转了携带asd基因的互补质粒pYA3493后,其毒力较亲本菌株SL1344约降低至1.4%。结论:以上结果证明,减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsipBΔasd菌株构建成功,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 SL1344ΔsipBΔasd(pYA3493) 口服活疫苗载体
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减毒猪霍乱沙门菌△cya△asdC78-1宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量：1
3
作者 张俊峰 张春杰 +7 位作者 程相朝 尚珂 李银聚 吴庭才 刘一尘 颜云飞 陈桂华 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期366-370,共5页
为研制能够稳定携带外源基因的猪霍乱沙门菌口服活疫苗载体,本研究在减毒猪霍乱沙门菌△cyaC78-1基础上,利用自杀性质粒介导的等位交换技术,构建了△cya△asdC78-1宿主-载体平衡致死系统,并对其生物学特性进行了鉴定。PCR及测序结果表明... 为研制能够稳定携带外源基因的猪霍乱沙门菌口服活疫苗载体,本研究在减毒猪霍乱沙门菌△cyaC78-1基础上,利用自杀性质粒介导的等位交换技术,构建了△cya△asdC78-1宿主-载体平衡致死系统,并对其生物学特性进行了鉴定。PCR及测序结果表明△cya△asdC78-1构建正确,其生物学特性检测结果显示△cya△asdC78-1生化特性与△cyaC78-1完全相同,血清型与△cyaC78-1和疫苗株C500相同,并且具有稳定的遗传特性;其生长速度与△cya C78-1基本相同,均明显慢于疫苗株C500。动物试验表明△cya△asdC78-1电转化携带asd基因的互补质粒pYA3493后,其毒力比△crp△asdC78-1(p YA3493)降低1.14倍,比△asdC500(pYA3493)降低了5.1倍。以上结果表明,减毒猪霍乱沙门菌△cya△asdC78-1同样可以作为口服活疫苗载体用于高效表达外源基因,为开发以C78-1为基础的口服多价疫苗载体奠定了基础。 展开更多
关键词 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 △cya△asdC78-1(pYA3493) 口服活疫苗载体
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