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线粒体DNA1555位点和GJB2基因及SLC26A4基因的诊断方法及临床应用 被引量:91
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作者 戴朴 于飞 +8 位作者 康东洋 张昕 刘新 米文宗 曹菊阳 袁慧军 杨伟炎 吴柏林 韩东一 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期769-773,共5页
目的建立常见耳聋基因如线粒体DNA(mtDNA)1555位点、GJB2基因、SLC26A4(Pendren′ssyndromegene,PDSgene)基因突变的临床检测方法。方法来自门诊的散发耳聋患者367例,有母系家族遗传史耳聋患者60例(27个家系),来自聋哑学校的先天性聋患... 目的建立常见耳聋基因如线粒体DNA(mtDNA)1555位点、GJB2基因、SLC26A4(Pendren′ssyndromegene,PDSgene)基因突变的临床检测方法。方法来自门诊的散发耳聋患者367例,有母系家族遗传史耳聋患者60例(27个家系),来自聋哑学校的先天性聋患者20例,来自门诊经高分辩CT证实双侧前庭水管扩大患者3例,无感音神经性聋病史的对照个体50例。应用线粒体基因A1555G突变检测试剂盒检测线粒体基因1555位点的突变情况;针对20例语前聋患者进行GJB2全序列分析;针对3例大前庭水管综合征的患者,应用变性高效液相色谱技术进行SLC26A4基因的全部外显子筛查,出现异常波形之外显子行序列分析。结果在26个家系的59例患者和5例散发患者中发现mtDNAA1555G突变;20例先天性聋中发现2例GJB2235delC纯合突变,酶切加测序发现1例235delC+299-300delAT复合突变,均为先天性聋的肯定原因,另外2例具有109G-A杂合突变;3例大前庭水管综合征患者的变性高效液相色谱技术筛查均发现包含第7、8外显子的扩增子具有异常波形,测序证实1例为杂合的SLC26A4G316X突变;另2例为919-2A-G纯合突变。结论耳聋基因诊断具有显著的临床意义,可操作性强,在不远的将来耳聋的基因诊断可能会正式列为耳科临床检测项目。 展开更多
关键词 基因 诊断 突变 GJB2基因 线粒体基因 临床应用 4基因 变性高效相色谱技术 诊断方法
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DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响 被引量:52
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作者 柳满然 潘凯枫 +1 位作者 王祎 吕有勇 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1160-1163,共4页
背景与目的:变性高效液相色谱(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是最近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术,在工作中我们发现某些因素,尤其是DNA聚合酶干扰DHPLC分辨力。本文详细地分析了具校正功能... 背景与目的:变性高效液相色谱(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是最近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术,在工作中我们发现某些因素,尤其是DNA聚合酶干扰DHPLC分辨力。本文详细地分析了具校正功能和非校正功能的DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响,旨在寻找更适合DHPLC分析的DNA聚合酶。方法:选择长度为268bp、317bp、590bp的3个代表性的片段用于DHPLC分析。选择6种品牌的TaqDNA聚合酶,1种Ampli-TaqgoldDNA聚合酶,4种具校正功能的DNA聚合酶(Pfu和Vent),用这11种酶扩增同一DNA片段,并进行DHPLC检测,分析并鉴定它们对DHPLC峰型的影响。结果:TaqDNA聚合酶对DHPLC分析产生两种明显的负面影响。一是在DHPLC图谱的主峰前,形成一个额外小峰,影响DHPLC对杂合双链的分辨能力。另一种影响是难以形成正常的DHPLC色谱图,导致DHPLC检测的失败。具校正功能的DNA聚合酶和TaqgoldDNA聚合酶对DHPLC几乎不产生这些负面影响。结论:具校正功能的DNA聚合酶比Taq聚合酶更适合于DHPLC突变或SNP分析,尤其是GC含量高的小片段或其它容易受干扰的片段应首选PfuDNA聚合酶用于DHPLC分析。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 DNA聚合酶 基因突变 筛查 DHPLC
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中国上海地区4719名孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查 被引量:31
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作者 龚波 章莉 +5 位作者 侯雅萍 胡荷宇 李海川 谭美玉 陈劲 俞菁 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期670-672,共3页
目的对中国上海地区4719名孕妇进行脊髓性肌萎缩症携带者的筛查,为遗传咨询及进一步产前诊断提供依据。方法应用多重PCR结合变性高效液相色谱技术进行SMN1及SMN2基因拷贝数的检测,筛查出SMN1拷贝数为1的脊髓性肌萎缩症携带者。结果在4... 目的对中国上海地区4719名孕妇进行脊髓性肌萎缩症携带者的筛查,为遗传咨询及进一步产前诊断提供依据。方法应用多重PCR结合变性高效液相色谱技术进行SMN1及SMN2基因拷贝数的检测,筛查出SMN1拷贝数为1的脊髓性肌萎缩症携带者。结果在4719份样品中共检测出SMA携带者90例。女性携带者频率为1.9%,其中SMN1杂合缺失占1.2%。由SMN1基因转换成SMN2基因者占0.6%。结论确定上海地区女性脊髓性肌萎缩症携带者的频率可为遗传咨询及产前诊断提供理论依据,并降低脊髓性肌萎缩症患儿的出生率。 展开更多
关键词 脊髓性肌萎缩症 变性高效相色谱技术 SMN1基因 SMN2基因 携带者筛查
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中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的研究 被引量:9
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作者 周妙妮 李继承 丁世萍 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期350-353,共4页
目的研究中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的特征,探讨内皮素受体B基因与先天性巨结肠症发病的关系。方法收集散发性先天性巨结肠症病例75例和正常对照40例,通过盐析法从外周血中提取DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性和... 目的研究中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的特征,探讨内皮素受体B基因与先天性巨结肠症发病的关系。方法收集散发性先天性巨结肠症病例75例和正常对照40例,通过盐析法从外周血中提取DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性和变性高效液相色谱技术,对内皮素受体B基因的第1a、1b和4外显子进行分析,并通过DNA测序确定阳性样本的碱基改变方式。结果6个病例在第4外显子上存在多态性改变,改变方式均为碱基75487位点上G→A的置换(Leu277→Leu),发生率为8.0%(6/75)。正常对照样本该位点没有此种变化。所有病例的第1a、1b外显子均无异常改变。结论中国人散发性先天性巨结肠症患儿中可检测到内皮素受体B基因的多态性改变,内皮素受体B基因是先天性巨结肠症的易感基因。 展开更多
关键词 先天性巨结肠症 B基因 散发性 聚合酶链反应-单链构象多态性 中国 变性高效相色谱技术 基因的多态性 内皮素受体B 正常对照 DNA测序 第4外显子 异常改变 易感基因 病例 外周血 盐析法 发生率 变方 碱基 样本 位点
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应用变性高效液相色谱技术快速诊断儿童型脊髓性肌萎缩症(英文) 被引量:9
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作者 陈万金 吴志英 +2 位作者 王柠 林珉婷 慕容慎行 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期291-293,共3页
目的介绍变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)技术在儿童型脊髓性肌萎缩症(spinalmuscularatrophy,SMA)基因诊断中的应用。方法PCR扩增25名正常人、1份标准样品及25例SMA患者运动神经元生存基因(sur... 目的介绍变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)技术在儿童型脊髓性肌萎缩症(spinalmuscularatrophy,SMA)基因诊断中的应用。方法PCR扩增25名正常人、1份标准样品及25例SMA患者运动神经元生存基因(survivalmotorneuron,SMN)第7外显子及其侧翼区域,PCR产物变性、复性后直接上样于DHPLC系统。通过改变A、B缓冲液的比例来分离各种DNA成份。结果各种不同DNA成份以色谱峰的形式表现出来。23名正常标本呈现3个峰,依次为SMN1/SMN2异源双链峰、SMN2同源双链峰、SMN1同源双链峰。2名正常标本及1份标准品只有SMN1峰,表明缺失了SMN2。22例SMA患者只有SMN2峰,表明缺失了SMN1。另3例SMA患者呈现3个峰,表明无SMN1或SMN2缺失。结论DHPLC诊断SMA具有敏感、准确、快速、简便等优点。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 快速诊断 儿童 脊髓性肌萎缩症 运动神经元
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应用变性高效液相色谱技术筛查一个正常血钾性周期性麻痹家系的SCN4A基因突变 被引量:8
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作者 郭秀海 吴卫平 +3 位作者 张雁华 王红斌 毛燕玲 朱克 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期125-129,共5页
目的 应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查一发生Met15 92Val替换的正常血钾性周期性麻痹 (normoKPP)家系的SCN4A基因 ,证实该突变为疾病相关突变 ,并总结其在此家系的临床表型特点。方法 总结一normoKPP家系 14例患者的临床特点 ,... 目的 应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查一发生Met15 92Val替换的正常血钾性周期性麻痹 (normoKPP)家系的SCN4A基因 ,证实该突变为疾病相关突变 ,并总结其在此家系的临床表型特点。方法 总结一normoKPP家系 14例患者的临床特点 ,应用DHPLC技术筛查SCN4A基因全部 2 4个外显子 ,并对发现异常洗脱峰者进行测序。结果 该家系具有典型的normoKPP临床特征 ,无肌强直表现及早显、性别偏移现象 ,病程呈良性过程 ,发病早晚与症状严重程度及预后无相关。DHPLC筛查发现在外显子 1及 2 4存在杂合二倍体 ,测序及连锁分析证实位于外显子 1的突变为良性多态性 ,外显子 2 4的Met15 92Val替换为疾病相关突变。结论 国人存在Met15 92Val突变 ,此突变可导致normoKPP。normoKPP与高钾性周期性麻痹临床表现相似 ,两者可存在共同突变。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 筛查 正常血钾性周期性麻痹 家系调查 SCN4A基因 基因突变 常染色体显性遗传疾病
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四例马凡综合征患者的FBN1基因突变分析及产前诊断 被引量:7
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作者 宋士秋 赵保健 +6 位作者 李爽 张建群 王慧 贾婵维 张凤环 张旭 谢进生 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期534-538,共5页
目的对4例马凡综合征(Marfan syndrome,MFs)患者进行原纤维蛋白一1基因(fibrillin-1,FBNl)突变检测及产前诊断,为患者提供病因诊断和遗传咨询。方法应用PCR扩增和DNA测序对4例典型的MFS患者进行FBNl基因筛查。确定突变类型后,于... 目的对4例马凡综合征(Marfan syndrome,MFs)患者进行原纤维蛋白一1基因(fibrillin-1,FBNl)突变检测及产前诊断,为患者提供病因诊断和遗传咨询。方法应用PCR扩增和DNA测序对4例典型的MFS患者进行FBNl基因筛查。确定突变类型后,于孕18~20周穿刺抽取羊水,抽提DNA,PCR扩增FNBl基因,对PCR产物进行双向测序。结果例1FBNl基因第46内含子的+1位碱基发生置换(IVS46+1G〉A);例2第35外显子的4453位碱基发生错义突变c.4453T〉G(Cysl485Gly);例3第21外显子2585位碱基发生错义突变e.2585G〉A(Cys862Tyr);例4第28外显子3536位碱基A缺失e.3536delA。C.4453T〉G(Cysl485Gly)、C.2585G〉A(Cys862Tyr)和C.3536delA为新突变。4例胎儿羊水的标本也分别检测到IVS46+1G〉A、C.4453T〉G(Cysl485Gly)、C.2585G〉A(Cys862Tyr)和C.3536delA突变。结论FBNl基因筛查可以检测出患者及其家系中胎儿的突变位点和类型,具有明确的诊断价值,有助于遗传咨询。 展开更多
关键词 马凡综合征 变性高效相色谱技术 原纤维蛋白-1 基因突变 产前诊断
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变性高效液相色谱技术在快速检测食品微生物中的应用研究 被引量:7
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作者 杨柳 《现代食品》 2019年第10期84-86,94,共4页
食品安全问题一直是社会各界重点关注的热点话题。为了保证食品质量和安全,有必要对流入市场的食品进行食品中微生物含量的检验。变性高效液相色谱技术因其自身特点以及检验的精确度相对较高、灵敏度和速度相对较快等特点,在微生物检测... 食品安全问题一直是社会各界重点关注的热点话题。为了保证食品质量和安全,有必要对流入市场的食品进行食品中微生物含量的检验。变性高效液相色谱技术因其自身特点以及检验的精确度相对较高、灵敏度和速度相对较快等特点,在微生物检测方面得到了广泛应用。本文主要对变性高效液相色谱技术的实际应用进入深入研究,从原理、特点等方面进行详细阐述。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 快速检测 食品微生物
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变性高效液相色谱技术在家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变检测中的应用 被引量:5
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作者 王绿娅 蔺洁 +5 位作者 陈立伟 潘晓冬 杜兰平 秦彦文 刘舒 陈保生 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期359-363,共5页
目的以变性高效液相色谱(DHPLC),分析检测家族性高胆固醇血症(FH)一汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变,以明确诊断。方法收集临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族一个家系共37名成员,其中30人为一级和二级亲属,7名为亲属配... 目的以变性高效液相色谱(DHPLC),分析检测家族性高胆固醇血症(FH)一汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变,以明确诊断。方法收集临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族一个家系共37名成员,其中30人为一级和二级亲属,7名为亲属配偶作为对照,提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增LDLR基因包含启动子和全部基因编码区(118外显子)及临近的内含子序列共21个片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物。采用DHPLC技术检测了LDLR基因,对洗脱曲线异常者进行核苷酸序列分析。结果该家系中发现4处变异,其中1处经核苷酸序列测定明确了突变的性质为第3内含子的剪接突变,并在此家系5名成员中得到证实,而对照组中未检出。结论成功地建立了以DHPLC筛查LDLR基因点突变的方法及技术参数,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。 展开更多
关键词 家族性高胆固醇血症 低密度脂蛋白受体基因 变性高效相色谱技术 点突变检测 聚合酶链反应(PCR) 琼脂糖凝胶电泳 核苷酸序列分析 核苷酸序列测定 DLR基因 DHPLC 基因组DNA 基因编码区 基因点突变 基因突变 家系成员 分析检测
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4568例孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查及产前诊断分析 被引量:5
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作者 孟雁欣 孙东兰 +2 位作者 于湄 杨玉秀 刘春苗 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期531-535,共5页
目的:对4568例孕妇进行脊髓性肌萎缩症(SMA)突变携带者筛查,并对已明确携带者夫妇胎儿进行产前诊断,了解运动神经元生存基因(SMN)变异携带率及SMA产前诊断并分析临床意义。方法:将变性高效液相色谱(DHPLC)分析法及Sanger测序联合应用,... 目的:对4568例孕妇进行脊髓性肌萎缩症(SMA)突变携带者筛查,并对已明确携带者夫妇胎儿进行产前诊断,了解运动神经元生存基因(SMN)变异携带率及SMA产前诊断并分析临床意义。方法:将变性高效液相色谱(DHPLC)分析法及Sanger测序联合应用,对石家庄市第四医院4568例孕妇进行SMN1缺失/点突变检测,进行携带频率统计;对携带者配偶进行筛查并对双方均为携带者夫妇胎儿进行产前诊断。结果:(1)4568例孕妇共检出SMA患者3例,2例SMN1外显子7纯合缺失,1例患者检测出SMN1外显子杂合缺失,拷贝数"1",该患者同时检出SMN1点突变变异位点p.Q164X,临床诊断为"1+1型"SMA患者,发病率0.066%。(2)126例拷贝数异常携带者(SMN1杂合缺失/转换个体),84例为缺失携带者,含SMN1∶SMN 2=1∶1样本35例,SMN1∶SMN 2=1∶2样本49例。35例转换携带者SMN1转换成SM N 2基因,含SMN1∶SMN 2=1∶3样本32例,SMN1∶SMN 2=1∶4样本3例。7例携带者SMN1∶SMN 2=1∶0。(3)126例携带者配偶中25例同为携带者。(4)应用DHPLC联合Sanger测序技术对25例SMA高危胎儿行产前诊断。结果显示3例胎儿SMN1外显子7/8纯合缺失(SMA患者);1例胎儿SMN1外显子7/8杂合缺失(SMA携带者)。余胎儿检测未见SMN1拷贝数异常。Sanger测序1例胎儿携带p.Q164X点突变变异位点,余样本未见SMN异常。结论:本研究检出SMN1变异携带率高于中国南方地区报道,且在北方地区属高携带率地区。DHPLC联合Sanger检测技术可以完成SMA携带者筛查及产前诊断,二者联合应用对于优生优育、有效预防SMA胎儿的出生具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 Sanger测序 脊髓性肌萎缩症 产前诊断 运动神经元生存基因
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胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的研究 被引量:5
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作者 杨建伟 陈增 +5 位作者 苏颖 高炜 林锦源 贾静 林华妹 蒙燕 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第1期23-28,共6页
目的探讨胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的关系。方法采用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和基因测序技术检测53例晚期胃癌患者外周血中CYP3A4基因的突变情况,观察并评价含紫杉醇化疗方案的疗效与CYP3A4... 目的探讨胃癌细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性与含紫杉醇方案化疗敏感性的关系。方法采用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和基因测序技术检测53例晚期胃癌患者外周血中CYP3A4基因的突变情况,观察并评价含紫杉醇化疗方案的疗效与CYP3A4基因多态性的关系。结果DHPLC检测显示,53例胃癌患者中CYP3A4基因单峰者(野生型)32例,双峰者(突变型)21例;测序结果显示,CYP3A4基因第10号外显子第27位C缺失突变。野生型组有效率(RR)为40.6%,疾病控制率(DCR)为84.4%;突变型组RR为33.3%,DCR为85.7%,两组RR和DCR的差异均无统计学意义(P〉0.05)。53例胃癌患者的中位无进展生存时间(PFS)为6.5个月(95%CI:3.576~9.424个月),中位总生存时间(OS)为11.0个月(95%CI:6.955~15.045个月)。CYP3A4野生型与突变型患者中位PFS(7.0个月掷.7.0个月)和OS(10.0个月vs.14.0个月)的差异均无统计学意义(P〉O.05)。使用含铂方案患者CYP3A4基因野生型和突变型中位PFS的差异无统计学意义(P〉0.05),使用非含铂方案中位PFS的差异有统计学意义(p=0.024),含铂与非含铂方案中位0s的差异均无统计学意义(P〉0.05)。采用3药联合与两药联合方案患者的中位PFS和0s均与CYP3A4基因多态性无关。野生型与突变型患者不良反应均较轻,以1~2级为主,常见不良反应包括食欲减退、恶心呕吐和白细胞减少。结论CYP3A4基因第10号外显子第27位C缺失突变,CYP3A4基因突变型晚期胃癌患者使用含紫杉醇方案有延长0s的趋势。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 CYP3A4基因 胃癌 紫杉醇
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运用DHPLC技术进行脊髓性肌萎缩症SMN-T基因缺失检测的初步研究 被引量:3
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作者 杨元 彭茜 +1 位作者 阿周存 林立 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期271-274,共4页
目的评价变性高效液相色谱技术(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)在脊髓性肌萎缩症(spinalmuscularatrophy,SMA)端粒运动神经元生存基因(survivalmotorneurontelomericcopy,SMN-T)缺失筛查中的应用价值。方法应用... 目的评价变性高效液相色谱技术(denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)在脊髓性肌萎缩症(spinalmuscularatrophy,SMA)端粒运动神经元生存基因(survivalmotorneurontelomericcopy,SMN-T)缺失筛查中的应用价值。方法应用扩增限制性长度多态性技术(PCR-RFLP)、DHPLC及DNA测序技术对51例SMA患儿及其双亲与67例非SMA患儿SMN-T与着丝粒运动神经元生存基因(survivalmotorneuroncentromericcopy,SMN-C)碱基差异位点exon7(C/T)与exon8(G/A)进行检测。结果PCR-RFLP与DHPLC技术均同时检出45例SMA患儿SMN-T基因exon7+8或exon7纯合缺失,DNA测序证实了PCR-RFLP与DHPLC检测的可靠性。在DHPLC检测中发现,6例非SMN-T纯合缺失患儿的SMN-T与SMN-C基因拷贝数存在不平衡;在SMN-T基因纯合缺失患儿双亲中,75.5%(77/102例)的个体两基因拷贝数存在不平衡;在非SMA对照组中,22.4%的个体(15/67例)两基因拷贝数存在不平衡,两组个体基因拷贝不平衡频率差异有显著性。结论DHPLC技术不仅能快速有效地检出SMN-T基因的纯合缺失,而且通过比较SMN-T与SMN-C基因拷贝数平衡与否,可初步提示患儿SMN-T基因杂合缺失状态与双亲基因缺失的携带者状态,为进一步的基因突变筛查与产前诊断提供依据。 展开更多
关键词 脊髓性肌萎缩症 运动神经元生存基因 变性高效相色谱技术 基因缺失
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韧带样型纤维瘤病中APC基因和β-catenin基因突变的研究 被引量:3
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作者 杨吉龙 王坚 +2 位作者 周晓燕 侯英勇 朱雄增 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期237-238,共2页
关键词 Β-CATENIN APC基因 纤维瘤病 基因突变 韧带样 performance 变性高效相色谱技术 聚合酶链反应 Wnt信号 通路异常
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基于多重RT-PCR同时鉴定猪流感病毒不同HA和NA基因亚型的DHPLC检测方法的建立 被引量:2
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作者 徐超 刘芳 +2 位作者 李轲 张巨洲 韩雪清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期624-628,共5页
为建立快速、敏感并同时鉴定不同HA和NA基因亚型的猪流感病毒(SIV)的方法。本研究根据SIV的H1、H2、H3、H5、H9、N1及N2亚型基因的保守序列分别设计型特异性引物,建立了同时扩增SIV不同亚型的多重RT-PCR及变性高效液相色谱(DHPLC)的高... 为建立快速、敏感并同时鉴定不同HA和NA基因亚型的猪流感病毒(SIV)的方法。本研究根据SIV的H1、H2、H3、H5、H9、N1及N2亚型基因的保守序列分别设计型特异性引物,建立了同时扩增SIV不同亚型的多重RT-PCR及变性高效液相色谱(DHPLC)的高灵敏度和高通量分型检测方法。结果显示,该方法能够特异性的检测并鉴定H1、H2、H3、H5、H9、N1、N2等亚型SIV,而对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒均无交叉反应,该方法的最低检出限为100拷贝/μL核酸。对76份猪流感鼻拭子样品临床样品检测结果表明,DHPLC与商业化荧光定量PCR检测试剂盒的检测结果完全一致。本研究建立的方法,特异性强、敏感性高、自动化程度高,为快速分型检测SIV提供技术支撑,并具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 猪流感病毒 亚型 变性高效相色谱技术 分型检测
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动物病原高通量检测技术 被引量:2
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作者 朱丽萍 颜世敢 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期103-106,共4页
当前规模化养殖业迫切需要动物病原检测技术高通量化。高通量检测技术具有高通量、自动化、微量化等特点。病原高通量检测技术可分为高通量免疫学检测(检测抗原)和高通量分子生物学检测(检测核酸)两大类。论文对近年来报道的用于动物病... 当前规模化养殖业迫切需要动物病原检测技术高通量化。高通量检测技术具有高通量、自动化、微量化等特点。病原高通量检测技术可分为高通量免疫学检测(检测抗原)和高通量分子生物学检测(检测核酸)两大类。论文对近年来报道的用于动物病原高通量检测的基因芯片技术、抗体芯片技术、液相芯片技术、流式细胞术多色荧光分析技术、变性高效液相色谱技术等新技术从原理、特点及应用等进行了综述。 展开更多
关键词 高通量检测 芯片 抗体芯片 流式细胞术 基因芯片 变性高效相色谱技术 病原微生物
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Relationship between a novel polymorphism of lipoprotein lipase gene and coronary heart disease 被引量:2
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作者 苏智广 张思仲 +3 位作者 候一平 张立 廖林川 肖翠英 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第5期677-680,147-148,共4页
OBJECTIVE: To investigate polymorphisms in the gene for lipoprotein lipase (LPL) in Chinese populations with coronary heart disease (CHD) and to inquire into the relationship between these polymorphisms in LPL gene an... OBJECTIVE: To investigate polymorphisms in the gene for lipoprotein lipase (LPL) in Chinese populations with coronary heart disease (CHD) and to inquire into the relationship between these polymorphisms in LPL gene and CHD. METHODS: Genomic DNA was extracted from patients with CHD and normal control subjects using a salting out method. The entire coding region and flanking sequences of all coding exons of the LPL gene were amplified by PCR technique and PCR products were detected by denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) and sequenced with a dideoxy terminal termination method. RESULTS: A novel polymorphic site, G830A, that is within the fifth exon of the LPL gene was found. The 192 codon CGA was changed into CAA and resulted in the substitution of glutamine for arginine. Between the control and CHD groups, chi-square test showed no significant difference in the frequencies of the A/A genotype and A allele (P > 0.05). However, the frequencies of A/A genotype and A allele (0.653 and 0.786) in CHD patients with high plasma triglyceride/lowed plasma high density lipoprotein cholesterol were higher than those (0.415 and 0.642) in CHD patients without hyperlipidemia (P Gln substitution polymorphism and CHD, but there is a significant positive correlation between the A/A genotype of the LPL gene and CHD associated with high triglyceride/lowed high density lipoprotein cholesterol. This study may provide new data for exploring the molecular mechanism of CHD. 展开更多
关键词 Alleles APOLIPOPROTEINS Chromatography High Pressure Liquid Coronary Disease DNA DNA Mutational Analysis Gene Frequency Humans HYPERTRIGLYCERIDEMIA Lipoprotein Lipase LIPOPROTEINS Lipoproteins HDL Cholesterol Polymorphism Genetic Research Support Non-U.S. Gov't
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应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较 被引量:1
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作者 邹汉良 梁汉彰 +3 位作者 赵毅 张松 罗史科 候家兴 《热带医学杂志》 CAS 2009年第4期395-397,共3页
目的比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用。方法通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩... 目的比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用。方法通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断。结果100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例。结论两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势。 展开更多
关键词 PCR反向斑点杂交技术 悬浮点阵技术 变性高效相色谱技术 Β-地中海贫血 基因
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变性高效液相色谱技术在大豆品种鉴定中的应用 被引量:1
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作者 彭梓 谭建锡 +3 位作者 周慧平 袁小雅 朱金国 王利兵 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期881-888,共8页
单核苷酸多态性(SNPs)和插入-删除标记(In Del)在基因组中广泛分布,日益成为主要作物的重要遗传标记。利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测大豆品种的SNP和In Del的多态性,可为大豆种质的品种鉴定提供一种新型的快速检测方法。基于公... 单核苷酸多态性(SNPs)和插入-删除标记(In Del)在基因组中广泛分布,日益成为主要作物的重要遗传标记。利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测大豆品种的SNP和In Del的多态性,可为大豆种质的品种鉴定提供一种新型的快速检测方法。基于公共数据库中的大豆基因信息,筛选了3条DNA序列作为目标分析片段,以大豆种质粤夏119作为参比基因型,利用DHPLC技术平台对10份大豆品种进行了鉴定。结果表明:混合参比DNA后的大豆样本产生DHPLC谱图均具有多态性,谱型与测序基因型一一对应。综合3条目标片段的DHPLC特征谱图可以区分所有大豆品种。试验结果验证了DHPLC应用于大豆品种鉴定的可行性和可靠性。由于DHPLC分辨率高、快速、操作简单、安全等优点,在大豆的品种鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 SNP INDEL 大豆 鉴定 变性高效相色谱技术
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变性高效液相色谱技术检测PAI-1基因多点突变与冠心病相关分析
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作者 王旭东 傅研 +2 位作者 姜惠杰 森崎裕子 森崎隆幸 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 2003年第5期404-408,共5页
目的 检测纤溶酶原激活物抑制剂 -1(plasminogen activator inhibitor-1;PAI-1)基因编码区多态性 ,并探讨其与冠心病的关系。方法 使用变性高效液相色谱 (denaturing high performance liquidchromatography,DHPL C)技术和 DNA序列测... 目的 检测纤溶酶原激活物抑制剂 -1(plasminogen activator inhibitor-1;PAI-1)基因编码区多态性 ,并探讨其与冠心病的关系。方法 使用变性高效液相色谱 (denaturing high performance liquidchromatography,DHPL C)技术和 DNA序列测定方法检测了 93例冠心病 (coronary artery disease,CAD)患者和 12 3名正常对照者的基因组 DNA。结果 在 PAI-1基因第 2外显子中发现了两个单核苷酸多态性位点 (G43 A和 G49A)均为鸟嘌呤 (G)→腺嘌呤 (A)突变 ,引起肽链上第 15位丙氨酸变成苏氨酸(Ala15Thr)和第 17位的缬氨酸变成异亮氨酸 (Val17Ile) ,在所有对象中只发现了杂合型和纯合野生基因型携带者。分别分析了两个位点基因型与冠心病和 PAI-1基因水平的关系。与冠心病组比较 ,对照组中具有更多的杂合基因型携带者 ,但差异无显著性。其不同基因型与 PAI-1抗原水平没有明显相关性。结论 用 DHPL C技术检测了 PAI-1基因两个多态性位点 。 展开更多
关键词 变性高效相色谱技术 基因突变 冠心病 CAD 单核苷酸 DHPLC PAI-1 多态性
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汉族非霍奇金淋巴瘤患者caspase-8、-10基因单核苷酸多态性及突变检测
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作者 叶月芳 周韧 +1 位作者 谢云 杨水友 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期694-696,共3页
非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生是多步骤、多因素参与的结果。新近研究结果表明,NHL常表现为对死亡受体介导的凋亡途径的抵抗。逃避凋亡机制有多种,其中包括该途径相关基因的失活突变。我们采用PCR、变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DN... 非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生是多步骤、多因素参与的结果。新近研究结果表明,NHL常表现为对死亡受体介导的凋亡途径的抵抗。逃避凋亡机制有多种,其中包括该途径相关基因的失活突变。我们采用PCR、变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DNA测序技术检测NHL患者中半胱天冬酶(caspase)-8、-10基因的编码区,以期定位多个单核苷酸多态性(SNP)及突变,初步探讨这些多态性及编码区突变与NHL发病的可能关系。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤患者 单核苷酸多态性 CASPASE-8 突变检测 10基因 变性高效相色谱技术 汉族 半胱天冬酶
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