13例肝豆状核变性家系致病基因突变的检测和分析 被引量：6

1

作者 张前军 李汶 +3 位作者 高伯迪 汤蔚琳 李麓芸 卢光琇 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第6期497-501,共5页

为了研究Wilson病(wilson disease,WD)基因突变的类型和发生情况,探讨WD疾病的病因、临床特点,通过采用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法结合DNA测序方法对13例无亲缘关系的患者及33位... 为了研究Wilson病(wilson disease,WD)基因突变的类型和发生情况,探讨WD疾病的病因、临床特点,通过采用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法结合DNA测序方法对13例无亲缘关系的患者及33位亲属进行ATP7B基因所有外显子及5′端非转录区突变检测.33例DNA标本确认11种基因突变,其中包括9种错义突变(p.R778L、p.R919G、p.T1178A、p.T977M、p.K1010Q、p.C490TERM、p.A874P、p.G943S、p.G943D),1种缺失突变(2790delCAT),1种剪切位点改变(c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)).在13个家系中,发现4例R778L突变,2例2790delCAT,均为杂合型突变,涉及17个等位基因,本组检出率为70.8%(17/24).DHPLC-测序法是WD疾病基因突变筛查较为快捷、全面而且敏感的方法.WD基因突变存在热点区分别为3、8、12号外显子.2790delCAT、p.K1010Q、c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)是ATP7B基因新突变类型,p.S406A、p.V456L、p.V1140A、p.R952K是中国人比较常见的多态类型. 展开更多

关键词 肝豆状核变性 变性高效液相色谱(dhplc) 血清铜蓝蛋白 多态 遗传

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DHPLC对猪肌肉组织差异表达EST的鉴定 被引量：3

2

作者 王翀 陈瑶生 +2 位作者 李重生 黄志宏 田兴国 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1085-1089,共5页

采用DHPLC系统和LabWork4 0图像分析软件 ,对大白猪和广东地方品种蓝塘猪眼肌组织差异显示EST进行鉴定 ,两种方法均证实了差异显示条带的真实性。结果表明 :用DHPLC系统能够准确而简捷的检测不同组织中mRNA表达的差异 ,是 1种鉴定基因... 采用DHPLC系统和LabWork4 0图像分析软件 ,对大白猪和广东地方品种蓝塘猪眼肌组织差异显示EST进行鉴定 ,两种方法均证实了差异显示条带的真实性。结果表明 :用DHPLC系统能够准确而简捷的检测不同组织中mRNA表达的差异 ,是 1种鉴定基因表达差异的有效方法 ,在研究基因表达 。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱(dhplc) MRNA 差异表达 猪

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线粒体DNA1555A>G异质性突变大家系的临床与实验分析 被引量：5

3

作者 沈姗姗 王琳凯 +4 位作者 刘畅 徐志勇 胡玉华 高国凤 王沙燕 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期435-439,共5页

目的研究线粒体DNA 1555A>G异质性突变大家系,异质性水平及其与耳聋临床表型的关系,以及异质性的代代传递情况。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术、直接测序法及变性高效液相色谱技术(Denaturing High Performance Liq... 目的研究线粒体DNA 1555A>G异质性突变大家系,异质性水平及其与耳聋临床表型的关系,以及异质性的代代传递情况。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术、直接测序法及变性高效液相色谱技术(Denaturing High Performance Liquid Chromatography,DHPLC)检测家系成员的1555A>G突变异质性并定量,结合其临床表型进行分析。结果临床资料显示,该家系的临床表型从正常到重度、极重度耳聋,呈现多样化。实验室检测结果为:经酶切和测序共检测出6个异质性突变、10个同质性突变和2个野生型;DHPLC定量分析结果显示,异质性水平介于11.9%-97.9%之间,并且在酶切和测序结果显示为野生型或同质性突变的样品中又发现了4个异质性突变。结论异质性水平与耳聋程度/氨基糖甙类药物敏感度之间有很强的关联性(r=0.758,P<0.001)。此外,母亲的异质性水平控制或影响着子代的异质性,提示线粒体DNA异质性代代传递过程中可能存在一种规律。 展开更多

关键词 线粒体DNA 1555A〉G突变 异质性 耳聋 临床表型 变性高效液相色谱（dhplc）

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霍乱弧菌多重PCR-DHPLC分型方法建立 被引量：3

4

作者 黄晓蓉 邵碧英 +4 位作者 王传得 郑晶 曹际娟 陈彬 吴谦 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期721-722,共2页

目的建立霍乱弧菌多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)快速分型方法。方法分别合成扩增霍乱弧菌胶原酶基因(vcc基因)、O1群和O139群的毒力基因(ctxA基因和tcpA基因)以及O139群毒力基因(LPSgt基因),并对4对引物的PCR退火温度进行优化,建立多... 目的建立霍乱弧菌多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)快速分型方法。方法分别合成扩增霍乱弧菌胶原酶基因(vcc基因)、O1群和O139群的毒力基因(ctxA基因和tcpA基因)以及O139群毒力基因(LPSgt基因),并对4对引物的PCR退火温度进行优化,建立多重PCR-DHPLC分型方法。结果4种基因可同时被扩增,应用多重PCR-DHPLC方法对霍乱弧菌进行分型的结果与预期的一致。结论多重PCR-DHPLC分型方法可用于快速、准确地鉴定细菌纯培养物是否为霍乱弧菌以及具体的菌群。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 多重PCR 变性高效液相色谱(dhplc)

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用DHPLC技术进行特发性卵巢早衰易感基因TGFBR3的突变分析 被引量：3

5

作者 李桃 覃春容 +3 位作者 姚吉龙 任晓慧 唐雪莲 吴维青 《中国优生与遗传杂志》 2015年第11期32-34,共3页

目的应用DHPLC技术对TGFBR3基因12外显子多态进行准确、快速、高通量的检测。方法选择2009年2月至2012年12月在南方医科大学附属深圳市妇幼保健院妇产科确诊的卵巢早衰患者110例为卵巢早衰组,以月经规则、性激素检查在正常范围内的年龄... 目的应用DHPLC技术对TGFBR3基因12外显子多态进行准确、快速、高通量的检测。方法选择2009年2月至2012年12月在南方医科大学附属深圳市妇幼保健院妇产科确诊的卵巢早衰患者110例为卵巢早衰组,以月经规则、性激素检查在正常范围内的年龄匹配的妇女110例为对照组。针对TGFBR3基因12外显子的编码区及剪接位点设计变性高效液相色谱分析的引物,构建TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析方法。结果建立的针对TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析方法能够快速、准确地区分已知变异序列和野生型序列,并且灵敏性和稳定性都好。收集110例特发性卵巢早衰和110例正常人标本,对这些标本进行TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析检测,检测到2个的单核苷酸多态性((SNP)。2022 T/C位点多态性:卵巢早衰组CC、TC、TT基因型频率分别为0.9%(1/110)、22.7%(25/110)、76.4%(84/110),C、T等位基因频率分别为12.3%(27/220)、87.7%(193/220);对照组CC、TC、TT基因型频率分别为0、9.0%(10/110)、90.9%(100/110),C、T等位基因频率分别为4.5%(10/220)、95.5%(210/220);两组间各基因型频率及等位基因频率分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2161-75C/T多态性位点基因频率、等位基因频率卵巢早衰组和对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论本课题研究中建立的针对TGFBR3基因12外显子的变性高效液相色谱分析检测方法能够快速、准确地将TGFBR3基因12外显子变异序列与野生型序列区分,并且实验的重复性和再现性好、稳定性高,体系可靠。本研究建立的基于PCR的变性高效液相色谱分析TGFBR3基因12外显子突变方法是一种高通量、高灵敏度、半自动化、快速、准确、经济的突变检测技术。 展开更多

关键词 卵巢早衰 TGFBR3 基因多态 变性高效液相色谱(dhplc)

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DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统的建立

6

作者 孙宏钰 蔡贵庆 +4 位作者 陆惠玲 刘超 陈丽娴 李向阳 伍新尧 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期265-270,共6页

目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统。方法mtDNA控制区序列(包括HVⅠ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析。对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等... 目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统。方法mtDNA控制区序列(包括HVⅠ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析。对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等)进行优化。对100个不同类型差异序列的组合配对以检验该方法的检测效力。结果10组序列相同的样本配对DHPLC图谱均只显示1个样品峰。对序列相差1个碱基～7个碱基、插入(/缺失)1个碱基、插入(/缺失)2个碱基等类型的90个扩增片段组合,用DHPLC进行分析,均得到≥2个样本峰的DHPLC图谱,序列差异检出率达100%。该技术可检测的异质性DNA成分的最小百分含量为10%。结论DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统快速、经济和实用,在检测mtDNA异质性方面较直接测序更灵敏。 展开更多

关键词 线粒体DNA(mtDNA) 变性高效液相色谱(dhplc) 多态性 异质性

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多重PCR联合DHPLC诊断21三体综合征方法的建立 被引量：1

7

作者 江帆 袁玉枝 +5 位作者 陈桂兰 屈艳霞 杨烨 王霞 唐芳 冯善伟 《中国优生与遗传杂志》 2012年第8期31-32,39,共3页

目的初步建立多重PCR联合DHPLC技术检测21-三体综合征的方法。方法针对21号染色体上特异的3个STR位点(D21S1435、D21S1411、D21S11)设计引物,对100例外周血标本(其中25例21三体标本)提取基因组DNA进行多重PCR扩增,得到的PCR产物通过DHPL... 目的初步建立多重PCR联合DHPLC技术检测21-三体综合征的方法。方法针对21号染色体上特异的3个STR位点(D21S1435、D21S1411、D21S11)设计引物,对100例外周血标本(其中25例21三体标本)提取基因组DNA进行多重PCR扩增,得到的PCR产物通过DHPLC仪进行结果分析。结果 DHPLC分析100例标本中21例为21-三体标本,其中20例21-三体标本的诊断结果与染色体核型分析结果一致,DHPLC技术检测21-三体异常灵敏度和特异度分别为80%,98.67%。结论 DHPLC技术诊断外周血标本结果与染色体核型诊断结果具有同一性,DHPLC技术可以对21三体综合症作出快速、较为准确的诊断。 展开更多

关键词 短串联重复序列(STR) 多重PCR 变性高效液相色谱(dhplc) 21-三体

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DHPLC与ABI377系统的微卫星检测效果比较 被引量：1

8

作者 王翀 李加琪 +2 位作者 凌飞 张豪 陈瑶生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期96-99,共4页

利用猪SCAU-LL资源群,根据猪USDA-MARC2.0连锁图谱,选取4号染色体上微卫星标记SW 1678,用变性高效液相色谱(DHPLC)系统和AB I377系统分析了F2代64个个体的微卫星多态性,比较了这2个分析系统在进行微卫星分型中的效率和利弊.2个系统检测... 利用猪SCAU-LL资源群,根据猪USDA-MARC2.0连锁图谱,选取4号染色体上微卫星标记SW 1678,用变性高效液相色谱(DHPLC)系统和AB I377系统分析了F2代64个个体的微卫星多态性,比较了这2个分析系统在进行微卫星分型中的效率和利弊.2个系统检测到57个样品的基因型相同,有相同的2个样品未检测到产物.另外有3个样品,DHPLC检测出基因型,AB I377未检测到,有2个样品AB I377检测出基因型,而DHPLC未检测到.2个系统检测微卫星多态性的相同率达92.2%,DHPLC未检出率6.3%,AB I377未检出率7.8%,2个系统检测的灵敏度和准确度基本接近,但是DHPLC的检测成本低于AB I377的检测成本. 展开更多

关键词 猪 微卫星标记 变性高效液相色谱(dhplc) ABI377

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海南黎族人缺血性脑卒中与MTHFR基因多态性关系的研究 被引量：1

9

作者 卢锡林 莫照龙 +4 位作者 姚晓黎 陈飞 周世锋 周少珑 李才明 《中国热带医学》 CAS 2006年第12期2110-2112,共3页

目的探讨N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与海南黎族缺血性脑卒中(IS)的关系。方法运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测87例海南黎族IS组及83例对照组的MTHFR基因多态性。结果IS患者的MTHFR基因TT、CT、CC基因型频率分别... 目的探讨N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与海南黎族缺血性脑卒中(IS)的关系。方法运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测87例海南黎族IS组及83例对照组的MTHFR基因多态性。结果IS患者的MTHFR基因TT、CT、CC基因型频率分别为8.0%、64.4%、27.6%,T等位基因频率为40.2%,C等位基因频率59.8%;对照组的TT、CT、CC基因型频率分别为3.6%、39.8%、56.6%,T等位基因频率为23.5%,C等位基因频率76.5%,两组的TT基因型及T等位基因频率比较差异有显著性意义。结论MTHFR基因多态性与海南黎族IS有一定关系,MTHFR基因可能是IS的易感基因,对人群进行大规模筛选,早期对TT和CT基因型的人群进行维生素干预,对预防IS的发生有一定价值。 展开更多

关键词 N^5 N^10-亚甲基四氢叶酸还原酶 缺血性脑卒中(IS) 基因多态性 变性高效液相色谱(dhplc)

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荷斯坦奶牛凝血因子Ⅺ缺乏症的PCR-DHPLC检测方法的建立

10

作者 王振男 吴晓薇 +4 位作者 梁梓森 朱道中 刘志玲 刘中勇 詹勋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期102-104,191,共4页

为了有效地检测荷斯坦奶牛凝血因子Ⅺ缺乏症,试验以制备的纯合突变、野生型基因为模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立多聚酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)的检测方法,确定最佳的检测条件,并用建立的方法对120个样本进行... 为了有效地检测荷斯坦奶牛凝血因子Ⅺ缺乏症,试验以制备的纯合突变、野生型基因为模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立多聚酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)的检测方法,确定最佳的检测条件,并用建立的方法对120个样本进行检测,再与传统的方法进行比较和验证。结果表明:所建立的PCR-DHPLC方法可以用于检测牛凝血因子Ⅺ缺乏症,与传统方法的检测结果一致。说明PCR-DHPLC方法是一种高通量、准确性高、特异性好的检测方法。 展开更多

关键词 凝血因子XI 携带者 变性高效液相色谱(dhplc)

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金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立

11

作者 陈彬 王颖 +4 位作者 郑晶 黄晓蓉 林杰 彭华毅 邵碧英 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期172-177,共6页

本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR... 本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 聚合酶链式反应(PCR) 变性高效液相色谱(dhplc)

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MDA-DHPLC技术在PGS中的应用

12

作者 林德伟 吴炜霖 +3 位作者 曾嵘 谢素嫣 谢妍 杨冬宇 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第15期2875-2878,共4页

目的：评估丙二醛变性高效液相色谱法在胚胎移植过程中的临床价值。方法：收集我院生殖中心2010年2月-2012年3间未做移植的废弃胚胎，由D2胚胎培养到D3胚胎期，提取遗传物质并进行PRC扩增，采用高形态学评分的D3作为对照，高效液相色谱... 目的：评估丙二醛变性高效液相色谱法在胚胎移植过程中的临床价值。方法：收集我院生殖中心2010年2月-2012年3间未做移植的废弃胚胎，由D2胚胎培养到D3胚胎期，提取遗传物质并进行PRC扩增，采用高形态学评分的D3作为对照，高效液相色谱法测定遗传DNA过氧化产物丙二醛（MDA）的含量。结果：多核Ⅰ组D2期卵裂球核≥2个，共24枚胚胎，DNA过氧化产物丙二醛（MDA）的含量5．32±0．19μmol／L，对比正常胚胎0．67±0．08μmol／1有显著差异（P〈0．05）。多核Ⅱ组D2期卵裂球核=2，共19枚胚胎，MDA的含量4．12±0．22μmol／L，对比正常胚胎0．67±0．08μmol／1有显著差异（P〈0．05）。Ⅰ组与Ⅱ组间没有统计学差异。然而，空泡胚胎与非空泡胚胎之间MDA并没有差异。结论：多核D2期胚胎培养到D3期会产生很高异常率，因此临床上应减少使用此种进行移植。 展开更多

关键词 种植前遗传学筛查(PGS) 丙二醛(MDA) 变性高效液相色谱(dhplc)

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沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法建立 被引量：1

13

作者 张东方 袁飞 +5 位作者 王娉 杨海荣 胡玥 赵勇胜 陈颖 葛毅强 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1515-1518,共4页

目的建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法。方法采用16S～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清... 目的建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法。方法采用16S～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清学和生化分型结果比较。结果 89株沙门菌共分为12个dHPLC型(D型);所有沙门菌均有1个相同色谱峰,克隆测序结果表明,其片断大小为600 bp,其他8种食源性致病菌对照株无此色谱峰,应为沙门菌16S～23S rRNA基因序列的特征性条带,分型结果与血清学差异较大,与生化分型结果有一定一致性。结论所建立的沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法具快速、操作方便、重复性好、成本低廉、高通量和自动化的特点。 展开更多

关键词 聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dhplc) 沙门菌 16S^23SrRNA基因区间 分子分型

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