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一种犬源干扰素α制备工艺开发及体内外活性研究
1
作者 于丹 孙盼盼 +2 位作者 孙文琪 李晓颖 李德山 《生物化工》 CAS 2024年第3期98-101,共4页
目的:开发一种高活性的犬源干扰素α(CIFNα)制备工艺。方法:构建CIFNα表达载体,筛选表达菌株,通过诱导表达包涵体,采用优化后的纯化工艺对包涵体进行纯化,获得高纯度CIFNα,通过体外活性测定及体内攻毒治疗实验,考察CIFNα的生物活性... 目的:开发一种高活性的犬源干扰素α(CIFNα)制备工艺。方法:构建CIFNα表达载体,筛选表达菌株,通过诱导表达包涵体,采用优化后的纯化工艺对包涵体进行纯化,获得高纯度CIFNα,通过体外活性测定及体内攻毒治疗实验,考察CIFNα的生物活性。结果:制备的CIFNα纯度在95%以上,体外活性测定中比活为8.39×10~6 U/mg,优于已经上市的CIFNα;体内攻毒结果表明,制备的CIFNα具有显著的治疗犬细小病毒疾病的作用。结论:开发了操作简便、安全、有效、质量可靠的CIFNα制备工艺,适用于商业规模化生产,为CIFNα的实际生产和应用提供了技术支持。 展开更多
关键词 犬源干扰素α 包涵体 变性复性 层析
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一种发现新基因的高效方法——cDNA文库的复性式均一化技术
2
作者 王强 刘秋云 李宝健 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2001年第2期76-83,共8页
由复性式均一化技术制作的均一化cDNA文库(equalized cDNA li-brary,normalized cDNA library)是近年来发展起来的一种获得EST、发现新基因的高效平台。本文就该技术的原理、方法比较、存在问题和展望进行了阐述。
关键词 CDNA文库 均一化技术 分子生物学 杂交链 变性复性 文库制备
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基因重组蛋白L243诱导表达包涵体的变性、复性与纯化 被引量：12
3
作者 麻晓庆 王继红 +3 位作者 韩晓曦 褚丹 张丕桥 李庆伟 《吉林医药学院学报》 2007年第1期1-3,共3页
目的对来自于日本七鳃鳗的基因重组蛋白L243包涵体进行变性、复性与纯化,以获得成分均一的活性蛋白。方法以6mol/L尿素为变性剂,以0.1mol/L氧化型谷胱甘肽及0.9mol/L还原型谷胱甘肽为复性剂,对构建于pET23b的日本七鳃鳗L243基因在大肠杆... 目的对来自于日本七鳃鳗的基因重组蛋白L243包涵体进行变性、复性与纯化,以获得成分均一的活性蛋白。方法以6mol/L尿素为变性剂,以0.1mol/L氧化型谷胱甘肽及0.9mol/L还原型谷胱甘肽为复性剂,对构建于pET23b的日本七鳃鳗L243基因在大肠杆菌Rosetta中表达的包涵体进行了的变性、复性与组氨酸亲和层析纯化。结果经变性、复性后,获得了均质的L243纯化蛋白,该蛋白的复性率达80%。结论成功对上述重组蛋白包涵体进行了变性、复性及纯化,为后续与此蛋白相关的生物活性测定奠定了物质基础。 展开更多
关键词 重组蛋白 包涵体 亲和层析 变性、复性
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拟南芥AtGrp7 RRM结构域的纯化及其结构与结合的初步分析(英文)
4
作者 迟秀娟 乔晓亚 +4 位作者 刘颖 刘惠丽 陈雷 王际辉 艾选军 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-14,共14页
富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥(Arabidopsis thaliana)调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质... 富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥(Arabidopsis thaliana)调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质的混合信号峰.为解决常规纯化中的杂质问题,对AtGrp7_(1-90)应用了变性-复性两步纯化方法. AtGrp7 RRM结构域的~1H-^(15)N HSQC指纹谱和CS-Rosetta模型结构表明快速稀释重折叠后其结构完全恢复.等温滴定量热法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定实验进一步证实,重折叠后AtGrp7_(1-90) RRM结构域具有正确结合RNA/DNA的功能. 展开更多
关键词 变性-复性 快速稀释 核磁共振(NMR) AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域 结合分析
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烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备 被引量：5
5
作者 郝婵娟 柴宝峰 +2 位作者 王伟 孙毅 梁爱华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期337-341,共5页
将烟草天蛾Manducasexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达。表达菌株经0.5mmolLIPTG诱导6～8h后,几丁质酶表达并形成包涵体。在Ni2+-NTA亲和柱上经变、复性和纯化,得到可溶的几丁质酶... 将烟草天蛾Manducasexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达。表达菌株经0.5mmolLIPTG诱导6～8h后,几丁质酶表达并形成包涵体。在Ni2+-NTA亲和柱上经变、复性和纯化,得到可溶的几丁质酶。表达产物经Western印迹鉴定。采用切胶回收的方法切割回收包涵体,并将回收产物免疫新西兰大白兔,ELISA检测抗体效价达1∶20000。Western印迹检测证明抗体特异性良好。 展开更多
关键词 烟草天蛾 几丁质酶 原核表达 变性和复性 WESTERN印迹 抗体制备
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变性再复性方法提取高纯度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鉴定 被引量：3
6
作者 孙宇 封瑞 +2 位作者 孙威 胡慧媛 郝丽英 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期777-780,共4页
目的探寻诱导谷胱甘肽转移酶(GST)与Cav1.2钙通道片段CT1重组的易形成包涵体的大分子融合蛋白的提取与纯化的方法。方法在E.coli BL21中转化入p GEX-6p-3/CT1重组质粒并诱导表达,采用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER分离纯... 目的探寻诱导谷胱甘肽转移酶(GST)与Cav1.2钙通道片段CT1重组的易形成包涵体的大分子融合蛋白的提取与纯化的方法。方法在E.coli BL21中转化入p GEX-6p-3/CT1重组质粒并诱导表达,采用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER分离纯化GST-CT1融合蛋白,用Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白及其生物活性。结果应用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER能够分离得到高纯度的易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白,且分离纯化的GST-CT1融合蛋白具有与钙调蛋白结合的生物活性。结论操作简易的GST包涵体变性复性法能够针对易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白进行分离和纯化,且得到的蛋白具有生物学活性。 展开更多
关键词 包涵体 变性再复性 钙离子通道
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重组人干细胞因子的纯化 被引量：2
7
作者 吴军 巩新 +2 位作者 唱韶红 赵志虎 马清钧 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期821-826,共6页
干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血生长因子 ,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、贫血和其它血液病的治疗上具有良好的应用前景 .为建立一种实用的rhSCF制备工艺 ,从表达rhSCF的工程菌分离包涵体 ,用尿素变性 ,低浓度尿... 干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血生长因子 ,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、贫血和其它血液病的治疗上具有良好的应用前景 .为建立一种实用的rhSCF制备工艺 ,从表达rhSCF的工程菌分离包涵体 ,用尿素变性 ,低浓度尿素溶液稀释复性 .复性液中的rhSCF经离子交换层析吸附、浓缩 ,凝胶排阻层析分离去除共价二聚体和疏水层析精纯化 ,获得纯化的rhSCF .纯化的rhSCF纯度大于 95 % ,回收率为 4 7% ,可促进人红白血病细胞TF - 1的生长 ,比活性为 0 .9× 10 6U mg ,与英国NIBSC的rhSCF标准品相似 .上述结果表明 ,所建立的制备高纯度rhSCF工艺高效简便 。 展开更多
关键词 人干细胞因子 表达与纯化 变性与复性
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变性一定会导致酶永久失活吗 被引量：1
8
作者 李福琴 《中学生物学》 2015年第2期6-7,共2页
重点阐述酶分子折叠过程、酶稳定的分子原因、酶分子的变性与复性,进而说明了温度对酶活性的影响。
关键词 温度 酶活性 变性与复性
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酸变性-复性DNA的AFM初步研究
9
作者 李建伟 田芳 +4 位作者 王琛 裘晓辉 王乃新 白春礼 曹恩华 《电子显微学报》 CAS CSCD 1997年第6期706-709,共4页
本文采用压缩空气吹展ＤＮＡ的制样方法，使得ＤＮＡ链在云母表面大致向着同一方向充分舒展，为ＤＮＡ线度的ＡＦＭ测量打下了基础。对λＤＮＡＨｉｎｄⅢ依次进行了酸变性、复性、ＤＮａｓｅⅠ降解处理，并分离一种抗内切酶降解的组分... 本文采用压缩空气吹展ＤＮＡ的制样方法，使得ＤＮＡ链在云母表面大致向着同一方向充分舒展，为ＤＮＡ线度的ＡＦＭ测量打下了基础。对λＤＮＡＨｉｎｄⅢ依次进行了酸变性、复性、ＤＮａｓｅⅠ降解处理，并分离一种抗内切酶降解的组分。ＡＦＭ研究表明该组分可能是一种新的多链ＤＮＡ。 展开更多
关键词 DNA AFM 酸变性-复性 脱氧核糖核酸
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