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hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
倪芳
鲁茁壮
+3 位作者
瞿成奎
胡泽斌
王立生
汪思应
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2006年第1期19-22,共4页
目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(Gre...
目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。
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关键词
末端转移酶/
遗传学
腺病毒科
发光
蛋白质
类
/
遗传学
下载PDF
职称材料
GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究
被引量：
1
2
作者
韩飞
杨静
+3 位作者
余文富
尹一飞
武胜昔
凌树才
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期159-165,170,共8页
目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰...
目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片进行尼氏染色、免疫荧光染色,观察GAD67阳性神经元在嗅球各细胞层中的分布比例及与bNOS共存。结果:GAD67阳性神经元在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层所占比例分别为:(42.98±0.92)%、(23.64±0.84)%、(77.75±0.84)%,bNOS阳性神经元在球旁细胞层、僧帽细胞层有强阳性分布,而在颗粒细胞层几乎没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。结论:GAD67阳性神经元主要分布于嗅小球层与颗粒细胞层,GAD67与bNOS仅少数共存于嗅小球层。
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关键词
谷氨酸脱羧酶/
遗传学
发光
蛋白质
类
/
遗传学
嗅球/解剖
学
和组织
学
小鼠
基因敲除
神经元
一氧化氮合酶
GAD67-GFP
GAD67
bNOS
共存
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职称材料
题名
hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
倪芳
鲁茁壮
瞿成奎
胡泽斌
王立生
汪思应
机构
安徽医科大学病理生理学教研室
军事医学科学院放射医学研究所
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2006年第1期19-22,共4页
基金
国家973课题(编号:2004CB518801)
国家自然科学基金资助(编号:30470735)
安徽省人才开发基金资助(编号:2002Z035)
文摘
目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。
关键词
末端转移酶/
遗传学
腺病毒科
发光
蛋白质
类
/
遗传学
Keywords
telomerase/genetics
adenoviridae
luminescent proteins/genetics
分类号
R345.9 [医药卫生—基础医学]
R373.1
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职称材料
题名
GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究
被引量：
1
2
作者
韩飞
杨静
余文富
尹一飞
武胜昔
凌树才
机构
浙江大学医学院人体解剖与细胞生物学系
衢州职业技术学院医学院
第四军医大学人体解剖与组织胚胎学系
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期159-165,170,共8页
基金
国家自然科学基金(30570586)资助项目
文摘
目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片进行尼氏染色、免疫荧光染色,观察GAD67阳性神经元在嗅球各细胞层中的分布比例及与bNOS共存。结果:GAD67阳性神经元在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层所占比例分别为:(42.98±0.92)%、(23.64±0.84)%、(77.75±0.84)%,bNOS阳性神经元在球旁细胞层、僧帽细胞层有强阳性分布,而在颗粒细胞层几乎没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。结论:GAD67阳性神经元主要分布于嗅小球层与颗粒细胞层,GAD67与bNOS仅少数共存于嗅小球层。
关键词
谷氨酸脱羧酶/
遗传学
发光
蛋白质
类
/
遗传学
嗅球/解剖
学
和组织
学
小鼠
基因敲除
神经元
一氧化氮合酶
GAD67-GFP
GAD67
bNOS
共存
Keywords
Glutamate decarboxylase/genet
Luminescent proteins/genet
Olfactory bulb/anat
Mice
knockout
Neurons
Nitric oxide synthase
GAD67-GFP
GFP
bNOS
分类号
R338.3 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定
倪芳
鲁茁壮
瞿成奎
胡泽斌
王立生
汪思应
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
2
GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究
韩飞
杨静
余文富
尹一飞
武胜昔
凌树才
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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职称材料
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