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RT-PCR检测猪瘟病毒初探 被引量：24
1
作者 罗廷荣 波丹 +7 位作者 黄宪高 梁家权 刘芳 黄伟坚 秦爱珍 温荣辉 陆芹章 余克伦 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2001年第1期17-20,共4页
本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 ... 本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 1个猪场共 1 3份病料进行检测。结果从博白县和贵港市的 1 1份材料中检测到 HCV的核酸。 展开更多
关键词 反转录-聚合酶链反应 猪瘟病毒 检测
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四川部分猪场PEDV、TGEV、GARV和PKV感染状况调查 被引量：23
2
作者 曹恭貌 张斌 +2 位作者 岳华 费磊 任玉鹏 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期118-122,共5页
为了解四川省部分猪场4种猪腹泻病毒的感染情况,为本地区猪腹泻的诊断和治疗提供依据,采用RT-PCR方法,分别对来自四川省成都、绵阳、德阳、眉山、资阳、雅安、内江、宜宾、达州等地9个规模化猪场的90份临床健康猪和130份腹泻猪的粪便样... 为了解四川省部分猪场4种猪腹泻病毒的感染情况,为本地区猪腹泻的诊断和治疗提供依据,采用RT-PCR方法,分别对来自四川省成都、绵阳、德阳、眉山、资阳、雅安、内江、宜宾、达州等地9个规模化猪场的90份临床健康猪和130份腹泻猪的粪便样品,进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪嵴病毒(PKV)和猪A群轮状病毒(GARV)的检测。结果表明,在所有9个猪群中PEDV和PKV检出率达100%(9/9),且在部分猪群腹泻样本中的检出率可达到60%以上,表明此2种病原在检测猪场感染比较普遍。此外腹泻样本中TGEV和GARV阳性率分别为11.54%(15/130)、7.69%(10/130),表明该2种病原在本地区猪场仍有感染情况存在。对PKV的检测结果表明腹泻猪粪便中PKV的阳性率为43.85%(57/130),显著高于外表健康猪粪便样本23.33%(21/90),且PEDV和PKV的混合感染在4种病原混合感染类型中所占比例最大,推断PKV与猪只腹泻具相关性,PEDV和PKV具有协同致病的可能。 展开更多
关键词 病毒性腹泻 混合感染 反转录-聚合酶链反应 检测
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莪术油对人乳头状瘤病毒的抑制作用 被引量：18
3
作者 张小燕 丁晓萍 +3 位作者 叶梅 徐海燕 卞美璐 陈庆云 《武警医学》 CAS 2014年第1期19-23,共5页
目的探讨莪术油对人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16亚型的抑制作用。方法以不同浓度的含莪术油培养液体外培养宫颈癌细胞系SiHa、CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流... 目的探讨莪术油对人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16亚型的抑制作用。方法以不同浓度的含莪术油培养液体外培养宫颈癌细胞系SiHa、CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞术检测不同浓度莪术油对细胞增殖的影响;应用反转录-聚合酶链反应技术(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测人乳头状瘤病毒HPV16亚型E6E7的表达。结果不同浓度的莪术油可以抑制细胞的增殖;莪术油作用于SiHa细胞,G1期细胞减少(P<0.05),G2、S期细胞增加(P<0.01),细胞阻滞于G2、S期。莪术油作用于CaSki、H8细胞,G1期细胞减少(P<0.01),S期细胞增加(P<0.01),使细胞阻滞于S期。加药组SiHa、CaSki和H8细胞凋亡率高于对照组,有统计学差异(P<0.01,P<0.01,P<0.05);三种细胞HPV16E6E7基因片段mRNA表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论莪术油在体外抑制宫颈癌细胞系SiHa、CaSki和宫颈永生化细胞H8增殖,其机制可能是通过抑制HPV16E6E7表达而抑制细胞生长。 展开更多
关键词 莪术油 人乳头状瘤病毒 反转录-聚合酶链反应
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基质金属蛋白酶-3在强直性脊柱炎中的作用和意义探讨 被引量：14
4
作者 古洁若 张汉伟 +3 位作者 赵丽珂 黄烽 颜光美 余得恩 《中国药物与临床》 CAS 2004年第4期270-276,共7页
目的通过比较强直性脊柱炎(AS)病人抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗体药物(remicade)治疗前后的膝关节滑膜细胞的基因谱变化,找出缓解AS病情相关的主要基质金属蛋白酶(MMP)-3,并探讨MMP-3潜在调控的作用和在AS发病中的作用机制和意义。... 目的通过比较强直性脊柱炎(AS)病人抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗体药物(remicade)治疗前后的膝关节滑膜细胞的基因谱变化,找出缓解AS病情相关的主要基质金属蛋白酶(MMP)-3,并探讨MMP-3潜在调控的作用和在AS发病中的作用机制和意义。方法从AS病人在remicade治疗前和治疗3个月后的关节滑膜细胞的基因表达谱(用含1176基因的cDNA微阵列检测)结果中筛选的靶基因即差异表达最显著的MMP-3为特异性刺激因子,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测它诱导健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)的炎症相关基因TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结果比较AS病人治疗前后的关节滑膜细胞基因差异表达的结果,MMP-3治疗后下调最显著(P=0.0147)。与MMP-3聚类在一起的基因有111个,和MMP-3相关性最强的基因是金属蛋白酶抑制剂前体(TIMP)-1;MMP-3能显著诱导PBMC的TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结论在remicade治疗AS过程中,下调MMP-3是最重要的环节之一;通过检测MMP-3在关节滑膜细胞组织中的表达水平可作为AS诊断和病情进展监控的参考指标;MMP-3下调,可能使TNF-TNFR2-JNK-AP-1信息通道的激活状态减弱,从而减少致炎因子的释放,调整异常的基质降解和血管形成等病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏的作用。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 基质金属蛋白酶-3 REMICADE 反转录-聚合酶链反应 MMP-3 关节滑膜细胞 外周血单个核细胞 金属蛋白酶抑制剂 单克隆抗体药物 (TNF)-Α 抗肿瘤坏死因子 TNF-α c-fos c-jun 基因差异表达 治疗前后 基因表达谱
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2015年-2017年广西规模化猪场主要病毒性疫病流行调查 被引量：13
5
作者 贺会利 李军 +6 位作者 潘艳 胡帅 钟舒红 冯世文 柳锋 谢永平 陈泽祥 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期116-120,共5页
为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)... 为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的病料进行病原学检测。结果显示,CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PCV-3、TGEV和PEDV的阳性率分别是2.06%(13/632)、14.43%(192/1331)、12.10%(88/727)、14.32%(132/922)、53.85%(42/78)、10.87%(20/184)和32.00%(72/225)。PRV、TGEV和PEDV的感染率呈逐年上升趋势,PCV-2的感染率呈逐年递减趋势。二重感染以PCV-2和其他病毒感染为主,其中PRRSV和PCV-2的二重感染率最高,平均感染率为2.93%。CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PEDV的感染率在冬季比较高,分别为3.75%、23.86%、19.02%、27.73%和57.78%。检测结果表明,PRRSV和PCV-2是目前对广西规模化猪场危害较为严重的主要病毒性疫病。PCV-3作为一种新发现病毒,引起母猪皮炎肾病综合征与繁殖障碍和仔猪腹泻,对养猪业造成了一定的威胁。规模化猪场流行的腹泻性病毒主要是PEDV和TGEV。 展开更多
关键词 规模化猪场 病毒性疫病 聚合酶链反应 反转录-聚合酶链反应 调查
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不同时期有氧运动对大鼠脑衰老和额叶NCAM表达的影响 被引量：13
6
作者 林雪灵 李雪 +4 位作者 邓文骞 王璐 杨澎湃 张业廷 袁琼嘉 《成都体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2014年第6期62-67,共6页
目的:探讨D-半乳糖致衰老的SD大鼠在衰老前和衰老过程中进行有氧运动对其脑衰老和额叶NCAM表达的影响。方法:3月龄雄性SD大鼠60只随机分成运动预处理组(SD组)、衰老组(ND组)、生理盐水对照组(NNa组)、衰老过程中有氧运动干预组(NDs组),n... 目的:探讨D-半乳糖致衰老的SD大鼠在衰老前和衰老过程中进行有氧运动对其脑衰老和额叶NCAM表达的影响。方法:3月龄雄性SD大鼠60只随机分成运动预处理组(SD组)、衰老组(ND组)、生理盐水对照组(NNa组)、衰老过程中有氧运动干预组(NDs组),n=15。取材后,测定大脑皮质的SOD、GSH-Px活性和MDA含量,Real-time PCR、Western blotting检测额叶NCAM基因的表达,免疫组织化学检测其表达部位。结果:ND组大鼠较NNa组出现了嗜睡、食欲不振、行动迟缓、毛色枯黄卷曲并大量脱落等衰老体征;ND组SOD、GSH-Px活性非常显著性低于NNa组(P<0.01),MDA含量非常显著性多于NNa组(P<0.01),SD组SOD、GSH-Px活性和MDA含量较ND组均无显著性差异(P>0.05),NDs组SOD、GSH-Px活性非常显著性高于ND组(P<0.01),MDA含量非常显著性少于ND组(P<0.01);ND组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平非常显著性低于NNa组(P<0.01),SD组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平较ND组无显著性差异(P>0.05),NDs组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平非常显著性高于ND组(P<0.01),额叶NCAM的免疫产物呈棕褐色,阳性表达主要位于额叶颗粒层细胞周缘的神经元胞浆中。结论:D-半乳糖致大鼠脑衰老造模成功;运动预处理对大鼠脑衰老和额叶NCAM的表达均未产生积极作用;衰老过程中进行有氧运动有效地延缓脑衰老,显著上调额叶NCAM的表达。 展开更多
关键词 有氧运动 衰老 神经细胞粘附分子 额叶 反转录-聚合酶链反应 免疫印迹法 免疫组织化学 大鼠
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羧甲基化几丁质降低兔实验性骨关节炎软骨基质金属蛋白酶-1表达的实验研究 被引量：7
7
作者 吴宏斌 杜靖远 +1 位作者 陈凌云 杜予民 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期336-339,I002,共5页
目的　观察羧甲基化几丁质 (CMC)经关节内注射后对兔前交叉韧带切断 (ACLT)骨关节炎模型中软骨退变及软骨基质金属蛋白酶 1(MMP 1)表达及分布的影响。方法　 2 0只大白兔行单侧ACLT ,随机选取 10只作实验组 ,于术后第 1、3、5周分别给予... 目的　观察羧甲基化几丁质 (CMC)经关节内注射后对兔前交叉韧带切断 (ACLT)骨关节炎模型中软骨退变及软骨基质金属蛋白酶 1(MMP 1)表达及分布的影响。方法　 2 0只大白兔行单侧ACLT ,随机选取 10只作实验组 ,于术后第 1、3、5周分别给予 0 3ml 2 %CMC关节内注射 ,另 10只于同一时间点给予 0 3ml生理盐水关节内注射作对照组。术后第 6周处死大白兔 ,对比两组大白兔股骨髁关节软骨的大体改变和光镜下的病理改变 ,并用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学的方法检测MMP 1在软骨中的mRNA和蛋白表达。结果　实验组软骨退变的大体评分和光镜下Mankin′s评分都显著低于对照组 ,RT PCR亦显示MMP 1在实验组中的表达明显低于其在对照组中的表达。免疫组织化学显示MMP 1主要表达于软骨表层及中上层 ,实验组MMP 1表达量亦明显低于对照组。结论　CMC能明显降低骨关节炎 (OA)软骨中MMP 1的mRNA和蛋白表达水平 ,并明显降低软骨退变的程度 ,有可能成为防治OA的良好药物。 展开更多
关键词 羧甲基化几丁质 骨关节炎 软骨 基质金属蛋白酶-1 动物实验 反转录-聚合酶链反应 免疫组织化学
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兔出血症病毒与欧洲野兔综合征病毒复合RT-PCR检测方法的建立 被引量：13
8
作者 王印 杨泽晓 +3 位作者 韩雪清 汪开毓 姚学萍 白瑜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1165-1170,共6页
为建立用于兔出血症病毒(RHDV)和欧洲野兔综合征病毒(EBHSV)诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构... 为建立用于兔出血症病毒(RHDV)和欧洲野兔综合征病毒(EBHSV)诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构建的重组质粒pGM-T-EBHSV和RHDV RT-PCR产物构建的pGM-T-RHDV为模板,经过反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV和EBHSV的复合RT-PCR检测方法,并对20份临床样品和5份RHDV人工感染样品进行了检测。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和EBHSV的特异性目的片段192bp和335bp,对2种病毒的检测限度均可达到50copies的目的基因片段,兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌和沙门氏菌核酸扩增均为阴性。样品检测结果显示,5份人工感染样品的RHDV检出率为100%,20份临床样品的RHDV检测为阴性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 欧洲野兔综合征病毒 反转录-聚合酶链反应 重叠延伸PCR
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分型引物RT-PCR法在杯状病毒分子流行病学研究中的应用 被引量：12
9
作者 孙亚萍 Hiroshi Ushijima +7 位作者 谢华萍 王慧 杜曾庆 金玉 何爱华 唐景裕 姬振周 方肇寅 《国际病毒学杂志》 2006年第5期129-133,共5页
目的:应用分型引物RT-PCR法确定五个地区病毒性腹泻粪便标本中杯状病毒流行型别及感染情况。方法:对五个地区收集的<5岁病毒性腹泻粪便标本应用针对病毒壳体区域设计的四对引物(GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR、SLV5317/SLV5749、PreCA... 目的:应用分型引物RT-PCR法确定五个地区病毒性腹泻粪便标本中杯状病毒流行型别及感染情况。方法:对五个地区收集的<5岁病毒性腹泻粪便标本应用针对病毒壳体区域设计的四对引物(GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR、SLV5317/SLV5749、PreCAP1/82b)进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增诺如病毒GI和GII组、扎如、星状病毒(Astrovirus),扩增产物通过1·5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。选取部分阳性标本测序研究型别流行特点。结果:本实验从663例标本中共检出单独感染诺如病毒、扎如病毒和星状病毒阳性标本数分别为84、4、11株,同时还发现3株混合感染标本。选取24株诺如病毒阳性标本测序分析发现19株为GII/4型,2株为GII/3型,1株为GII/1型,1株为GII/13型,1株为GII/15型,4株扎如病毒中2株为SGI/1型,1株为SGII/3型,1株为SGII/1型。结论:研究表明杯状病毒是我国婴幼儿腹泻重要病原体,诺如病毒流行株为GII/4型毒株,同时存在其它型别的散在流行;福建、兰州检测到不同型别扎如病毒证明我国存在多种型别的扎如病毒感染。 展开更多
关键词 诺如病毒 扎如病毒 反转录-聚合酶链反应 序列分析
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种公猪精液中与繁殖障碍有关的6种病毒的检测 被引量：11
10
作者 孙泉云 周锦萍 +2 位作者 张维谊 曹建国 刘键 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期30-33,共4页
采用PCR和RT-PCR技术,于2006年4月～10月对上海及其周边地区的30个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品355份进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和日本脑炎... 采用PCR和RT-PCR技术,于2006年4月～10月对上海及其周边地区的30个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品355份进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和日本脑炎病毒(JEV)等6种与猪繁殖障碍有关的病毒的检测,结果表明,日本脑炎病毒检测为阴性,检出PRRSV、PRV、CSFV、PPV和PCV阳性数和阳性率分别为6份(1.69%)、9份(2.54%)、5份(1.41%)、75份(21.1%)、6份(1.69%),有一个猪场的5份样品存在PRV和PPV混合感染。 展开更多
关键词 精液 病毒 聚合酶链反应 反转录-聚合酶链反应 检测
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北京市2007年手足口病暴发疫情的病原学分析 被引量：12
11
作者 李仁清 陈丽娟 +2 位作者 张合润 王玉梅 贺雄 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期784-787,共4页
目的对北京市2007年5—7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定。方法采用RT-PCR技术，对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本，直接进行肠道病毒（EV）分型；采用RD传代细胞，对标本进行病毒分离培养，再对其阳性... 目的对北京市2007年5—7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定。方法采用RT-PCR技术，对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本，直接进行肠道病毒（EV）分型；采用RD传代细胞，对标本进行病毒分离培养，再对其阳性培养物进行EV分型。对其中部分原始标本和阳性分离物中的EV VP1区进行核苷酸序列及预测的氨基酸序列分析。结果北京市2007年发生在大兴区的2起疫情由EV71引起，其他4个区的6起疫情均由柯萨奇病毒A16型（Cox A16）引起。大兴区2起疫情的EV71都属于C基因型的C4亚型，但分别处于VP1基因亲缘性系统发生树的不同分支，其核苷酸和氨基酸分别存在3．7％和0．8％的差异；来源于顺义区的CoxA16与其他病毒分别处于不同分支，其核苷酸和氨基酸分别存在3．7％和0％的差异。结论北京市2007年手足口病疫情主要由EV71和CoxA16两种病原引起，而每种病原都存在2个或2个以上流行株病毒；且CoxA16的传播似乎较EV71更为广泛。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A16型 反转录-聚合酶链反应
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乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1基因片段的克隆、测序与表达 被引量：9
12
作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期240-244,共5页
以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+... 以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+) EcoRI/SalI位点 ,构建了重组原核表达质粒 pET 2 8a(+) NS1。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导获得高效表达 ,产物经SDS PAGE电泳结果显示 ,表达产物分子量约为 45kD。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 NS1基因 反转录-聚合酶链反应 克隆 表达
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犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用 被引量：7
13
作者 乔军 孟庆龄 +1 位作者 夏咸柱 何宏彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第1期51-54,66,共5页
根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出... 根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 反转录-聚合酶链反应 检测方法
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大鼠睡眠剥夺后下丘脑一氧化氮合酶mRNA表达的变化 被引量：7
14
作者 刘长云 季红光 +3 位作者 周建光 钱平平 沈慧 阮芳铭 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期175-178,共4页
目的观察快动眼睡眠剥夺大鼠下丘脑神经元型一氧化氮合酶 (nNOS )及诱导型一氧化氮合酶(iNOS )mRNA表达的时相变化。方法小站台水环境法剥夺大鼠睡眠 2 4h、48h及 72h后 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR )检测其下丘脑nNOS及iNOSm... 目的观察快动眼睡眠剥夺大鼠下丘脑神经元型一氧化氮合酶 (nNOS )及诱导型一氧化氮合酶(iNOS )mRNA表达的时相变化。方法小站台水环境法剥夺大鼠睡眠 2 4h、48h及 72h后 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR )检测其下丘脑nNOS及iNOSmRNA的表达。结果睡眠剥夺 2 4h组nNOSmRNA表达量显著增加 (P <0 .0 1 ) ,剥夺 48h组与对照组比较无显著差异 ,剥夺 72h组nNOSmRNA的表达量低于对照组水平 (P <0 .0 5 ) ;睡眠剥夺 2 4h和 48h组iNOSmRNA的表达量无显著变化 ,但剥夺 72h组iNOSmRNA的表达量大幅度增加 (P <0 .0 1 )。结论睡眠剥夺后NOS基因表达增加 ,可能是睡眠“反跳”现象的机理之一 ; 展开更多
关键词 睡眠剥夺 反转录-聚合酶链反应 一氧化氮合酶 下丘脑 基因表达
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白细胞介素-23、白细胞介素-17在支气管哮喘小鼠发病中的作用 被引量：10
15
作者 赵凯姝 张云峰 +3 位作者 成焕吉 孙萌 黄艳智 鲁继荣 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期639-642,共4页
目的探讨IL-23、IL-17在支气管哮喘发病中的作用。方法将30只健康雌性BALB/c小鼠随机分为3组:分别为卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(A组),OVA致敏、激发并予糖皮质激素治疗组(B组)及正常对照组(C组),每组10只。末次激发24h后,各... 目的探讨IL-23、IL-17在支气管哮喘发病中的作用。方法将30只健康雌性BALB/c小鼠随机分为3组:分别为卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(A组),OVA致敏、激发并予糖皮质激素治疗组(B组)及正常对照组(C组),每组10只。末次激发24h后,各组小鼠摘眼球取血,ELISA法检测其血清IL-17、IFN-γ和IL-23水平。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行嗜酸性粒细胞(EOS)计数。HE染色观察其肺组织病理改变。RT-PCR法检测其肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA表达。结果 1.B组多数小鼠未见明显行为学异常反应,肺组织病理损害也较A组明显减轻,BALF中EOS计数[(16.4±1.7)×107L-1]亦显著低于A组[(45.5±2.1)×107L-1](P<0.01)。2.A组小鼠血清IL-17、IL-23水平[(94.42±3.41)ng.L-1,(155.56±12.50)ng.L-1]均高于C组[(41.76±2.07)ng.L-1,(51.49±6.34)ng.L-1],IFN-γ水平[(20.91±1.59)ng.L-1]低于C组[(53.23±1.74)ng.L-1],其差异均有统计学意义(Pa<0.01);且IL-23与IL-17水平呈正相关(r=0.763,P<0.05),IL-23、IL-17与IFN-γ均无相关性。而B组小鼠血清IL-17、IL-23水平[(56.01±3.92)ng.L-1,(88.00±6.43)ng.L-1]均低于A组,IFN-γ水平[(31.66±1.29)ng.L-1]高于A组,其差异均有统计学意义(Pa<0.01)。3.A组小鼠肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达均高于C组(Pa<0.01),且IL-23mRNA与IL-17mRNA表达量呈正相关(r=0.628,P<0.05);而B组小鼠肺组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的水平均低于A组(Pa<0.01)。A组肺组织IL-17mRNA表达量与BALF中EOS计数呈正相关(r=0.849,P<0.01),IL-23mRNA表达量与BALF中EOS计数无相关性。结论 IL-17、IL-23参与哮喘大鼠的发病,IL-17可能与哮喘EOS增多有关,IL-23可能是通过诱导IL-17的产生间接促进哮喘发病,糖皮质激素对其有抑制作用。 展开更多
关键词 哮喘 白细胞介素-23 白细胞介素-17 干扰素-Γ 嗜酸性粒细胞 反转录-聚合酶链反应 糖皮质激素 小鼠
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VEGF在肾癌细胞的表达及肾上腺髓质素对其的影响 被引量：10
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作者 敦双华 王东彬 +4 位作者 乔娜 杨书文 黎玮 汪鑫 蔡文清 《山东医药》 CAS 2012年第11期36-37,共2页
目的进一步探讨肾上腺髓质素(ADM)在肾癌新生血管生成及肿瘤进展中作用。方法将生长良好的人肾癌786-o细胞随机分为三组,其中空白对照组不行特殊处理;ADM组加入100 nM的ADM;ADM受体抑制剂组同时加入100 nM的ADM+1μM受体抑制剂。以上三... 目的进一步探讨肾上腺髓质素(ADM)在肾癌新生血管生成及肿瘤进展中作用。方法将生长良好的人肾癌786-o细胞随机分为三组,其中空白对照组不行特殊处理;ADM组加入100 nM的ADM;ADM受体抑制剂组同时加入100 nM的ADM+1μM受体抑制剂。以上三组均加入RPMI1640培养基,置于含5%CO2、饱和湿度的37℃孵箱中,分别于培养24、48、72 h后收获细胞,分别采用Western blot和RT-PCR检测VEGF蛋白和VEGF mRNA表达。结果 ADM组VEGF蛋白及VEGF mRNA表达均显著高于ADM受体抑制剂组及空白对照组,尤以作用48、72 h为著(P<0.05、0.01);后两组比较无显著差异。结论 ADM可能通过调节VEGF表达参与肾癌新生血管生成、进而促进肿瘤发展。 展开更多
关键词 肾上腺髓质素 肾上腺髓质素受体抑制剂 血管内皮生长因子 反转录—聚合酶链反应 WESTERN BLOT
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大熊猫轮状病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：9
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作者 雷燕 颜其贵 +6 位作者 张志和 王成东 韩国全 王旭 冯迎春 左兰 曾晖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期490-493,共4页
根据GenBank中登录的大熊猫轮状病毒(RV)VP7基因序列,设计了1对特异性引物,建立了快速检测大熊猫RV的RT-PCR方法。用该方法对MA-104细胞增殖的大熊猫RV进行RT-PCR扩增,结果得到与试验设计相符的342bp的特异性扩增条带,而对传染性胃肠炎... 根据GenBank中登录的大熊猫轮状病毒(RV)VP7基因序列,设计了1对特异性引物,建立了快速检测大熊猫RV的RT-PCR方法。用该方法对MA-104细胞增殖的大熊猫RV进行RT-PCR扩增,结果得到与试验设计相符的342bp的特异性扩增条带,而对传染性胃肠炎病毒、大肠杆菌和沙门氏菌的扩增结果为阴性。测序比对结果证实该体系检测结果准确;该方法最低可检测出约1pg的病毒核酸;重复性试验结果显示,其检测重复性好,提示该RT-PCR方法可用于大熊猫RV的临床快速检测。 展开更多
关键词 大熊猫 轮状病毒 反转录-聚合酶链反应 检测
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荧光定量RT-PCR检测人组织因子mRNA 被引量：6
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作者 关明苏 兵吕元 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期66-68,74,共4页
目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织... 目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织标本 ,5例正常脑组织标本和人恶性胶质瘤细胞株U 2 5 1。结果　 4 2例肿瘤组织均有mRNA的表达 ,范围从 3 .6× 10 5～ 8.8× 10 7拷贝 / μgRNA ,均值为 2 .9× 10 6 拷贝 / μgRNA ,且拷贝数与恶性程度成正比 ;5例正常脑组织中 ,1例检测不出 ,其他 4例的强度为 3 .8× 10 3～ 5 .1× 10 4拷贝 / μgRNA ,均值为 6.2× 10 3拷贝 / μgRNA ;胶质瘤细胞株U 2 5 1的强度为 2 .8× 10 6 拷贝 / μgRNA。 结论　成功地建立了荧光定量检测TF基因表达方法 ,检测结果可用绝对拷贝数表示 ,定量准确可靠。 展开更多
关键词 组织因子 反转录-聚合酶链反应 细胞株 MRNA 肿瘤 荧光定量 RT-PCR
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贝类中诺如病毒的研究进展 被引量：9
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作者 寇晓霞 吴清平 +1 位作者 薛亮 张菊梅 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2014年第2期200-204,共5页
从贝类中诺如病毒的污染现状、检测组织靶点、病毒浓缩方法及效率、检测方法有效性等多个方面评述贝类中诺如病毒的研究现状、进展、急需解决的问题和未来的发展方向,以期为制定诺如病毒检测技术标准及我国贝类进出口贸易提供参考。
关键词 诺如病毒 贝类 检测靶点 病毒浓缩 反转录-聚合酶链反应
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4株NDV分离株F基因的克隆与序列分析 被引量：7
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作者 沈志强 管宇 +7 位作者 刘吉山 李峰 吴信明 赵蕾 王艳 徐守振 鲍卫超 王辉暖 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期78-83,共6页
对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与C... 对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与Clone30 基因核苷酸序列的同源性在83.6%~84.0%之间,与F48 E9典型NDV强毒株同源性在86.5.6%~88.3%之间,推导的氨基酸序列同源性与Clone 30 株在85.9%~87.0%之间,与F48E9典型NDV强毒株在89.1%~91.3%之间;利用MegAlign软件绘制了NDV 的系统发育进化树,结果表明, 3株分离强毒株为Ⅶ基因型,弱毒株为基因Ⅱ型。 展开更多
关键词 序列分析 NDV F基因 分离株 反转录-聚合酶链反应 系统发育进化树 核苷酸序列 克隆 RT-PCR 新城疫病毒 氨基酸序列 强毒株 序列同源性 裂解位点 序列比较 弱毒株 代表性 基因型 推导
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