钛合金颗粒对成骨细胞增殖、分化、表型表达的影响 被引量：3

1

作者 余存泰 徐中和 +1 位作者 杨庆铭 邓廉夫 《实用骨科杂志》 2005年第1期41-44,52,共5页

目的　观察钛合金颗粒对成骨细胞的作用。方法　成骨细胞暴露于各种浓度的钛合金颗粒 ,用 MTT比色法检测成骨细胞增殖。免疫组化染色观察 、 型胶原、TGF- β1 :末端原位标记法和流式细胞仪检测成骨细胞凋亡。双抗夹心法测上清液中 ... 目的　观察钛合金颗粒对成骨细胞的作用。方法　成骨细胞暴露于各种浓度的钛合金颗粒 ,用 MTT比色法检测成骨细胞增殖。免疫组化染色观察 、 型胶原、TGF- β1 :末端原位标记法和流式细胞仪检测成骨细胞凋亡。双抗夹心法测上清液中 型胶原 ,对硝基苯酯二钠盐比色法测上清液中碱性磷酸酶 ,放免法测上清液中骨钙素。反转录聚合酶链反应法 (RT- PCR)检测 型前胶原、 型前胶原 ,AL P,OCNm RNA表达。结果　钛合金颗粒可抑制成骨细胞增殖 ,浓度高的抑制更明显 ;免疫组化染色见成骨细胞 、TGF- β1 的合成减少 ,部分成骨细胞变性、产生 型胶原 ;TUNEL 检测成骨细胞凋亡发生比率为 :11.5 0 %± 3.6 7% ,Ti- 0 ,4 1.0 0 %± 14 .0 9% ,Ti- 10 ,4 7.33%± 14 .4 3% ,Ti-10 0 ;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡发生比率 Ti- 0组 4 8h约 9.2 7% ,Ti- 10组 4 0 .8% ,Ti- 10 0组为 5 0 .4 8% ;上清液中 型胶原 ,AL P和骨钙素 (OCN)含量减少 ,RT- PCR分析其 m RNA的表达受抑制 ,少量成骨细胞出现异常的 型前胶原 m RNA表达。结论　钛合金颗粒抑制成骨细胞增殖、成骨表型表达 。 展开更多

关键词 钛合金颗粒 成骨 成骨细胞 分化 表型 表达 免疫组化染色 反转录聚合酶链反应法

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肝细胞癌及癌旁组织中环氧合酶-2的表达及临床意义 被引量：5

2

作者 左朝晖 谌忠友 +3 位作者 莫胜川 周晓 肖斌生 吴胜其 《肿瘤研究与临床》 CAS 2005年第5期309-312,共4页

目的研究肝细胞癌(HCC)及癌旁组织中环氧合酶-2(COX-2)的表达及临床意义。方法采用免疫组化法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测38例HCC的癌组织及癌旁非肿瘤组织和7例正常肝组织中COX-2的表达。结果高分化的HCC中COX-2表达显... 目的研究肝细胞癌(HCC)及癌旁组织中环氧合酶-2(COX-2)的表达及临床意义。方法采用免疫组化法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测38例HCC的癌组织及癌旁非肿瘤组织和7例正常肝组织中COX-2的表达。结果高分化的HCC中COX-2表达显著高于中分化和低分化HCC以及癌旁组织(P值均<0.01);COX-2在正常组织不表达。癌旁组织、中分化和低分化HCC之间COX-2表达的强度差异无显著性(P值均>0.05)。结论COX-2的过表达可能参与高分化HCC的致癌过程,在HCC发生的早期阶段发挥作用。 展开更多

关键词 肝细胞癌 环氧合酶-2 免疫组化法 反转录-聚合酶链反应法

原文传递

不同时期有氧运动对大鼠脑衰老和额叶NCAM表达的影响 被引量：13

3

作者 林雪灵 李雪 +4 位作者 邓文骞 王璐 杨澎湃 张业廷 袁琼嘉 《成都体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2014年第6期62-67,共6页

目的:探讨D-半乳糖致衰老的SD大鼠在衰老前和衰老过程中进行有氧运动对其脑衰老和额叶NCAM表达的影响。方法:3月龄雄性SD大鼠60只随机分成运动预处理组(SD组)、衰老组(ND组)、生理盐水对照组(NNa组)、衰老过程中有氧运动干预组(NDs组),n... 目的:探讨D-半乳糖致衰老的SD大鼠在衰老前和衰老过程中进行有氧运动对其脑衰老和额叶NCAM表达的影响。方法:3月龄雄性SD大鼠60只随机分成运动预处理组(SD组)、衰老组(ND组)、生理盐水对照组(NNa组)、衰老过程中有氧运动干预组(NDs组),n=15。取材后,测定大脑皮质的SOD、GSH-Px活性和MDA含量,Real-time PCR、Western blotting检测额叶NCAM基因的表达,免疫组织化学检测其表达部位。结果:ND组大鼠较NNa组出现了嗜睡、食欲不振、行动迟缓、毛色枯黄卷曲并大量脱落等衰老体征;ND组SOD、GSH-Px活性非常显著性低于NNa组(P<0.01),MDA含量非常显著性多于NNa组(P<0.01),SD组SOD、GSH-Px活性和MDA含量较ND组均无显著性差异(P>0.05),NDs组SOD、GSH-Px活性非常显著性高于ND组(P<0.01),MDA含量非常显著性少于ND组(P<0.01);ND组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平非常显著性低于NNa组(P<0.01),SD组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平较ND组无显著性差异(P>0.05),NDs组额叶NCAM基因的mRNA和蛋白质表达水平非常显著性高于ND组(P<0.01),额叶NCAM的免疫产物呈棕褐色,阳性表达主要位于额叶颗粒层细胞周缘的神经元胞浆中。结论:D-半乳糖致大鼠脑衰老造模成功;运动预处理对大鼠脑衰老和额叶NCAM的表达均未产生积极作用;衰老过程中进行有氧运动有效地延缓脑衰老,显著上调额叶NCAM的表达。 展开更多

关键词 有氧运动 衰老 神经细胞粘附分子 额叶 反转录-聚合酶链反应 免疫印迹法 免疫组织化学 大鼠

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4-苯基丁酸抗内质网应激诱导胰岛β细胞凋亡 被引量：7

4

作者 孙琦 向若兰 +4 位作者 张文龙 杨燕丽 李娟 张葵 丁文一 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期784-788,共5页

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡的保护作用。方法高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠T2DM模型,造模成功后取其中10只给予4-PBA灌胃20d。放射免疫法检测... 目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡的保护作用。方法高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠T2DM模型,造模成功后取其中10只给予4-PBA灌胃20d。放射免疫法检测各组大鼠游离脂肪酸(FFA)、血糖及胰岛素的变化。醛品红染色观察胰岛形态改变,RT-PCR检测内质网相关蛋白(Caspase-3、GRP78、CHOP)的mRNA表达变化。结果高脂对照组(n=10)和T2DM组(n=8)大鼠血清FFA比正常对照组(n=10)显著增加,4-PBA治疗后显著下降(n=8)。4-PBA治疗升高了T2DM造成的血清胰岛素水平降低,并降低了T2DM引起的高血糖。醛品红染色显示,T2DM大鼠胰岛萎缩,数量显著下降,胰岛细胞胞质内出现空泡,4-PBA治疗后胰岛数量相比T2DM组有所增多。与对照组相比,T2DM组Caspase-3和CHOP的mRNA表达升高,4-PBA治疗后显著降低。结论 4-PBA通过CHOP途径减轻ERS对胰岛β细胞的损伤,抑制胰岛细胞的过度凋亡,保护胰岛β细胞功能,从而延缓2型糖尿病的发展。 展开更多

关键词 2型糖尿病 内质网应激 4-苯基丁酸 放射免疫法 醛品红染色 反转录一聚合酶链反应 大鼠

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万古霉素对人肾小管上皮细胞中肾损伤分子-1表达的影响研究 被引量：6

5

作者 华春秀 万英 +3 位作者 唐华 刘昌明 卞保平 邹平 《中国药房》 CAS CSCD 北大核心 2011年第45期4244-4248,共5页

目的:探讨万古霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响及其可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,按万古霉素作用浓度和时间分为不同浓度(0、10、20、30、40、50、60μg·mL-1)和不同时间(0、3、6、12、24、4... 目的:探讨万古霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响及其可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,按万古霉素作用浓度和时间分为不同浓度(0、10、20、30、40、50、60μg·mL-1)和不同时间(0、3、6、12、24、48h)组。显微镜观察HK-2细胞形态学变化,反转录-聚合酶链反应检测KIM-1mRNA表达,细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测KIM-1蛋白表达,硫代巴比妥酸法检测HK-2细胞上清液中丙二醇(MDA)的含量。结果:镜下显示,0μg·mL-1组贴壁细胞生长良好,20、40μg·mL-1组部分贴壁细胞脱落和坏死,60μg·mL-1组大部分细胞脱落和坏死;与0μg·mL-1组比较,各浓度组KIM-1mRNA的表达均明显增强(P<0.05或P<0.01),10、20μg·mL-1组KIM-1蛋白表达明显增强(P<0.01),30、40、50、60μg·mL-1组MDA含量明显增强(P<0.01);与0h组比较,24、48h组KIM-1mRNA和蛋白表达、MDA含量均显著增强(P<0.05或P<0.01)。结论:万古霉素刺激可促进HK-2细胞KIM-1mRNA和蛋白的表达,其机制可能与万古霉素致HK-2细胞氧化应激有关。 展开更多

关键词 万古霉素 肾损伤分子-1 表达 人肾小管上皮细胞 反转录-聚合酶链反应 细胞免疫荧光法 免疫印迹法

原文传递

细胞因子抑制剂吡非尼酮对体外培养人瘢痕成纤维细胞增殖的影响 被引量：5

6

作者 蓝蔚 李孝建 +3 位作者 纪雪亮 易先锋 刘衍智 涂荣梅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第24期3808-3812,共5页

背景:有研究表明细胞因子抑制剂吡非尼酮通过调控多种细胞因子,抑制成纤维细胞的生物学活性,其在内脏器官的抗纤维化作用的研究和应用取得了良好的进展,但对于皮肤增生性瘢痕及成纤维细胞是否有影响及其机制尚不清楚。目的:观察细胞因... 背景:有研究表明细胞因子抑制剂吡非尼酮通过调控多种细胞因子,抑制成纤维细胞的生物学活性,其在内脏器官的抗纤维化作用的研究和应用取得了良好的进展,但对于皮肤增生性瘢痕及成纤维细胞是否有影响及其机制尚不清楚。目的:观察细胞因子抑制剂吡非尼酮对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,实验取第3-6代生长状态良好的对数生长期细胞。根据吡非尼酮不同质量浓度分为对照组(吡非尼酮0 g/L),吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组,共干预12,36,48 h。结果与结论:MTT,反转录-聚合酶链式反应和酶链免疫吸附实验结果显示,与对照组相比,吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组细胞增殖情况、转化生长因子β1 mR NA的表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量均降低(P<0.05),其中吡非尼酮1 g/L组降低最明显(P<0.05)。干预24,48,72 h后,吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组间细胞增殖抑制率、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量均差异有显著性意义(P<0.05)。结果证实,细胞因子抑制剂吡非尼酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌、转化生长因子β1的表达及细胞增殖活性有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 组织构建 成纤维细胞 细胞因子抑制剂 吡非尼酮 增生性瘢痕 细胞培养 Ⅰ胶原蛋白 Ⅲ胶原蛋白 组织块法 4-甲偶氮唑蓝法 酶链免疫吸附法 反转录-聚合酶链反应 Transforming Growth Factor BETA1

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胰岛素抵抗大鼠模型中同型半胱氨酸代谢关键酶的变化 被引量：5

7

作者 范晓明 郭家智 +5 位作者 刘世昌 张铁军 康丽 陆地 桂莉 李树德 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期530-534,共5页

目的建立胰岛素抵抗(IR)的动物模型,探讨同型半胱氨酸的变化及同型半胱氨酸改变的分子机制。方法 20只6周健康SD大鼠随机分为正常对照组和胰岛素抵抗组。高脂高糖饮食加高脂灌胃3个月制造胰岛素抵抗模型,空腹状态下测定血液中同型半胱氨... 目的建立胰岛素抵抗(IR)的动物模型,探讨同型半胱氨酸的变化及同型半胱氨酸改变的分子机制。方法 20只6周健康SD大鼠随机分为正常对照组和胰岛素抵抗组。高脂高糖饮食加高脂灌胃3个月制造胰岛素抵抗模型,空腹状态下测定血液中同型半胱氨酸(Hcy)、葡萄糖(GLU)、胰岛素(INS)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的浓度,计算胰岛素抵抗指数(INI);免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting检测肝脏组织亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、胱硫醚合成酶(CBS)、蛋氨酸合成酶(MTR)表达的变化。结果胰岛素抵抗组和正常对照组比较,空腹GLU、INS的浓度升高(P<0.05),INI增加(P<0.05),确定胰岛素抵抗模型建立成功;TG和Hcy浓度增加(P<0.05),TC变化无统计学意义(P>0.05);MTHER和CBS的免疫组织化学检查、mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),MTR的免疫组织化学检查、mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。结论在胰岛素抵抗条件下,同型半胱氨酸浓度增加,可能与参加同型半胱氨转化的MTHER和CBS表达降低有关。 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 同型半胱氨酸 亚甲基四氢叶酸还原酶 胱硫醚合成酶 蛋氨酸合成酶 免疫组织化学 免疫印迹法 反转录-聚合酶链反应 大鼠

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溶血磷脂酸受体3在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达及意义 被引量：5

8

作者 郭燕红 张雷 +5 位作者 邵素霞 尹青 赵春芳 龚淼 张金平 赵静 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期141-145,共5页

目的探讨溶血磷脂酸受体3（LPA—R3）mRNA和蛋白在小鼠胚胎着床过程中表达的动态变化。方法将78只雌性昆明小鼠随机分为真孕组（36只）、假孕组（36只）和对照组（6只），应用反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblotting以及免疫... 目的探讨溶血磷脂酸受体3（LPA—R3）mRNA和蛋白在小鼠胚胎着床过程中表达的动态变化。方法将78只雌性昆明小鼠随机分为真孕组（36只）、假孕组（36只）和对照组（6只），应用反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblotting以及免疫组织化学sP法，检测胚胎围着床期（0～6d）LPA—R3mRNA和蛋白在小鼠子宫内膜的表达和定位。结果LPA—R3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和部分基质细胞的胞质。LPA—R3mRNA和蛋白在小鼠胚胎着床过程中，3d时开始上升，4d时达峰值，5d、6d骤然下降至基础水平。假孕组子宫内膜LPA—R3mRNA和蛋白表达水平及变化规律与相应同期真孕组一致。结论LPA—R3可能参与了胚胎的着床和子宫内膜容受性的建立过程。 展开更多

关键词 溶血磷脂酸受体3 胚胎着床 子宫内膜容受性 免疫组织化学 反转录-聚合酶链反应 免疫印迹法 小鼠

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EZH2在肝细胞癌中的表达及临床意义 被引量：5

9

作者 陆海霞 危丹明 冯震博 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期75-79,共5页

目的探讨EZH2在肝细胞癌(肝癌)中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting方法分析肝癌及癌旁组织EZH2mRNA转录和蛋白表达水平及其与临床病理因素的关系。结果在42例肝癌组织中检出26例EZH2mRNA,而在相应... 目的探讨EZH2在肝细胞癌(肝癌)中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting方法分析肝癌及癌旁组织EZH2mRNA转录和蛋白表达水平及其与临床病理因素的关系。结果在42例肝癌组织中检出26例EZH2mRNA,而在相应的42例癌旁组织中只检出12例,癌组织EZH2mRNA阳性率高于癌旁组织,差异有显著性(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,42例肝癌组织中有25例呈EZH2蛋白表达阳性,相应的42例癌旁组织中只有9例呈阳性,癌组织和癌旁组织蛋白表达率有显著性差异(P<0.01)。取上述42例中的18例肝癌及癌旁组织做Western blotting,结果显示,18例肝癌及癌旁组织均有EZH2蛋白表达,癌组织EZH2表达量明显高于癌旁组织(0.90±0.30和0.36±0.21,P<0.01)。EZH2与临床病理特征分析中,EZH2mRNA在低分化组的表达明显高于高-中分化组,而与肿瘤直径、肝内外转移无相关性。但EZH2蛋白表达与肿瘤直径、分化程度、肝内外转移之间均无相关性。结论 EZH2在肝癌组织中表达上调,提示EZH2在肝癌的发生发展中起重要作用。 展开更多

关键词 肝细胞癌 EZH2基因 反转录一聚合酶链反应 免疫组织化学 免疫印迹法 人

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粪便标本小肠结肠炎耶尔森菌筛检方法的比较 被引量：4

10

作者 潘凌子 伦永志 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期340-343,共4页

目的比较分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的检测情况。方法在2016年6月至2017年6月临床收治的腹泻患者中选取368例,均使用分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对其粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌展开检验... 目的比较分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的检测情况。方法在2016年6月至2017年6月临床收治的腹泻患者中选取368例,均使用分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对其粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌展开检验,对比分析两种方法的检验结果。结果反转录-聚合酶链反应法阳性率为77.17%,比分离培养法的51.09%高,差异有统计学意义(P<0.05);反转录-聚合酶链反应法致病菌株检出率为83.10%,高于分离培养法的59.57%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对腹泻患者粪便标本中的小肠结肠炎耶尔森菌检测时,相较于分离培养法,反转录-聚合酶链反应法阳性检出率更高,可使小肠结肠炎耶尔森菌性腹泻诊断准确率提升。 展开更多

关键词 腹泻 小肠结肠炎耶尔森菌 分离培养法 反转录-聚合酶链反应法

原文传递

Napsin A基因转染干预A549细胞的上皮-间质转化 被引量：4

11

作者 管淑红 郑金旭 +3 位作者 汤艳 宋萍 许清 刘继柱 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期350-355,共6页

目的探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制。方法采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EM... 目的探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制。方法采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EMT模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化,观察Napsin A基因转染对A549细胞在体外EMT模型中细胞EMT和表达黏着斑激酶(FAK)的影响。结果重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A蛋白显著高于非转基因细胞组(P<0.01)。细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,E钙蛋白的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01),相反Ⅰ型胶原则显著上调(P<0.01),提示体外构建EMT模型获得成功。转Napsin A基因A549细胞在TGF-β1干预后,其细胞形态间质改变、E钙蛋白和Ⅰ型胶原的表达量也发生相似变化趋势,但变化幅度显著变小(其中E钙蛋白:P<0.01,Ⅰ型胶原:P<0.05)。体外EMT模型中,细胞FAK蛋白表达量增多(P<0.01),但转基因细胞上调趋势明显小于未转基因细胞(P<0.01)。结论转染Napsin A基因至A549细胞可以部分阻滞细胞EMT进程,其作用机制可能与抑制整合素信号转导通路有关。 展开更多

关键词 NAPSIN A 基因转染 A549细胞 上皮一间质转化 反转录一聚合酶链反应 免疫印迹法

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脾气虚胃溃疡大鼠胃黏膜生长抑素相关信号转导分子的变化 被引量：3

12

作者 杜娟 王秀琴 +4 位作者 季凤清 曾晓蓓 尚宏伟 孙海梅 张立新 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期894-900,共7页

目的探讨生长抑素及其信号传递分子与脾气虚胃溃疡的发生及转归的关系。方法选用成年Wistar大鼠,雌、雄性各35只,建立脾气虚胃溃疡大鼠模型;运用HE染色、免疫组织化学分析、RT-PCR及免疫印迹法,分别观察胃黏膜的组织结构、生长抑素含量... 目的探讨生长抑素及其信号传递分子与脾气虚胃溃疡的发生及转归的关系。方法选用成年Wistar大鼠,雌、雄性各35只,建立脾气虚胃溃疡大鼠模型;运用HE染色、免疫组织化学分析、RT-PCR及免疫印迹法,分别观察胃黏膜的组织结构、生长抑素含量、2型生长抑素受体mRNA、细胞外信号传递激酶2(ERK2)表达的变化。结果脾气虚胃溃疡大鼠胃黏膜中,2型生长抑素的蛋白含量增加,生长抑素受体mRNA表达上调,(ERK2)表达下降。结论生长抑素信号传递途径中相关信号分子的变化可能是引起脾气虚胃溃疡发生的原因之一。 展开更多

关键词 脾气虚 胃溃疡 生长抑素 信号传递 免疫组织化学 反转录-聚合酶链反应 免疫印迹法 大鼠

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细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控 被引量：3

13

作者 丁宁 肖慧 +2 位作者 高巨 许立新 佘守章 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期919-922,共4页

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B... 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK激酶的活性。结果A549细胞施加14%牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P<0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断。结论机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。 展开更多

关键词 机械牵张 高迁移率族蛋白B1 细胞外调节蛋白激酶 免疫组织化学 反转录.聚合酶链反应 免疫 印迹法 肺泡上皮细胞

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FasL基因转染诱导类风湿关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究 被引量：3

14

作者 林翊萍 于清宏 刘民培 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期225-229,i002,共6页

目的通过构建FasL重组质粒并转染原代培养的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞,研究FasL基因对体外培养的RA滑膜细胞的凋亡诱导作用,寻找针对R A关节腔内基因治疗的有效靶基因。方法采用反转录-聚合酶链反应(R T-PCR)方法扩增FasL cD NA全... 目的通过构建FasL重组质粒并转染原代培养的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞,研究FasL基因对体外培养的RA滑膜细胞的凋亡诱导作用,寻找针对R A关节腔内基因治疗的有效靶基因。方法采用反转录-聚合酶链反应(R T-PCR)方法扩增FasL cD NA全长片段,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将FasL基因导入真核表达载体pcDN A3.1-neo;体外原代培养RA患者及正常人的滑膜细胞;脂质体包裹真核表达质粒pcD NA3.1-FasL及空质粒pcDN A3.1-neo,分别转染处于指数生长期的RA患者及正常人的滑膜细胞;经G418筛选,采用形态学、TUNEL法及AnnexinⅤ/碘化丙啶(PI)染色等方法检测各组滑膜细胞的凋亡情况。结果FasL基因原核及真核重组质粒载体顺利构建,基因序列检测结果与国外报道完全一致;RA患者及正常人的滑膜细胞原代培养、传代顺利完成;RA患者滑膜细胞转染FasL重组质粒(rhFasL)15h后,光镜下可见大量细胞体积缩小、扭曲、变形,胞核中出现颗粒样物质,少数细胞脱落底壁,G418筛选2周后仅有1￣2个/低倍视野细胞存活,且生长相对静止;RA患者滑膜细胞在转染空质粒及正常人滑膜细胞在转染pcDNA3.1-FasL及空质粒后仅有少数细胞变形、反光度下降,很少脱离底壁,G418筛选2￣4周后细胞再次生长并形成克隆;经TUNEL方法检测可见大量转染rhFasL的RA滑膜细胞的? 展开更多

关键词 基因转染 滑膜细胞凋亡 关节炎患者 实验研究 反转录-聚合酶链反应 Annexin FASL基因 TUNEL方法 流式细胞仪检测 RA患者 类风湿关节炎 凋亡诱导作用 真核表达载体 真核表达质粒 体外原代培养 TUNEL法 细胞原代培养 重组质粒

原文传递

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用 被引量：3

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作者 陈秋萍 黄赛赛 +2 位作者 周伟伟 沈施仁 曹苏 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期778-783,共6页

目的观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)fractalkine(FKN)表达中的作用。方法培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组(n=6):正常对照组(N组)、缺氧... 目的观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)fractalkine(FKN)表达中的作用。方法培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组(n=6):正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组(DZ组)、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组(LY294002+DZ组)。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平,Western blotting检测Akt蛋白水平。结果与N组比较,H/R组细胞增殖率显著降低(P<0.01)、凋亡率显著升高(P<0.01),FKN mRNA和FKN蛋白表达显著增加(P<0.01)、Akt mRNA和Akt蛋白升高(P<0.05)。与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高(P<0.01)、凋亡率显著降低(P<0.01),AktmRNA和蛋白显著升高(P<0.01和P<0.05),FKN mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。与DZ组比较,LY294002+DZ组Akt mRNA和蛋白显著降低(P<0.01)、FKN mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论mito-KATP开放通过PI3K/Akt信号调节下游FKN mRNA的转录及表达,促使细胞增殖,抑制细胞凋亡,实现对缺氧复氧MMECs损伤的保护。 展开更多

关键词 线粒体ATP敏感性钾通道 心肌微血管内皮细胞 PI3K Akt FRACTALKINE 缺氧 复氧 反转录-聚合酶链反应 免疫印迹法 大鼠

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术前大黄素联合顺铂化疗对人食管鳞癌WIG-1mRNA的影响及其机制的研究 被引量：3

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作者 肖仁斌 彭辉 +3 位作者 王江涛 文兆明 周开良 吴娟 《中国当代医药》 2019年第11期67-69,73,共4页

目的探讨术前大黄素联合顺铂化疗对人食管鳞癌野生型p53诱导基因1(WIG-1)mRNA的影响及机制。方法选择2017年3月～2018年10月我院收治的40例食管鳞癌患者作为研究对象,所有患者均经术前病理组织检查确诊。患者确诊后均给予大黄素联合顺... 目的探讨术前大黄素联合顺铂化疗对人食管鳞癌野生型p53诱导基因1(WIG-1)mRNA的影响及机制。方法选择2017年3月～2018年10月我院收治的40例食管鳞癌患者作为研究对象,所有患者均经术前病理组织检查确诊。患者确诊后均给予大黄素联合顺铂进行术前化疗,连续治疗3个疗程后对患者行手术治疗,根据术中所取组织部位的不同,分为观察组和对照组,每组各20例。观察组术中取病灶组织,对照组术中取癌旁组织(距离肿瘤部位≥3 cm)。运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定两组患者组织中的WIG-1m RNA表达水平和观察组手术前后WIG-1mRNA的表达水平。结果观察组患者组织中的WIG-1mRNA表达水平为0.68±0.11,高于对照组的0.04±0.01,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者手术后食管鳞癌组织中的WIG-1mRNA表达水平为0.25±0.05,低于手术前的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WIG-1mRNA在正常组织中表达水平较低,且术前大黄素联合顺铂化疗用于食管鳞癌患者中有助于降低WIG-1mRNA的表达水平,有助于改善患者的预后,能为食管鳞癌的治疗提供分子学依据。 展开更多

关键词 大黄素 顺铂化疗 食管鳞癌 野生型p53诱导基因1mRNA表达 免疫组织化学法 反转录-聚合酶链反应技术

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重型斑秃患者外周血和头皮细胞因子的检测 被引量：2

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作者 罗莉 巩毓刚 李灵 《实用医院临床杂志》 2018年第3期11-14,共4页

目的检测重型斑秃患者外周血和头皮皮损处细胞因子的表达水平,进一步探讨斑秃的发病机制。方法选取33例重型斑秃患者及20例健康体检者。收集外周血标本,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中免疫细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白介素2(... 目的检测重型斑秃患者外周血和头皮皮损处细胞因子的表达水平,进一步探讨斑秃的发病机制。方法选取33例重型斑秃患者及20例健康体检者。收集外周血标本,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中免疫细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素5(IL-5)、白介素10(IL-10)、白介素12(IL-12)的表达水平。收集头皮组织标本,采用荧光半定量RT-PCR方法检测头皮处IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12 mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,重型斑秃组血清中IFN-γ和IL-12表达水平显著升高,IL-5表达水平显著降低(P<0.01),IL-2、IL-4、IL-10表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,重型斑秃组头皮皮损IFN-γ和IL-12 mRNA表达水平显著升高,IL-4mRNA表达水平显著降低(P<0.01),IL-2、IL-5、IL-10 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论重型斑秃患者外周血及局部头皮均存在Th1和Th2的免疫失衡,即表现为Th1占优势而Th2抑制。 展开更多

关键词 斑秃 细胞因子 酶联免疫吸附试验法 反转录-聚合酶链反应

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新疆哈萨克族食管癌中Survivin的表达及其与Caspase-9和Caspase-3基因的相关性 被引量：2

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作者 李秀梅 陈艳 +5 位作者 李卉 庞作良 王洪江 姜孝芳 郭琼 李惠武 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期235-237,共3页

目的探讨新疆哈萨克族食管癌中Survivin基因表达及其与半胱氨酸蛋白Caspase-9、Caspase-3基因的关系。方法首先从52例哈萨克族食管癌标本中筛选出34例Survivin mRNA差异表达的标本(癌组织中的表达量高于远端无癌组织),采用RT-PCR、Weste... 目的探讨新疆哈萨克族食管癌中Survivin基因表达及其与半胱氨酸蛋白Caspase-9、Caspase-3基因的关系。方法首先从52例哈萨克族食管癌标本中筛选出34例Survivin mRNA差异表达的标本(癌组织中的表达量高于远端无癌组织),采用RT-PCR、Western blotting方法检测半胱氨酸蛋白Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果 1.Survivin在新疆哈萨克族食管癌组织高表达,差异具有统计学意义(P<0.05);2.在Survivin差异表达的34例标本中,61.8%的肿瘤组织半胱氨酸蛋白Caspase-9低表达,并且Survivin mRNA与Caspase-9 mRNA的表达呈负相关(r=-0.244,P<0.05);3.哈萨克族食管癌组织中,Caspase-9的蛋白活化降低(P<0.05)。结论Survivin表达上调在新疆哈萨克族食管癌的发生、发展过程中发挥重要作用,Survivin可能通过直接抑制Caspase-9的转录以及抑制其活化水平发挥调控细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 食管癌 SURVIVIN Caspase-3 CASPASE-9 反转录一聚合酶链反应 免疫印迹法 哈萨克族

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泸州地区苗族人群CYP2C19、ABCB1、CYP3A4和CYP3A5基因多态性分析 被引量：2

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作者 胡功利 王国俊 +2 位作者 杨婷 陈竹 叶云 《中国药房》 CAS 北大核心 2016年第32期4473-4476,共4页

目的:研究泸州地区苗族人群细胞色素P_(450)(CYP)2C19、三磷酸腺苷结合盒亚家族B成员1(ABCB1)、CYP3A4和CYP3A5的基因型和基因型频率。方法:采用抛掷硬币法选择四川省泸州地区无直接血缘关系的健康苗族受试者54例,采用反转录-聚合酶链... 目的:研究泸州地区苗族人群细胞色素P_(450)(CYP)2C19、三磷酸腺苷结合盒亚家族B成员1(ABCB1)、CYP3A4和CYP3A5的基因型和基因型频率。方法:采用抛掷硬币法选择四川省泸州地区无直接血缘关系的健康苗族受试者54例,采用反转录-聚合酶链反应法对其CYP2C19、ABCB1、CYP3A4和CYP3A5基因进行扩增,扩增产物经检测、测序后,采用Chromas 2软件对其基因型进行比对分析,并对不同性别受试者CYP2C19、ABCB1、CYP3A4和CYP3A5基因型频率进行比较。结果:54例苗族受试者CYP2C19快代谢型(HomEM,*1*1基因型)、中代谢型(Het EM,*1*2或*1*3基因型)和慢代谢型(PM,*2*2、*2*3或*3*3基因型)频率分别为20.37%、61.11%和18.52%;ABCB1 CC、CT和TT基因型频率分别为29.63%、51.85%和18.52%;CYP3A4 GG、GA和AA基因型频率分别为38.89%、53.70%和7.41%;CYP3A5 TT、TC和CC基因型频率分别为81.48%、16.67%和1.85%;不同性别苗族受试者CYP2C19、ABCB1、CYP3A4和CYP3A5基因型频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:苗族受试者中CYP2C19 HetEM型和CYP3A4 G等位基因携带者的比例较高,ABCB1多态性位点的实变率较高,CYP3A5多态性位点的突变率较低;性别对泸州地区苗族受试者CYP2C19、ABCB1、CYP3A4和CYP3A5基因多态性的分布并无明显影响。 展开更多

关键词 基因多态性 反转录-聚合酶链反应法 苗族人群 泸州地区 CYP2C19 ABCB1 CYP3A4 CYP3A5

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空气诱导小鼠子宫内膜蜕膜化 被引量：1

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作者 刘若男 苗艳平 +2 位作者 魏彦辉 周荣艳 李相运 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期374-378,共5页

目的探讨空气对小鼠子宫内膜蜕膜化的诱导作用,建立非手术法小鼠子宫内膜蜕膜化诱导技术。方法利用小鼠非手术法胚胎移植器,通过子宫颈向30只假孕3.5 d小鼠单侧子宫角移植2μl空气,诱导子宫内膜蜕膜化,观察蜕膜化子宫形态并测量其直径... 目的探讨空气对小鼠子宫内膜蜕膜化的诱导作用,建立非手术法小鼠子宫内膜蜕膜化诱导技术。方法利用小鼠非手术法胚胎移植器,通过子宫颈向30只假孕3.5 d小鼠单侧子宫角移植2μl空气,诱导子宫内膜蜕膜化,观察蜕膜化子宫形态并测量其直径和重量,HE染色观察细胞形态,RT-PCR检测蜕膜化相关标记基因表达。结果移植空气诱导25只假孕小鼠出现不同程度的蜕膜化现象。与对照侧子宫角相比,空气移植侧子宫角明显肿大、增粗、增重,子宫内膜毛细血管通透性增加,蜕膜化标记基因环氧化物水解酶-2(COX-2)、泌乳素(Prl)3c1、Prl8a2等高表达,且细胞出现多核现象。结论利用非手术法子宫内移植空气可以高效诱导小鼠子宫内膜蜕膜化。 展开更多

关键词 空气 非手术法 子宫 蜕膜化 反转录-聚合酶链反应 小鼠

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