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反义bcl-2和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用 被引量：15
1
作者 关健 陈杰 +1 位作者 罗玉凤 高洁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第22期1536-1540,共5页
目的　研究反义bcl 2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤 (NB)细胞系SK N MC细胞生长的作用。方法　利用基因重组技术 ,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl 2或反义svv的逆转录病毒载体PBabepuro Asbcl 2和PBabepuro As... 目的　研究反义bcl 2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤 (NB)细胞系SK N MC细胞生长的作用。方法　利用基因重组技术 ,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl 2或反义svv的逆转录病毒载体PBabepuro Asbcl 2和PBabepuro Assvv ,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK N MC细胞 ,经嘌呤霉素 (2 .0 μg/ml)筛选得到抗性克隆 ,同时以空载体Pbabepuro转染SK N MC作为对照 ;以免疫组化和Western印迹分析反义bcl 2、反义svv对细胞内源性Bcl 2、SVV蛋白质的表达抑制作用 ,应用MTT法研究细胞 (5× 10 3 /孔 )的生长和增殖情况 ,并接种于裸鼠 (3只 /组 ) ,观察 10 7个细胞在 6周时的成瘤情况 ,以研究反义bcl 2、反义svv对SK N MC细胞生长的作用。结果　反义bcl 2转染后的细胞SK N MC/PBabepuro Asbcl 2中的Bcl 2表达明显降低 ,反义svv转染后的细胞SK N MC/PBabepuro Assvv中的SVV表达也明显降低 ;且这两种细胞均生长缓慢 ,裸鼠移植瘤体积均明显小于SK N MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤。结论　稳定表达的反义bcl 2、反义svv均能够有效抑制SK N MC细胞内源性相应蛋白质Bcl 2、SVV的表达 ,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用。 展开更多
关键词 反义bcl-2 反义survivin bcl-2基因 神经母细胞瘤 NB 基因治疗
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二氟甲基鸟氨酸及反义bcl-2协同诱导HL60细胞凋亡 被引量：9
2
作者 贺俊崎 范慕贞 房青 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期105-108,共4页
目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂... 目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂交及免疫组化等方法研究细胞生长特性及细胞凋亡诱导。结果　成功地构建了反义bcl 2逆转录病毒重组体及产病毒细胞系。以此转染HL6 0细胞 ,引起了bcl 2mRNA及蛋白表达下降 ,但生长速率、细胞周期分布及鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因表达水平与亲本细胞比较差别不大 ;无明显的细胞凋亡 ,仅集落形成能力有所减弱。用小剂量DFMO处理反义bcl 2转染的细胞 ,不仅生长受到明显抑制 ,而且可诱导细胞凋亡。结论　DFMO与反义bcl 2对HL6 0细胞增殖抑制及凋亡诱导有协同作用。抑制bcl 2表达能提高肿瘤细胞对DFMO作用的敏感性。 展开更多
关键词 二氟甲基鸟氨酸 反义bcl-2 HL60细胞 细胞凋亡
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Bcl-2表达降低对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响 被引量：5
3
作者 刘洪雷 王雨生 惠延年 《眼科新进展》 CAS 2004年第3期165-168,共4页
目的　观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPEc)凋亡的影响。方法　用DNA打点杂交、免疫组化、TUNEL分别观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导RPEc的凋亡作用。结果　DNA打点杂交阳性结果间接证明了外援基因的成功转染 ... 目的　观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPEc)凋亡的影响。方法　用DNA打点杂交、免疫组化、TUNEL分别观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导RPEc的凋亡作用。结果　DNA打点杂交阳性结果间接证明了外援基因的成功转染 ;诱导表达反义bcl 2 ,显示了在蛋白水平上bcl 2表达明显降低 (灰度值为 10 5 .7±6 0vs 74 .5± 5 .5 ) ;180 μ犂·L-1柔红霉素作用后反义bcl 2转染组可获得更高的凋亡指数(P <0 0 1)。结论　bcl 展开更多
关键词 反义bcl-2 柔红霉素 人视网膜色素上皮细胞 凋亡
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四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用
4
作者 关健 陈杰 赵和 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期135-139,共5页
目的　研究由四环素调控的反义bcl 2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK N MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法　非定向克隆构建携带反义bcl 2cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/Asbcl 2 ;应用脂... 目的　研究由四环素调控的反义bcl 2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK N MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法　非定向克隆构建携带反义bcl 2cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/Asbcl 2 ;应用脂质体LipofectamineTM 介导转染SK N MC细胞 ,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况 ,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)研究细胞凋亡中bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl 2及其上下游相关基因caspase 3、PARP的变化。结果　转染反义bcl 2的细胞生长增殖缓慢 ,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞 ,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase 3酶原蛋白减少并检测到bcl 2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达无明显改变。结论反义bcl 2mRNA可抑制SK N MC细胞的生长和增殖 ,促进去血清培养所诱导的SK N MC细胞的凋亡。在细胞凋亡过程中caspase 3被激活 ,bcl 2和PARP蛋白被裂解 ,但bcl xL/bcl xS 在反义bcl 2mRNA诱导的SK N MC细胞的凋亡过程中无变化。 展开更多
关键词 四环素 反义bcl-2 SK-N-MC 神经母细胞瘤 脱噬作用 bcl-2基因 肿瘤细胞培养 细胞凋亡
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反义bcl-2的表达诱导癌细胞凋亡致敏树突状细胞的免疫应答
5
作者 吴刚 顾红光 +1 位作者 韩本立 裴雪涛 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第8期697-700,共4页
目的　观察树突状细胞 (DCs)从反义bcl 2的逆转录病毒表达载体诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后 ,抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法　用粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)加白介素 4(IL 4)从人外周血分化、诱导... 目的　观察树突状细胞 (DCs)从反义bcl 2的逆转录病毒表达载体诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后 ,抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法　用粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)加白介素 4(IL 4)从人外周血分化、诱导DCs ,反义bcl 2的逆转录病毒表达载体在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡 ,将DCs、T淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞共培养 ,同时设计不同类型肿瘤细胞 (坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞 )作对照 ,7d后 ,分离、富集DCs、T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果　DCs高表达共刺激分子B7和CD1a ,表面具有典型不规则突起 ,反义bcl 2表达诱导癌细胞凋亡形成的凋亡小体被DCs捕捉、吞噬 ,负载抗原的DCs可以有效提呈胆管癌细胞抗原 ,有强烈的免疫应答 ,刺激的细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)特异性地杀伤胆管癌细胞。结论　反义bcl 2的逆转录病毒表达载体诱导癌细胞凋亡可以致敏rhGM CSF加rhIL 4从人外周血单核细胞诱导、扩增出的DCs并产生显著的杀伤胆管癌细胞的免疫反应 。 展开更多
关键词 反义bcl-2 癌细胞 树突状细胞 免疫应答 细胞凋亡 逆转录病毒载体
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反义bcl－2基因治疗在实体瘤的应用进展
6
作者 杨建辉 李国华 《世界肿瘤杂志》 2002年第3期172-175,共4页
关键词 反义bcl-2 基因治疗 实体瘤 癌细胞凋亡 小细胞肺癌 恶性黑色素瘤
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反义bcl-2基因逆转录病毒表达载体的构建 被引量：3
7
作者 林祥华 陈志哲 +1 位作者 杨婷 吕联煌 《福建医科大学学报》 2001年第1期1-3,F002,共4页
目的　克隆 bcl- 2基因 ,构建其不同反义核酸的逆转录病毒表达载体。　方法　设计一对两端带有Eco R 酶切位点的引物 ,RT- PCR克隆含 bcl- 2全部编码区的 848bp片段 ,并连接到 T载体 ,测序正确后正反向亚克隆到 p L XSN中 Eco R 位点 ;... 目的　克隆 bcl- 2基因 ,构建其不同反义核酸的逆转录病毒表达载体。　方法　设计一对两端带有Eco R 酶切位点的引物 ,RT- PCR克隆含 bcl- 2全部编码区的 848bp片段 ,并连接到 T载体 ,测序正确后正反向亚克隆到 p L XSN中 Eco R 位点 ;从 p Bluescript SK(- ) bcl- 2中用 Bam H 切下含有 bcl- 2阅读框起始部位的部分编码区亚克隆到 p L XSN Bam H 位点。　结果　构建带有正反向含 bcl- 2阅读框的全部编码区和部分编码区的逆转录病毒表达载体。　结论　在已知基因序列克隆中 ,联合 RT- PCR和 T载体是一个简单、快速、有效的方法 。 展开更多
关键词 反义bcl-2基因 逆转录病毒 表达载体 构建
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反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长和凋亡的作用
8
作者 关健 陈杰 +1 位作者 高洁 罗玉凤 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期243-246,I002,共5页
目的 研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用。方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2；应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选，应用RT-PC... 目的 研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用。方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2；应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选，应用RT-PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达，建立细胞株SH-SY5Y/Asbcl-2；应用免疫组化和Western印迹分析Bcl-2蛋白的表达变化；MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况；通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA 梯带。结果RT-PCR证实转染细胞SH-SY5Y/Asbcl-2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达；免疫组化及Western印迹分析显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞的Bcl-2蛋白表达明显降低；生长曲线显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞生长缓慢;加入CP相同时间后，SH-SY5Y/Asbcl-2细胞凋亡形成的DNA 梯带更明显。结论脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞；反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达，抑制SH-SY5Y细胞的生长，增加SH-SY5Y细胞对CP的敏感性，促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 反义bcl-2mRNA SH-SY5Y 细胞生长 细胞凋亡
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转染Zn^(2+)诱导表达反义bcl-2基因对人视网膜色素上皮细胞的影响
9
作者 刘洪雷 王雨生 惠延年 《国际眼科杂志》 CAS 2004年第3期404-408,共5页
目的:观察转染Zn2+诱导表达的反义bcl-2 基因对人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法:培养的正常RPE细胞与转染反义bcl-2 RPE细胞采用免疫组化,克隆形成试验、MTT,流式细胞仪,TUNEL分别予以观察。结果:转染后RPE细胞细胞骨架角蛋白... 目的:观察转染Zn2+诱导表达的反义bcl-2 基因对人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法:培养的正常RPE细胞与转染反义bcl-2 RPE细胞采用免疫组化,克隆形成试验、MTT,流式细胞仪,TUNEL分别予以观察。结果:转染后RPE细胞细胞骨架角蛋白表达阳性;硫酸锌诱导表达的安全剂量为160μmol/L;诱导表达反义bcl-2 RPE大部分细胞bcl-2 表达为阴性,部分弱阳性;在第10d细胞克隆形成率分别为(4.65±0.043)%与(4.85±0.085)%(P >0.05),诱导表达反义bcl-2 的RPE生长曲线在5d后表现为低增生率(P <0.01);柔红霉素作用后G2期细胞由9.9%增加至30.4%;180μg/L柔红霉素作用反义bcl-2转染组TUNEL阳性细胞可见典型凋亡小体。结论:转染可诱导表达的bcl-2 基因的RPE细胞可以进行细胞凋亡的后续研究。 展开更多
关键词 反义bcl-2基因 转染 人视网膜色素上皮细胞 免疫组化 柔红霉素 细胞凋亡
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