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反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响 被引量：1
1
作者 刘文滨 王吉耀 +4 位作者 杨长青 王逸青 蒋炜 贺伯明 郭津生 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期7-10,共4页
目的　探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型... 目的　探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果　外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β 展开更多
关键词 反义金属蛋白酶抑制因子-1 肝星形细胞 胶原 酶灌注法 梯度离心法 基因重组技术 细胞外基质 肝纤维化
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反义金属蛋白酶组织抑制因子-1表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响 被引量：7
2
作者 杨长青 胡国龄 +1 位作者 谭德明 张铮 《中华内科杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期401-404,共4页
目的　观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法　运用逆转录巢式 (RT PCR)和重组DNA技术 ,构建大鼠反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经脂质体包埋后 ,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化... 目的　观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法　运用逆转录巢式 (RT PCR)和重组DNA技术 ,构建大鼠反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经脂质体包埋后 ,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;通过RT PCR ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Masson胶原染色观察反义TIMP 1表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果　反义TIMP 1表达质粒可以促进肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 (P <0 .0 1) ,且作用较秋水仙碱为强 (P <0 .0 5 ) ;在病理形态学的观察方面 ,反义TIMP 1表达质粒对肝纤维化有一定的逆转作用 (P <0 .0 5 ) ,其作用亦较秋水仙碱为强 (P <0 .0 5 )。结论　反义TIMP 展开更多
关键词 反义金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝纤维化 大鼠
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反义TIMP-1表达质粒对实验性肝纤维化的影响 被引量：5
3
作者 李紫琼 郑勇 +1 位作者 李睿 周婷 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2008年第4期325-328,共4页
目的观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法运用重组DNA技术及反义技术,构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒,经脂质体Lipofectmine2000包埋。采用腹腔注射将其导入到复合因素复制的肝纤维化大鼠模型体内,通过半定量RT-P... 目的观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法运用重组DNA技术及反义技术,构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒,经脂质体Lipofectmine2000包埋。采用腹腔注射将其导入到复合因素复制的肝纤维化大鼠模型体内,通过半定量RT-PCR,病理形态学观察及免疫组化等方法,观察反义TIMP-1表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果反义TIMP-1质粒组与肝纤维化组、空质粒组相比TIMP-1、MMP-13 mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05);正常对照组与各实验组之间的病理学分级有显著性差异(P<0.05);反义TIMP-1质粒组病理学分级较空质粒组有明显改善(P<0.05);空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05)。结论反义TIMP-1/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒使TIMP-1、MMP-13 mRNA及蛋白的表达受到抑制,反义TIMP-1表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用,并为以后肝纤维化的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 肝纤维化 反义基质金属蛋白酶抑制因子-1 基质金属蛋白酶-13
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反义TIMP-1质粒对实验性肝纤维化中TIMP-1、MMP-13蛋白的影响 被引量：3
4
作者 李紫琼 木尼拉 高峰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期1561-1563,共3页
目的:观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化中TIMP-1、MMP-13蛋白的影响。方法 :通过构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒,导入实验性肝纤维化大鼠模型体内,应用western bloting免疫印记技术,观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验大鼠... 目的:观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化中TIMP-1、MMP-13蛋白的影响。方法 :通过构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒,导入实验性肝纤维化大鼠模型体内,应用western bloting免疫印记技术,观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验大鼠肝纤维化中TIMP-1、MMP-13蛋白的影响。结果:反义TIMP-1质粒组与肝纤维化组、空质粒组相比,TIMP-1、MMP-13蛋白表达明显减少(P<0.05),空质粒组与肝纤维化组差异无显著性(P>0.05)。结论:反义TIMP-1真核细胞表达质粒能使实验性肝纤维化中TIMP-1、MMP-13蛋白的表达受到抑制,对实验性肝纤维化有较好的改善作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 反义基质金属蛋白酶抑制因子-1 基质金属蛋白酶-13
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反义金属蛋白酶组织抑制因子-1基因转染对大鼠肺纤维化的治疗作用
5
作者 唐海英 解宏权 +1 位作者 毛靖伟 吴泰华 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1264-1266,共3页
目的观察反义金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因转染对大鼠肺纤维化的治疗作用。方法于2005年1月至2006年6月在大连医科大学附属第一医院中心实验室将30只清洁级6周龄雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为5组,即正义TIMP-1转染组、反... 目的观察反义金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因转染对大鼠肺纤维化的治疗作用。方法于2005年1月至2006年6月在大连医科大学附属第一医院中心实验室将30只清洁级6周龄雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为5组,即正义TIMP-1转染组、反义TIMP-1转染组、空载体转染组、肺纤维化组、正常对照组,每组6只。正、反义TIMP-1转染组及空载体转染组为在给予博莱霉素(BLM)后第1,3,7,14,28,60,90天将含正、反义人TIMP-1cDNA逆转录病毒载体及空载体导入肺纤维化大鼠肺内,转染28d后处死;肺纤维化对照组仅给予BLM,时间与转染组相同;正常对照组取同期大鼠处死。观察反义TIMP-1基因转染的作用及肺组织羟脯氨酸的变化。结果给予BLM后第1,3天进行反义TIMP-1基因转染,与同一时间点的肺纤维化对照组及空载体转染组比较,纤维化程度减轻,羟脯氨酸含量减少。结论给予BLM后第1,3天进行反义TIMP-1基因转染可以在一定程度上抑制肺纤维化的发展。 展开更多
关键词 肺纤维化 反义金属蛋白酶组织抑制因子-1
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反义金属蛋白酶组织抑制因子-1表达质粒对实验性肝纤维化的影响
6
作者 蒋炜 王吉耀 +3 位作者 杨长青 王逸青 贺伯明 刘文滨 《肝脏》 2003年第3期4-8,共5页
目的　观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法　运用重组DNA技术构建反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经与糖化多聚赖氨酸偶联后 ,尾静脉注射将其导入猪血清诱导的免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;... 目的　观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法　运用重组DNA技术构建反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经与糖化多聚赖氨酸偶联后 ,尾静脉注射将其导入猪血清诱导的免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;通过Northern印迹法、RT PCR、Western印迹法检测外源导入基因的表达 ,并通过肝组织间质胶原酶活性和羟脯氨酸测定 ,以及肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与VanGieson染色观察反义TIMP 1质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果　外源导入基因可在肝组织中获得确切表达 ,其表达可增加间质胶原酶的活性 (P <0 .0 1) ,减少羟脯氨酸含量 (P <0 .0 1) ,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 (P <0 .0 1) ,并促进肝脏病理形态一定程度的改善 (P <0 .0 1)。结论　反义TIMP 1表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用。 展开更多
关键词 反义金属蛋白酶组织抑制因子-1 实验 肝纤维化 大鼠 基因表达
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