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两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
被引量：
1
1
作者
吴磊
史秀岚
+2 位作者
田巍
刘巧泉
王幼平
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010年第5期976-980,共5页
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培...
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。
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关键词
双
元载体
双
T-
dna
区
天麻抗真菌蛋白基因
脂质转移蛋白基因
下载PDF
职称材料
具双T-DNA区的大麦黄矮病毒复制酶基因RNAi植物表达载体的构建(英文)
2
作者
孙文瑜
陈静
+1 位作者
王磊
付体华
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期745-749,共5页
RNAi系双链RNA诱导同源mRNA降解,导致特定基因表达沉默的一种现象.RNAi技术是通过基因工程防治植物病毒病的最佳途径.由大麦黄矮病毒(Barely yellow dwarf virus,简称BYDV)引起的禾谷类黄矮病发病面积和危害程度在我国呈加重趋势.BYDV-...
RNAi系双链RNA诱导同源mRNA降解,导致特定基因表达沉默的一种现象.RNAi技术是通过基因工程防治植物病毒病的最佳途径.由大麦黄矮病毒(Barely yellow dwarf virus,简称BYDV)引起的禾谷类黄矮病发病面积和危害程度在我国呈加重趋势.BYDV-GAV是当前流行的大麦黄矮病毒株系,本文针对BYDV-GAV复制酶基因序列,构建能在细胞内转录形成发卡RNA双链结构的表达盒,并将其置于中间载体pVec8-2b的T-DNA区,pVec8-2b的另一T-DNA区含有hpt选择报告基因表达盒.具双T-DNA区的病毒复制酶基因发卡RNA高效表达载体已导入根癌农杆菌,可用于诱导植物RNAi,创制无选择标记基因的抗大麦黄矮病转基因作物.
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关键词
大麦黄矮病毒BYDV
RNAI
双
T-
dna
区
载体
无选择标记基因植物
下载PDF
职称材料
题名
两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
被引量：
1
1
作者
吴磊
史秀岚
田巍
刘巧泉
王幼平
机构
扬州大学生物科学与技术学院
扬州大学农学院
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010年第5期976-980,共5页
基金
转基因重大专项(2009ZX08004-002B)
江苏省大学生实践创新训练计划共同资助
文摘
选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。
关键词
双
元载体
双
T-
dna
区
天麻抗真菌蛋白基因
脂质转移蛋白基因
Keywords
Binary vector
Twin T-
dna
Gastrodia antifungal protein gene（GAFP）
Lipid transfer protein gene（LTP）
分类号
S336 [农业科学—作物遗传育种]
下载PDF
职称材料
题名
具双T-DNA区的大麦黄矮病毒复制酶基因RNAi植物表达载体的构建(英文)
2
作者
孙文瑜
陈静
王磊
付体华
机构
中国科学院成都生物研究所成都
四川农业大学农学院
中国科学院成都生物研究所
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期745-749,共5页
基金
Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 30871527)
the Knowledge Innovation Project of the Chinese Academy of Science
文摘
RNAi系双链RNA诱导同源mRNA降解,导致特定基因表达沉默的一种现象.RNAi技术是通过基因工程防治植物病毒病的最佳途径.由大麦黄矮病毒(Barely yellow dwarf virus,简称BYDV)引起的禾谷类黄矮病发病面积和危害程度在我国呈加重趋势.BYDV-GAV是当前流行的大麦黄矮病毒株系,本文针对BYDV-GAV复制酶基因序列,构建能在细胞内转录形成发卡RNA双链结构的表达盒,并将其置于中间载体pVec8-2b的T-DNA区,pVec8-2b的另一T-DNA区含有hpt选择报告基因表达盒.具双T-DNA区的病毒复制酶基因发卡RNA高效表达载体已导入根癌农杆菌,可用于诱导植物RNAi,创制无选择标记基因的抗大麦黄矮病转基因作物.
关键词
大麦黄矮病毒BYDV
RNAI
双
T-
dna
区
载体
无选择标记基因植物
Keywords
barley yellow dwarf virus （BYDV）
RNAi
twin T-
dna
s vector
marker-free plant
分类号
S435.123 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建
吴磊
史秀岚
田巍
刘巧泉
王幼平
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2010
1
下载PDF
职称材料
2
具双T-DNA区的大麦黄矮病毒复制酶基因RNAi植物表达载体的构建(英文)
孙文瑜
陈静
王磊
付体华
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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