期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到110篇文章
< 1 2 … 6 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
应用多重RT-PCR方法检测158例猪粪样中的两种冠状病毒 被引量：24
1
作者 杨群 何孔旺 陆承平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期431-435,共5页
根据GenBank上发表的猪流行性腹泻(PEDV)和猪传染性胃肠炎(TGEV)基因序列,针对其PEDVM(膜蛋白)基因保守区及TGEV的S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区,各设计一对引物,可特异扩增出目的条带大小分别为467bp和1062bp。用上述两对引物对同一... 根据GenBank上发表的猪流行性腹泻(PEDV)和猪传染性胃肠炎(TGEV)基因序列,针对其PEDVM(膜蛋白)基因保守区及TGEV的S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区,各设计一对引物,可特异扩增出目的条带大小分别为467bp和1062bp。用上述两对引物对同一样品中的PEDV和TGEV可进行鉴别检测,对猪的其它病毒和细菌的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明:该双重PCR方法能检出PEDV1pg、TGEV0.1pg的模板。同时采用建立的多重RT-PCR及韩国引进的PEDV和TGEV病毒抗原快速诊断试剂盒检测结果显示:此多重RT-PCR方法特异性强,且较快速试剂盒更加敏感。应用多重RT-PCR对158份临床猪粪样的检测结果表明:我国很多猪场普遍存在TGEV和PEDV,尤其以PEDV污染更为严重,感染率达53.2%,但双重感染率较低,仅为4.4%。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪呼吸道冠状病毒 双重rt-pcr
下载PDF
猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量：18
2
作者 李晶梅 刘丹 +5 位作者 薛霜 秦红刚 陈其兵 靖志强 漆世华 谢红玲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期66-71,共6页
猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒同属于黄病毒科瘟病毒属,在基因组序列上有很高的同源性,2种病毒交叉污染的情况十分严重,给疫病诊断和疫苗质量控制带来很大麻烦。为了更好的对这2种病的病原进行分子生物学鉴别检测,参考GenBank上2种病毒标... 猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒同属于黄病毒科瘟病毒属,在基因组序列上有很高的同源性,2种病毒交叉污染的情况十分严重,给疫病诊断和疫苗质量控制带来很大麻烦。为了更好的对这2种病的病原进行分子生物学鉴别检测,参考GenBank上2种病毒标准株的基因组序列,选取各自的保守基因区域设计可以进行鉴别检测的特异性引物,经过对PCR反应条件的优化,建立了可以对2种病毒同时检测的双重RT-PCR方法。该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪日本脑炎病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型的扩增结果均为阴性;该检测方法的敏感性为5ng病毒基因组RNA。建立的猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高,可以用于2种疫病的临床分子检测,也可用于猪瘟疫苗的质量控制,为2种病毒的交叉污染的检测提供一种方便、快捷的方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 牛病毒性腹泻病毒 双重rt—pcr 鉴别检测
下载PDF
太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重RT-PCR检测 被引量：14
3
作者 匡云波 陈满足 +2 位作者 陆伊荣 陈晶 叶祖云 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期784-791,共8页
针对不同产地栽培的太子参(Pseudostellaria heterophylla)中主要存在芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)和蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)侵染且为害严重的情况,建立能同时检测这2种病毒的双重RT-PCR快速检测方法。根... 针对不同产地栽培的太子参(Pseudostellaria heterophylla)中主要存在芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)和蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)侵染且为害严重的情况,建立能同时检测这2种病毒的双重RT-PCR快速检测方法。根据Gen Bank数据库中的Tu MV、BBWV外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列的保守区域分别设计简并引物,在单一RT-PCR检测体系的基础上,建立和优化双重RT-PCR检测体系。双重RT-PCR的优化结果显示,最佳扩增循环数为35,最佳引物浓度为0.4μmol·L^(-1),最佳退火温度为51℃。其灵敏度测定结果显示,2种病毒在样品c DNA稀释至原液的10-4倍后仍能扩增出特异条带。应用该方法对7份栽培太子参样品和4份脱毒苗样品进行了检测,结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏地同时检测Tu MV和BBWV。 展开更多
关键词 太子参 芜菁花叶病毒 蚕豆萎蔫病毒 双重rt-pcr
原文传递
猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒双重RT-PCR鉴别方法的建立 被引量：11
4
作者 刘邓 袁秀芳 +3 位作者 徐丽华 牛登元 王朝文 王一成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期1-5,共5页
根据GenBank发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Purdue P115株的基因序列,针对其基因保守区,设计1条共用的下游引物和2条各自病毒的上游引物,可特异扩增出大小分别为213 bp和546 bp目的条带。经过对TaqDNA... 根据GenBank发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Purdue P115株的基因序列,针对其基因保守区,设计1条共用的下游引物和2条各自病毒的上游引物,可特异扩增出大小分别为213 bp和546 bp目的条带。经过对TaqDNA聚合酶和Mg2+浓度、退火温度(Tm)等PCR反应条件的优化,最终确定该双重RT-PCR的最佳条件为TaqDNA聚合酶浓度为0.03 U/μL,Mg2+浓度为0.05 mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Tm为51℃。特异性和敏感性检测结果显示,所建立的检测方法具有很好的特异性以及较高的敏感性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 双重rt—pcr
下载PDF
鸭甲肝病毒基因A型和C型双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：12
5
作者 黄秋雪 汤承 +1 位作者 聂培婷 岳华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期120-123,共4页
为建立同时检测基因A型和C型鸭甲肝病毒(DHAV-A,DHAV-C)的双重RT-PCR方法,本实验根据GenBank中DHAV-A和DHAV-C全基因组序列,针对DHAV-A的3C、3D和DHAV-C的2C区域分别设计了2对引物,通过对反应体系和反应条件的优化及特异性、灵敏度评价... 为建立同时检测基因A型和C型鸭甲肝病毒(DHAV-A,DHAV-C)的双重RT-PCR方法,本实验根据GenBank中DHAV-A和DHAV-C全基因组序列,针对DHAV-A的3C、3D和DHAV-C的2C区域分别设计了2对引物,通过对反应体系和反应条件的优化及特异性、灵敏度评价,建立了检测DHAV-A和DHAV-C的双重RT-PCR方法。该方法能够分别从DHAV-A、DHAV-C阳性样本中扩增出DHAV-A(259 bp)和DHAV-C(194 bp)的特异片段,而不与其它被检的无关病原发生非特异反应;对DHAV-A和DHAV-C的最低检出限分别为4.98×104拷贝/μL、1.68×104拷贝/μL;对2009年8月至2011年7月送检病料检出DHAV-A和DHAV-C的阳性率分别为20%(14/70)、70%(49/70);随机抽取的DHAV-C PCR阳性样本的病毒分离结果与双重RT-PCR检测结果的符合率为100%(16/16)。本研究结果显示,建立的双重RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于临床DHAV的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 鸭甲肝炎病毒 基因A型 基因C型 双重rt-pcr 鉴别诊断
下载PDF
塞尼卡病毒与口蹄疫病毒双重RT-PCR鉴别检测方法的建立 被引量：11
6
作者 刘涛 黄元 +7 位作者 陈锦良 向华 肖少波 王晓虎 陈晶 向蓉 何继军 郑海学 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期16-21,共6页
2014~2015年,美国、巴西等国爆发了一种症状类似于口蹄疫的水泡性疾病,病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),本研究针对塞尼卡病毒的VP1基因和口... 2014~2015年,美国、巴西等国爆发了一种症状类似于口蹄疫的水泡性疾病,病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),本研究针对塞尼卡病毒的VP1基因和口蹄疫的5’UTR基因,合成特异性引物,优化了反应体系和扩增条件,建立了一种可同时检测塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒的双重RT-PCR方法。特异性和敏感性试验结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法特异性好,敏感性强,对塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒最低检出量分别为104 copies/μL、103 copies/μL。本研究建立的方法对临床快速鉴别塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒感染具有重要意义。 展开更多
关键词 塞尼卡病毒A 口蹄疫病毒 双重rt-pcr
下载PDF
双重RT-PCR快速检测H7N9流感病毒方法的建立 被引量：10
7
作者 蒋文明 李金平 +8 位作者 于美芳 孙文博 王素春 彭程 侯广宇 刘朔 杜翔 于建敏 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2015年第5期65-68,81,共5页
为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型... 为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR。对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板。利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 流感病毒 H7N9 双重rt-pcr
下载PDF
牛轮状病毒与病毒性腹泻病毒的双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：10
8
作者 张俭伟 赵宏坤 +3 位作者 杨少华 高运东 王长法 仲跻峰 《家畜生态学报》 2008年第1期91-93,共3页
建立了能够同时检测牛轮状病毒(BRV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的双重RT-PCR方法。应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分编码序列,其扩增产物分别为342bp和196bp。说明该方法... 建立了能够同时检测牛轮状病毒(BRV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的双重RT-PCR方法。应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分编码序列,其扩增产物分别为342bp和196bp。说明该方法的特异性强、敏感性高,可检测到1pg的病毒RNA,可应用于临床诊断和流行病学研究。 展开更多
关键词 双重rt-pcr 牛轮状病毒 牛病毒性腹泻病毒
下载PDF
猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR诊断方法的建立及初步应用 被引量：10
9
作者 韩丽 周雍 +4 位作者 李炳晓 曹贝贝 梁青青 张利卫 胡慧 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期557-562,共6页
自2014年美国首次报道猪Delta冠状病毒(PDCoV)以来,该病毒相继在我国一些猪场检测到,由于其发病症状和病理剖检与猪流行性腹泻(PED)极其相似,且易出现混合感染,临床很难区分,给养殖业造成严重经济损失,因此建立能够同时检测且能区分这... 自2014年美国首次报道猪Delta冠状病毒(PDCoV)以来,该病毒相继在我国一些猪场检测到,由于其发病症状和病理剖检与猪流行性腹泻(PED)极其相似,且易出现混合感染,临床很难区分,给养殖业造成严重经济损失,因此建立能够同时检测且能区分这两种病毒感染的诊断方法,对于临床实践具有重要意义。根据GenBank中登录的PDCoV和猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因序列,设计了2对分别用于扩增PDCoV N基因和PEDV M基因的目的片段的引物,通过对RT-PCR反应条件进行优化,建立了同时检测PDCoV和PEDV的双重RT-PCR检测方法,并对该方法进行了灵敏性、特异性和重复性研究。结果显示,该双重RT-PCR对PD-CoV和PEDV的最低检测量分别是3.14×10~3 copies/μL和3.88×10~4 copies/μL。该方法仅对PDCoV和PEDV检测为阳性,对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、博卡病毒(PBoV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病毒(PRV)等猪常见的感染病毒的扩增均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。用建立的双重RT-PCR方法对111份临床样品进行检测,其中PDCoV阳性样品22份,阳性率为19.82%,PEDV阳性样品27份,阳性率为24.32%,PDCoV和PEDV共感染的样品数为10份,阳性率为9.01%。本试验所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确地对PDCoV和PEDV单一或混合感染的临床样品进行快速检测,为临床上对PDCoV和PEDV鉴别诊断和流行病学调查研究提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 猪Delta冠状病毒(PDCoV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 双重rt-pcr
原文传递
甘薯羽状斑驳病毒和褪绿矮化病毒双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：9
10
作者 许泳清 李华伟 +6 位作者 邱思鑫 刘中华 邱永祥 罗文彬 纪荣昌 汤浩 余华 《福建农业学报》 CAS 2014年第11期1114-1117,共4页
根据GenBank中公布的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)外壳蛋白(CP)基因和甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)热激蛋白(Hsp70)基因序列保守区域设计了2对特异性引物,通过RT-PCR反... 根据GenBank中公布的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)外壳蛋白(CP)基因和甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)热激蛋白(Hsp70)基因序列保守区域设计了2对特异性引物,通过RT-PCR反应程序的优化,建立了能同时检测SPFMV和SPCSV的双重PCR检测体系。该检测体系能够1次扩增出SPFMV和SPCSV的特异性片段,片段大小为461bp和304bp,测序结果表明,2种病毒序列与参考序列的同源性达93%以上。 展开更多
关键词 甘薯 甘薯羽状斑驳病毒 甘薯褪绿矮化病毒 双重rt-pcr
下载PDF
猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：8
11
作者 胡鸿惠 南文金 +2 位作者 黄健强 吴静波 彭国良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2279-2284,共6页
本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该... 本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该一步法双重RT-PCR检测方法能同时特异性扩增PEDV和TGEV,该方法可检测到稀释度1×10-5的疫苗毒。应用本方法检测2015年度实验室收集的疑似样品,PEDV阳性率为100%。本研究建立的方法快速、敏感性高、特异性强,可用于临床PEDV和TGEV的快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 双重rt-pcr
下载PDF
猪流行性腹泻传染性胃肠炎双重RT-PCR检测方法的建立及优化 被引量：7
12
作者 赵光伟 涂少宇 +6 位作者 汪洋 贺然 赖靖尧 谭阳春 郭道兵 牛晨霞 杨晓伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期45-47,51,共4页
为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异... 为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异性良好,表明该研究建立的双重RT-PCR检测方法操作简单、特异性好,具有较高的检测灵敏性,为PEDV和TGEV的快速鉴别诊断和流行病学调查研究提供了更为敏感、快捷、可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 传染性胃肠炎病毒 双重rt-pcr
下载PDF
罗氏沼虾野田村病毒和双顺反子病毒双重RT-PCR检测方法与序列分析 被引量：7
13
作者 潘晓艺 刘杜鹃 +7 位作者 沈锦玉 张宇飞 蔺凌云 王军毅 郝贵杰 姚嘉赟 徐洋 袁雪梅 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期996-1002,共7页
罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(M.rosenbergii dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV... 罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(M.rosenbergii dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS-30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV-RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 双顺反子病毒 野田村病毒 双重rt-pcr
原文传递
鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重RT-PCR检测方法的建立及应用
14
作者 张景辉 武景琦 +10 位作者 房立春 刘涛 吴家强 于可响 徐怀英 吕俊峰 艾武 郭慧君 邱建华 亓丽红 宋玲玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期749-756,共8页
根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×1... 根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×10^(3)copies/μL。在鲁中、鲁西北及鲁南地区不同规模的养鹅场中随机采取320份样本,GAstV的阳性率为21.56%(69/320),NDRV的阳性率为3.44%(11/320),混合感染阳性率为2.81%(9/320),单一RT-PCR结果与双重RT-PCR方法一致。该方法的建立为快速诊断GAstV和NDRV提供了可靠的手段。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 鹅源新型鸭呼肠孤病毒 双重rt-pcr
原文传递
猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6
15
作者 李小璟 龚双燕 +5 位作者 陈瑛琪 李雨濛 蔡瑶 徐逸飞 朱玲 徐志文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期544-550,共7页
为快速简便地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中已发布的基因序列,选择PRRSV的ORF7基因和PEDV的S基因,分别设计1对特异性引物,通过对反应体系中各成分的优化,建立了可同时检测PRRSV和PEDV的双重... 为快速简便地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中已发布的基因序列,选择PRRSV的ORF7基因和PEDV的S基因,分别设计1对特异性引物,通过对反应体系中各成分的优化,建立了可同时检测PRRSV和PEDV的双重RT-PCR方法。本方法能从PRRSV和PEDV的混合基因组中分别扩增出300 bp和578 bp的特异性片段,且对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、轮状病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性;应用该方法对采自成都周边的79份临床样品进行检测,结果与单一RT-PCR的检测结果一致,具有良好的重复性;本方法检出的最小拷贝数为1.49×10~5copies/μL,敏感性也较好。本研究建立的双重RT-PCR方法具有较好实用性,可用于临床样品的检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪流行性腹泻病毒 ORF7基因 S基因 双重rt-pcr
原文传递
甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和矮化退绿病毒(SPCSV)的双重RT-PCR检测技术体系构建 被引量：6
16
作者 黄广学 孟利前 +3 位作者 朱建晨 张进 李庞博 肖海峻 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期724-729,共6页
在大田生产中,甘薯极易受到甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)和甘薯矮化退绿病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的混合侵染,导致甘薯产量和品质严重下降,因此构建能同时检测SPFMV和SPCSV两种... 在大田生产中,甘薯极易受到甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)和甘薯矮化退绿病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的混合侵染,导致甘薯产量和品质严重下降,因此构建能同时检测SPFMV和SPCSV两种病毒的检测技术体系对甘薯病毒病(sweet potato virus disease,SPVD)的预防具有重要意义。RT-PCR病毒检测技术具有灵敏度高、特异性强的优点。针对SPFMV和SPCSV病毒分别设计4对和3对特异性引物,通过单一RT-PCR检测技术筛选出特异性强的引物和最佳退火温度;在双重RT-PCR检测体系中,针对SPFMV和SPCSV两种病毒的引物浓度组合设置5个处理,优化双重RT-PCR病毒检测技术体系。单一RT-PCR检测结果表明,SPFMVS2/A2和SPCSVS2/A2引物的特异性最强,目的片段大小为461bp,对于SPCSV病毒来说,SPCSVS2/A2引物的特异性最强,目的片段大小为304bp,最佳退火温度为56℃;在双重RT-PCR检测技术体系中,SPFMV/SPCSV的引物组合浓度比为1∶3时,目标片段扩增效果最好。对两种病毒最低检测浓度的测试结果表明,SPFMV和SPCSV两种病毒RNA的最低检测浓度相当于模板RNA浓度的10-4μL。双重RT-PCR检测技术体系的构建,为大田生产中受SPFMV和SPCSV共侵染的甘薯病毒病的预防提供技术支持。 展开更多
关键词 甘薯 羽状斑驳病毒 矮化退绿病毒 双重rt-pcr 检测技术
下载PDF
兰花两种主要病毒双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：6
17
作者 曾燕君 莫饶 +1 位作者 刘志昕 王健华 《江西农业学报》 CAS 2009年第7期12-14,共3页
根据建兰花叶病毒（Cymbidium mosflic virus，CymMV）和齿兰环斑病毒（Odontoglossumringspotvirus，ORSV）这两种主要兰花病毒的保守序列设计特异性引物，在CymMV和ORSV单一RT～PCR优化体系的基础上。建立了同时检测CymMV和ORSV的双... 根据建兰花叶病毒（Cymbidium mosflic virus，CymMV）和齿兰环斑病毒（Odontoglossumringspotvirus，ORSV）这两种主要兰花病毒的保守序列设计特异性引物，在CymMV和ORSV单一RT～PCR优化体系的基础上。建立了同时检测CymMV和ORSV的双重RT—PCR检测方法。此方法可特异性地从感染CymMV和ORSV的样品中扩增出2条目的带，即CymMV（781bp）和ORSV（588bp）。扩增产物测序表明，CymMV扩增产物与GenBank中登陆的分离物核苷酸同源性为84％～97％，ORSV扩增产物与GenBank中其它分离物的核苷酸序列同源性为98％-99％。运用该方法对随机抽取的田间样品及组培苗样品进行检测，都得到了特异性扩增条带，其灵敏度达到了10^-5。 展开更多
关键词 双重rt-pcr 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 检测
下载PDF
基于一步法RT-PCR的瓜类单粒种子携带CGMMV的快速检测技术 被引量：2
18
作者 蒋庆琳 周国辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第9期1860-1865,共6页
为探究直接检测瓜类单粒种子携带黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的快速检测技术,以一步法RT-PCR为基础,构建同时扩增CGMMV基因组3′端和5′端基因的(一步法)双重RT-PCR、双重IC-RT-PCR和巢式双重IC-RT-PCR技术,灵敏度分别为10-3、10-3、10-4... 为探究直接检测瓜类单粒种子携带黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的快速检测技术,以一步法RT-PCR为基础,构建同时扩增CGMMV基因组3′端和5′端基因的(一步法)双重RT-PCR、双重IC-RT-PCR和巢式双重IC-RT-PCR技术,灵敏度分别为10-3、10-3、10-4,巢式双重IC-RT-PCR灵敏度比双重RT-PCR、双重IC-RTPCR高10倍。对不同种质、不同来源的种子及种子的不同部位进行检出率比较,巢式双重IC-RT-PCR检出率高于其它2个检测技术,试验种子种表带毒检出率高于种子组织研磨物,商用种子种表带毒检出率低于种子组织研磨物。为有效阻断毒源,建议同时对种表和种子组织研磨物进行检测,种表采用双重RT-PCR检测,种子组织研磨物采用双重IC-RT-PCR或巢式双重IC-RT-PCR检测。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 双重rt-pcr 双重IC-rt-pcr 巢式双重IC-rt-pcr 种子检测
下载PDF
猪瘟、猪蓝耳病双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6
19
作者 周怡 杨美 +3 位作者 王柏林 何玲 王开功 程振涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期81-84,共4页
为了方便、快速检测猪瘟和猪蓝耳病混合感染病例,试验根据GenBank登录的猪瘟病毒(CSFV)和蓝耳病病毒(PRRSV)基因序列,分别设计合成1对引物,建立检测猪瘟、猪蓝耳病的双重RT-PCR方法,并对引物浓度、退火温度进行优化。对优化后的RT-PCR... 为了方便、快速检测猪瘟和猪蓝耳病混合感染病例,试验根据GenBank登录的猪瘟病毒(CSFV)和蓝耳病病毒(PRRSV)基因序列,分别设计合成1对引物,建立检测猪瘟、猪蓝耳病的双重RT-PCR方法,并对引物浓度、退火温度进行优化。对优化后的RT-PCR方法进行特异性和敏感性试验,同时对临床样品进行检测。结果表明:采用建立的RT-CPR方法对CSFV、PRRSV进行扩增,分别扩增出508 bp和320 bp特异性片段,最佳引物浓度为0.4 pmoL/μL,最佳退火温度为55℃。采用该方法对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪口蹄疫病毒、猪流行性乙型脑炎病毒不能扩增出任何片段,特异性良好。对CSFV和PRRSV最低核酸检出含量分别为32.4 ng和2.4 ng,具有较好的敏感性。对贵阳市某规模化猪场采集的临床疑似病料检出率为100%。说明成功建立了一种快速鉴别诊断猪瘟和猪蓝耳病的双重RT-PCR方法,该方法具有较好的特异性、灵敏性和临床应用性,为猪瘟和猪蓝耳病的快速、准确鉴别诊断和防控提供了有效手段。 展开更多
关键词 猪瘟 猪蓝耳病 双重rt-pcr 建立 应用
原文传递
猪繁殖与呼吸综合征病毒和盖他病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6
20
作者 王新港 周峰 +6 位作者 王傲杰 崔丹丹 常洪涛 陈陆 杨霞 王新卫 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期232-238,共7页
盖他病毒（Getah virus,GETV）可感染猪并引起和猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）相类似的临床表现,且两者可混合感染而难以区分。我国检测PRRSV和其他诸多病毒的多重PCR文献已比比皆是,但尚... 盖他病毒（Getah virus,GETV）可感染猪并引起和猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）相类似的临床表现,且两者可混合感染而难以区分。我国检测PRRSV和其他诸多病毒的多重PCR文献已比比皆是,但尚无同时检测PRRSV和GETV方法的报道。为此,作者根据GenBank中公布的PRRSV和GETV全基因序列,设计了两对分别扩增PRRSV ORF7基因和GETV Cap基因片段的引物,通过反应条件的优化及特异性、灵敏性和重复性试验,首次建立了可同时检测PRRSV和GETV的双重RT-PCR方法。结果显示,该方法可以同时扩增出PRRSV 633bp和GETV 316bp的特异性片段,而对猪瘟病毒等其他相关病毒扩增结果均为阴性。对GETV和PRRSV的cDNA最低检测量分别为2.48×10-4 ng和2.50×10-5 ng。用建立的双重RTPCR方法对河南15个地市92个猪场的136份临床疑似PRRS发病猪样品进行检测,共从58个猪场检出PRRSV单一阳性样品44份,阳性率为32.4%;GETV单一阳性样品7份,阳性率为5.15%;GETV和PRRSV混合感染样品8份,阳性率为5.88%。检测结果与单一RT-PCR结果吻合率达100%。该方法为GETV和PRRSV的快速检测、鉴别诊断和分子流行病学研究等提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合症(PRRS) 盖他病毒(GETV) 双重rt-pcr
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 6 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部