期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到83篇文章
< 1 2 … 5 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
人β冠状病毒程序性核糖体移码效率评价系统的构建及应用
1
作者 张杰 陈丹瑛 +9 位作者 宋焱君 王媛媛 孙慧 刘雨欣 杨卓 于梦凡 李国力 刘欢 王玺 赵学森 《国际病毒学杂志》 北大核心 2024年第4期296-300,共5页
目的构建人β冠状病毒程序性核糖体移码效率评价系统,为筛选靶向核糖体移码的抗病毒宿主因子及药物提供工具。方法比对分析冠状病毒开放阅读框(open reading frame,ORF)1a和1b之间的核糖体移码序列,构建真核细胞表达双荧光报告质粒,通... 目的构建人β冠状病毒程序性核糖体移码效率评价系统,为筛选靶向核糖体移码的抗病毒宿主因子及药物提供工具。方法比对分析冠状病毒开放阅读框(open reading frame,ORF)1a和1b之间的核糖体移码序列,构建真核细胞表达双荧光报告质粒,通过共转染报告质粒与宿主因子表达质粒,验证宿主因子对人β冠状病毒程序性核糖体移码的影响。结果成功构建人β冠状病毒程序性核糖体移码真核细胞表达双荧光报告检测系统,通过该系统鉴定干扰素刺激基因产物C19orf66(称为"Shiftless")是抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)程序性核糖体移码的宿主因子。结论感染人的5种β冠状病毒中程序性核糖体移码位点进化保守,本研究中程序性核糖体移码效率评价系统的构建策略可广泛应用于抗冠状病毒药物筛选及病毒宿主互作研究。 展开更多
关键词 冠状病毒 程序性核糖体移码 RNA假结 宿主因子 双荧光报告系统
原文传递
果蝇P-TEFb与人源P-TEFb组成亚基间相互作用的研究 被引量：1
2
作者 陈斌 吴传芳 +1 位作者 欧阳劲 秦岭 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期396-401,共6页
本实验克隆了果蝇与人源P-TEFb(positive transcription elongation factor)组成亚基CycT、CDK9C末端分别带有Flag、HA标签的真核表达质粒,并在293细胞中验证了克隆所得质粒的有效表达.使用免疫共沉淀方法证实了两个种属P-TEFb组成亚基... 本实验克隆了果蝇与人源P-TEFb(positive transcription elongation factor)组成亚基CycT、CDK9C末端分别带有Flag、HA标签的真核表达质粒,并在293细胞中验证了克隆所得质粒的有效表达.使用免疫共沉淀方法证实了两个种属P-TEFb组成亚基间结构的相似性;借助HIV-luciferase与Rellina的双荧光报告系统证实了两个种属P-TEFb组成亚基间功能上的相似性. 展开更多
关键词 P-TEFB CDK9 CycT FLAG HA 免疫共沉淀 双荧光报告系统
原文传递
基于SSA修复机制和特异性核酸酶活性检测的双荧光报告载体系统的开发及应用 被引量：3
3
作者 韩芙蓉 王令 +2 位作者 徐坤 张智英 王昕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1053-1060,共8页
报告载体系统因构建快捷、改造简单、操作容易、经济有效,并且能通过介导筛选核酸酶阳性细胞富集基因组修饰的阳性细胞克隆,而成为特异性核酸酶活性检测的重要手段。基于非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复机制的报... 报告载体系统因构建快捷、改造简单、操作容易、经济有效,并且能通过介导筛选核酸酶阳性细胞富集基因组修饰的阳性细胞克隆,而成为特异性核酸酶活性检测的重要手段。基于非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复机制的报告系统在引入DNA双链断裂(Double strand breaks,DSBs)后,经过优化最高也只有2/3的概率实现报告基因的修复;而单链退火(Single strand annealing,SSA)修复机制在引入DSBs后,理论上可以实现报告基因100%的修复,具有更高的灵敏度,有利于活性较低的特异性核酸酶活性的检测,为基因组修饰研究中特异性核酸酶活性的检测提供了有效的手段。本研究设计并构建了3套基于SSA修复机制的双荧光报告载体系统,并应用m RFP-e GFP系统检测了3对ZFNs的有效活性,其活性检测结果分别为8.9%、9.3%和5.0%,该研究为核酸酶活性的检测提供了有效的手段。 展开更多
关键词 双荧光报告载体系统 特异性核酸酶
下载PDF
hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
4
作者 史春梅 徐广峰 +6 位作者 宋桂仙 季晨博 陈玲 杨蕾 庞玲霞 赵亚萍 郭锡熔 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期503-506,共4页
目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共... 目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。 展开更多
关键词 hsa-miR-26b 海绵体载体 双荧光素报告系统 人脂肪细胞
下载PDF
短发夹状RNA在人细胞诱导RNA干扰(英文) 被引量：7
5
作者 陈扬超 宋超 罗超权 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期566-570,共5页
背景与目的:RNA干扰是一种通过细胞内导入双链RNA而导致特异基因表达抑制的进化保守的转录后基因沉默现象,目前RNA干扰已成为研究基因功能的重要方法。本研究旨在利用DNA载体在细胞内产生短发夹状RNA(shorthairpinRNAs,shRNA),通过这些s... 背景与目的:RNA干扰是一种通过细胞内导入双链RNA而导致特异基因表达抑制的进化保守的转录后基因沉默现象,目前RNA干扰已成为研究基因功能的重要方法。本研究旨在利用DNA载体在细胞内产生短发夹状RNA(shorthairpinRNAs,shRNA),通过这些shRNA来诱导RNA干扰(RNAinterference,RNAi),为基因功能分析提供新的实验手段。方法:利用双荧光素酶报告系统来检测DNA载体在细胞内产生的shRNA诱导RNAi的效果。比较该载体产生的shRNA在不同条件下的RNA干扰效果。结果:DNA载体产生的shRNA在人细胞能诱导RNAi,序列特异地抑制基因表达。抑制效果与所选基因靶位点高度相关。结论:shRNA在人细胞能诱导RNA干扰,序列特异地抑制基因表达,这一方法可用于基因功能分析。 展开更多
关键词 短发夹状RNA RNA干扰 DNA载体 双荧光素酶报告系统 基因表达 细胞生物学
下载PDF
华蟾素注射液对HepG2细胞NF-κB通路的影响 被引量：9
6
作者 董云巧 马文丽 +1 位作者 顾金保 郑文岭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期137-139,142,共4页
目的探讨华蟾素注射液对肝癌细胞株HepG2NF-κB通路的影响。方法在TNF-α激活NF-κB通路的条件下利用双荧光素酶报告基因系统检测华蟾素注射液对含有NF-κB反应元件的萤火虫荧光素酶报告基因pNF-κB-TA-luc转录活性的影响。Western blot... 目的探讨华蟾素注射液对肝癌细胞株HepG2NF-κB通路的影响。方法在TNF-α激活NF-κB通路的条件下利用双荧光素酶报告基因系统检测华蟾素注射液对含有NF-κB反应元件的萤火虫荧光素酶报告基因pNF-κB-TA-luc转录活性的影响。Western blotting进一步验证华蟾素注射液对HepG2细胞核内NF-κB亚基p65蛋白量的影响,同时半定量RT-PCR检测NF-κB下游靶基因细胞间黏附分子1(ICAM-1)的转录水平。结果0.25、0.5μg/ml浓度的华蟾素注射液可有效地抑制pNF-κB-TA-luc报告基因的相对荧光素酶值(P<0.05)。Western blot结果进一步证明华蟾素可使NF-κB亚基p65蛋白量降低,RT-PCR结果表明NF-κB下游靶基因ICAM-1表达降低。结论华蟾素注射液的抗癌机制可能与抑制癌细胞NF-κB通路的活化有关。 展开更多
关键词 NF-ΚB 华蟾素 双荧光素酶报告系统 HEPG2
下载PDF
oar-miR-143在绵羊卵巢不同发育时期表达研究及靶基因CDK2的验证
7
作者 谷博 杨一 +3 位作者 易国栋 马福莲 孟新超 姜怀志 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期546-552,共7页
本研究前期通过高通量测序鉴定筛选出oar-miR-143在小尾寒羊卵巢不同发育时期发生差异表达并对其靶基因进行预测,通过GO和KEGG分析,推测其可能在卵巢发育过程中起到重要作用。本研究旨在对oar-miR-143预测到的靶基因进行验证,探究其影... 本研究前期通过高通量测序鉴定筛选出oar-miR-143在小尾寒羊卵巢不同发育时期发生差异表达并对其靶基因进行预测,通过GO和KEGG分析,推测其可能在卵巢发育过程中起到重要作用。本研究旨在对oar-miR-143预测到的靶基因进行验证,探究其影响和调控卵巢发育的可能分子机制。采用双荧光素酶检测系统,对筛选出的oar-miR-143与其候选靶基因CDK2的作用关系进行验证,首先进行miRNA与其候选靶基因结合位点的预测分析,然后构建含有靶位点的候选靶基因CDK2的野生型载体及突变型表达质粒载体,最后通过与oar-miR-143 minicis共转染293T细胞,进行双荧光素酶相对活性的检测。结果显示,oar-miR-143可抑制野生型CDK2-3’UTR载体的荧光素酶相对活性,而不影响突变型CDK2-3’UTR载体的荧光素酶相对活性,表明oar-miR-143可结合CDK2基因种子序列抑制CDK2的表达,CDK2被证实为oar-miR-143的靶向基因。这些数据将为阐明绵羊卵巢发育的分子调控机制,确定影响小尾寒羊繁殖性能的生物标志物提供了重要理论依据。 展开更多
关键词 小尾寒羊 卵巢发育 oar-miR-143 靶基因 双荧光素酶报告系统
原文传递
毒热平注射液对甲型流感病毒H3N2体外感染细胞中TLR7信号通路的影响 被引量：5
8
作者 牛旭艳 张春晶 顾立刚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期194-197,共4页
目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的... 目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的干预作用。方法:采用MTT法体外检测各组药物对293T、A549细胞增殖的影响;H3N2感染293T细胞后,利用双荧光素酶报告系统,以利巴韦林、清开灵注射液为药物对照,检测毒热平注射液各浓度组细胞中NF-κB相对荧光素酶活性;H3N2感染A549细胞后,RT-PCR方法检测各组细胞中TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA水平。结果:MTT结果显示,毒热平、利巴韦林、清开灵注射液各浓度不影响细胞正常增殖(P>0.05)。报告基因结果显示,与细胞对照组相比,H3N2感染组细胞NF-κB转录活性显著增高(P<0.01);与H3N2感染组相比,利巴韦林0.5μg/mL,清开灵1/128稀释组,毒热平1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL组均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H3N2病毒组的TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA表达明显增高(P<0.01);与H3N2感染组相比,一定浓度的药物组TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:流感病毒H3N2攻击细胞可以显著上调TLR7受体的表达和核因子NF-κB转录活性,并引起下游相关靶基因的表达增多。毒热平注射液可以下调H3N2引起的TLR7信号通路的激活,抑制NF-κB的转录活性,减少下游炎性因子TNF-α、IL-8、IFN-β的表达。关键词:H3N2;毒热平注射液;NF-κB;双荧光素酶报告系统;TLR7; 展开更多
关键词 H3N2 毒热平注射液 NF—κB 双荧光素酶报告系统 TLR7 信号转导
原文传递
TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究 被引量：6
9
作者 韩婷婷 孙岩 +3 位作者 张娟娟 刘晓影 官秀梅 高玉光 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第5期251-255,共5页
目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响。方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列。利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接。经酶切反应初步鉴定后,以pMD1... 目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响。方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列。利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接。经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842bp),并与pGL3-Basic载体连接。pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1ng/mLTGF-β1,12h后检测荧光素酶的活性。结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒。与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强。结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 基质金属蛋白酶-20 启动子 双荧光素酶报告系统
下载PDF
基于FAP基因启动子的心肌纤维化药物筛选系统的建立与验证
10
作者 周驰 阚洪爽 +3 位作者 杨雅元 孟祥雯 欧阳昌汉 杨晓松 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期194-199,共6页
目的建立以成纤维细胞激活蛋白(FAP)基因启动子为响应元件的新双荧光素酶报告基因系统建的心肌纤维化防治药物筛选方法。方法体外扩增小鼠FAP基因启动子片段,克隆至psiCHECK2质粒替换HSV-TK启动子,获得新的重组质粒psiCHECK2-FAP。重组... 目的建立以成纤维细胞激活蛋白(FAP)基因启动子为响应元件的新双荧光素酶报告基因系统建的心肌纤维化防治药物筛选方法。方法体外扩增小鼠FAP基因启动子片段,克隆至psiCHECK2质粒替换HSV-TK启动子,获得新的重组质粒psiCHECK2-FAP。重组质粒经限制性内切核酸酶HindⅢ消化后,进行琼脂糖凝胶电泳鉴定并纯化片段测序验证;将psiCHECK2-FAP瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞(MCF)培养24 h后,分别给予转化生长因子β1(TGF-β1)5μg·L^(-1),血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1μmol·L^(-1)或棕榈酸(PA)100μmol·L^(-1)处理0,12,24和48 h,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性。将psiCHECK2-FAP瞬时转染至MCF细胞培养24 h后,达格列净(Dapa)1μmol·L^(-1)预处理1 h,再分别添加TGF-β1(5μg·L^(-1)),AngⅡ(1μmol·L^(-1))或PA(100μmol·L^(-1))处理24 h,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,Western印迹法检测MCF细胞中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅢ的蛋白表达。结果HindⅢ将psiCHECK2-FAP切成2个片段且条带大小符合预期,测序结果与理论序列完全一致。与空白对照组相比,TGF-β1,AngⅡ和PA组均可显著增加MCF细胞中ColⅠ和ColⅢ表达(P<0.05,P<0.01);分别与TGF-β1,AngⅡ或PA组相比,Dapa干预后则显著降低ColⅠ和ColⅢ表达(P<0.05,P<0.01);与空白对照组相比,TGF-β1,AngⅡ或PA均可显著增加荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01),24 h达最大值;分别与TGF-β1,AngⅡ或PA相比,Dapa干预后则显著降低荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01)。结论以FAP基因启动子为响应元件的新双荧光素酶报告基因系统在MCF细胞中对促心肌纤维化因子表现出较好的敏感性,为心肌纤维化防治药物的研发提供策略。 展开更多
关键词 成纤维细胞活化蛋白 启动子 双荧光素酶报告系统 心肌纤维化 药物筛选
下载PDF
家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1的启动子调控区域活性检测 被引量：5
11
作者 黄明霞 杜杰 +3 位作者 刘云垒 赵国栋 卫正国 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期389-395,共7页
昆虫蜕皮激素通过与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)形成的异源二聚体相互作用,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,引起昆虫蜕皮。为了探究家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1(BmEcR-B1)表达的调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-... 昆虫蜕皮激素通过与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)形成的异源二聚体相互作用,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,引起昆虫蜕皮。为了探究家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1(BmEcR-B1)表达的调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统检测家蚕幼虫经蜕皮激素诱导后,脂肪体、马氏管、中肠组织内不同缺失片段的BmEcR-B1启动子活性。对各组织样品的检测结果均证明:BmEcR-B1启动子-138^-11 bp之间存在正调控元件,并且其活性能被蜕皮激素诱导。在细胞水平上进一步分析BmEcR-B1启动子调控区域,结果显示在-138^-108 bp区域包含的调控元件对于BmEcR-B1启动子的转录调控是必需的,序列分析显示这一区域包含有畸形基因编码蛋白Dfd和热休克转录因子(HSF)2个转录调控元件的结合位点。研究结果为探索BmEcR-B1在家蚕变态发育中的转录调控机制提供了有益线索。 展开更多
关键词 家蚕 蜕皮激素受体 启动子 双荧光素酶报告系统 转录调控
下载PDF
CLPTM1L与miR-494靶向关系的双荧光素酶报告实验验证 被引量：4
12
作者 张仁 张圣洁 +2 位作者 张学研 李彤 臧文巧 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第3期430-433,共4页
目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分... 目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为4组,分别共转染miR-494或阴性对照和pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR或pmir GLOCLPTM1L-M 3'UTR,检测4组细胞中荧光素酶活性。结果:酶切和测序证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR和pmir GLO-CLPTM1L-M 3'UTR;与共转染miR-494 mimics和突变型CLPTM1L3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(1.056 4±0.163 4)、共转染阴性对照序列和突变质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.961 3±0.177 9)或野生型质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.983 4±0.001 2)相比,共转染miR-494 mimics和野生型CLPTM1L 3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.651 6±0.136 4)明显降低(F=4.476,P=0.040),其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLPTM1L与miR-494存在靶向关系。 展开更多
关键词 miR-494 CLPTM1L 双荧光素酶报告系统
下载PDF
miRNA靶向调控CCR7抑制结肠癌细胞增殖及侵袭的研究 被引量：4
13
作者 林汉利 陈小欢 +1 位作者 王晓玲 曾浩涛 《国际医药卫生导报》 2017年第24期3832-3835,3839,共5页
目的探讨miRNA在调控趋化因子受体CCR7表达及对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响。方法利用生物信息学网站Target Scan、Pietar和miRanda，综合文献寻找与CCR7基因相互作用的miRNA，综合3个数据库和文献的结果选取5条miRNA分别为miR—let7、m... 目的探讨miRNA在调控趋化因子受体CCR7表达及对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响。方法利用生物信息学网站Target Scan、Pietar和miRanda，综合文献寻找与CCR7基因相互作用的miRNA，综合3个数据库和文献的结果选取5条miRNA分别为miR—let7、miR-21、miR-98、miR-145、miR-642研究。使用PCR方法扩增含CCR7基因3’-UTR区序列插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中，使用lipofectamine 2000转染试剂将报告载体和待筛选miRNA共转染293细胞，双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。用迁移和transwell小室实验检测所预测的miRNA对结肠癌HCT116细胞转移和侵袭能力的影响。用Westernblotting检测miRNA作用于结肠癌HCTll6细胞后对CCR7蛋白表达的调控。结果得到含CCR7基因3’-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒，并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。CCR7基因3’-UTR上有miRNA的调控作用靶点；双荧光素酶报告显示miR—let7、miR-21组比空白对照组CCR7基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降。miR-let7、miR-21能显著抑制结肠癌HCTll6细胞迁移和侵袭能力，并且下调CCR7蛋白在HCT116细胞中的表达。结论CCR7基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功，miRNA（miR—let7和miR-21）对CCR7有负调控作用。miR—let7和miR-21能抑制CCR7蛋白的表达，并抑制结肠癌细胞转移和侵袭能力。 展开更多
关键词 CCR7基因 结肠癌 MIRNA 双荧光素酶报告系统
下载PDF
艾迪注射液对氯化钴诱导的Hela细胞缺氧诱导因子-1蛋白稳定及转录活性的影响研究 被引量：3
14
作者 董云巧 顾金保 +1 位作者 顾立刚 李佩文 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期42-45,共4页
目的研究抗癌中药复方艾迪注射液对缺氧诱导因子-1(HIF-1)蛋白稳定性及转录活性的影响。方法MTT法检测艾迪注射液对Hela细胞增殖的影响。构建缺氧诱导因子-1的荧光素酶报告基因Hypoxia-responsive element-luciferase reportor gene(HRE... 目的研究抗癌中药复方艾迪注射液对缺氧诱导因子-1(HIF-1)蛋白稳定性及转录活性的影响。方法MTT法检测艾迪注射液对Hela细胞增殖的影响。构建缺氧诱导因子-1的荧光素酶报告基因Hypoxia-responsive element-luciferase reportor gene(HRE-LUC)利用双荧光素酶顺式报告系统,氯化钴模拟化学缺氧条件,检测不同浓度艾迪注射液对HRE-LUC相对荧光素酶值的影响。Western blot在蛋白质水平进一步验证在此条件下艾迪注射液对HIF-1α亚基蛋白稳定性的影响,RT-PCR进一步验证在此条件下艾迪注射液对HIF-1下游靶基因腺苷酸激酶3(AK3)转录水平的影响。结果艾迪注射液对Hela细胞增殖有明显的抑制作用。艾迪注射液200、300、400mL/L培养基组特异性地抑制缺氧条件下Hela细胞HRE-LUC相对荧光素酶值(P<0.05),且抑制作用随剂量增加而增强;Western blot显示艾迪注射液抑制氯化钴诱导的HIF-1α蛋白聚集,且抑制作用随剂量增加而增强;RT-PCR证实不同剂量的艾迪注射液均有抑制AK3基因转录的作用。结论艾迪注射液对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抗癌机制可能与抑制HIF-1α亚基蛋白稳定性及降低其转录活性有关。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子-1 双荧光素酶报告系统 艾迪注射液
原文传递
miRNA-7靶向SP1的3′UTR双荧光素酶报告基因载体构建及评价 被引量：3
15
作者 刘文莉 国东 +3 位作者 刘加霏 王玉珊 张焕虎(指导) 宋文刚(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期72-77,共6页
目的:构建胃癌细胞核转录因子SP1的3′非翻译区(3′UTR)双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-7(miR-7)调控SP1的分子机制。方法:应用相关生物信息学软件预测miR-7靶向作用于SP1基因的3′UTR区;PCR扩增人胃黏膜上皮细胞SP1的3′UTR,插入... 目的:构建胃癌细胞核转录因子SP1的3′非翻译区(3′UTR)双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-7(miR-7)调控SP1的分子机制。方法:应用相关生物信息学软件预测miR-7靶向作用于SP1基因的3′UTR区;PCR扩增人胃黏膜上皮细胞SP1的3′UTR,插入至psiCHECK2载体双荧光素酶基因下游,构建野生型(w-3′UTR)和突变型重组表达载体(m-3′UTR),鉴定正确后,分别与miR-7模拟物(mimics)/抑制物(inhibitor)/阴性对照物(NC)共转染胃癌细胞MKN45,检测荧光素酶活性及SP1表达情况。结果:成功构建SP1的3′UTR野生型(psiCHECK2-SP1-w-3′UTR)和突变型(psiCHECK2-SP1-m-3′UTR)表达载体,双荧光素酶报告基因检测显示w-3′UTR/miR-7-mimics组的相对荧光素酶活性表达受抑制,与miR-7 NC组比较降低75%,差异具有统计学意义(P<0.001),而m-3′UTR/miR-7-mimics组的活性表达没有受到影响(P>0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果显示miR-7-mimics组SP1表达水平低于miR-7 NC组(P<0.001),而miR-7-inhibitor组SP1表达水平高于miR-7 NC组(P<0.001)。结论:成功构建SP1的3′UTR野生型双荧光素酶报告基因表达载体,miR-7能够显著降低其荧光素酶活性,提示miR-7能靶向负调控SP1的表达。 展开更多
关键词 microRNA-7 SP1基因 双荧光素酶报告系统 MKN45 胃癌
下载PDF
犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究 被引量：3
16
作者 龚成燕 李连峰 +2 位作者 陈杰 胡博 赵建军 《特产研究》 2021年第2期1-7,共7页
为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 ... 为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 N蛋白 H蛋白 IFN-Β 双荧光素酶报告系统
下载PDF
雄激素受体激动剂与拮抗剂高通量筛选细胞模型的构建 被引量：3
17
作者 王卓娅 傅强 +2 位作者 刘彩云 梁高卫 吴培诚 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期472-475,共4页
有效的雄激素受体(androgen receptor,AR)激动剂与拮抗剂,可上调或下调雄激素受体刺激反应,起到治疗相关疾病的作用。高通量细胞筛选模型的建立,可扩大AR激动剂与拮抗剂筛选范围,加快筛选速度。本研究通过构建人雄激素受体表达重组质粒p... 有效的雄激素受体(androgen receptor,AR)激动剂与拮抗剂,可上调或下调雄激素受体刺激反应,起到治疗相关疾病的作用。高通量细胞筛选模型的建立,可扩大AR激动剂与拮抗剂筛选范围,加快筛选速度。本研究通过构建人雄激素受体表达重组质粒pcDNA 3.1-h AR,并与受雄激素效应元件调控的报告基因质粒MMTV-LTR-Luc F-R共转染人胚胎肾细胞293T,构建基于双荧光素酶报告基因的AR激动剂与拮抗剂筛选高通量细胞模型。AR激动剂5α-双氢睾酮可诱导该细胞模型荧光素酶的产生,AR拮抗剂尼鲁他明可拮抗5α-DHT的刺激作用,糖皮质激素受体激动剂地塞米松对细胞模型荧光素酶的产生无作用。 展开更多
关键词 雄激素受体 激动剂 拮抗剂 双荧光素酶报告系统 高通量筛选
原文传递
人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导的293T细胞NF-κB转录活性影响 被引量：3
18
作者 张春晶 顾立刚 +2 位作者 牛旭艳 王甫 彭桂英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期991-995,共5页
目的:观察人参皂苷Rg1对H2O2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制。方法:H2O2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS... 目的:观察人参皂苷Rg1对H2O2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制。方法:H2O2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS水平;利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1对荧光素酶报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶值的影响,以检测人参皂苷Rg1是否具有下调H2O2诱导的NF-κB转录激活的作用。结果:H2O2诱导损伤的293T细胞存活率随H2O2浓度的增高而下降,相同H2O2浓度下,人参皂苷Rg1预保护组细胞存活率较损伤组显著提高(P<0.05);H2O2处理后细胞内自由基明显增加,其荧光强度增加了40%～50%,而给予有效浓度的人参皂苷Rg1后,荧光强度降低35%～40%;与正常对照组比较,H2O2模拟氧化应激条件下,HEK293T细胞中NF-κB荧光素酶报告活性明显升高(P<0.05),而在人参皂苷Rg1预保护组则明显受到抑制(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对H2O2所致的细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其可能机制是有效地清除了细胞内过多的自由基,下调了转录因子NF-κB的转录活性,继而抑制了NF-κB通路的激活。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 氧化应激 NF-ΚB 双荧光素酶报告系统
下载PDF
外泌体源性oar-miR-10b在绵羊痘病毒感染绵羊睾丸细胞中的动态表达及靶基因的鉴定 被引量：2
19
作者 孔贺磊 吴金恩 +3 位作者 郑亚东 何贵天 李雅婷 丁军涛 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期42-48,共7页
以绵羊痘病毒(SPPV)感染绵羊睾丸细胞4h后外泌体中miRNAs的高通量测序结果为基础,应用RT-qPCR分析SPPV感染绵羊睾丸细胞4h、24h、48h和72h后外泌体中oar-miR-10b的动态表达;用双荧光素酶报告载体鉴定oar-miR-10b的靶基因。结果显示,在S... 以绵羊痘病毒(SPPV)感染绵羊睾丸细胞4h后外泌体中miRNAs的高通量测序结果为基础,应用RT-qPCR分析SPPV感染绵羊睾丸细胞4h、24h、48h和72h后外泌体中oar-miR-10b的动态表达;用双荧光素酶报告载体鉴定oar-miR-10b的靶基因。结果显示,在SPPV感染的不同时期,oar-miR-10b呈先增加后减少的趋势,特别是感染后24h的差异表达量为2.15倍;PmirGLO-BCL2L2-WT+oar-miR-10b mimics共转染组与PmirGLO-BCL2L2-WT+miRNA Negative Control对照组相比差异极显著(P <0.01),证实BCL2L2为oar-miR-10b的靶基因。结果表明,oar-miR-10b在SPPV感染的不同时期呈差异性表达,其靶基因为BCL2L2,为深入研究oar-miR-10b在SPPV感染中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 oar-miR-10b BCL2L2 实时荧光定量PCR 双荧光素酶报告系统
下载PDF
Speedy A蛋白调控相关miRNA的筛选及miR-23b靶标的验证 被引量：2
20
作者 丁宁 张瑶楠 +3 位作者 李媛媛 闫丽 贾孟春 刘美玲 《生殖医学杂志》 CAS 2018年第2期159-165,共7页
目的筛选和鉴定调控Speedy A蛋白表达的miRNAs。方法通过在线数据库TargetScan、miRNA和miRwalk预测与Speedy A相互作用的miRNAs,并结合本实验室前期建立的精原细胞和精母细胞小RNA数据库,筛选出评分较高的候选miRNAs。实时定量PCR检测... 目的筛选和鉴定调控Speedy A蛋白表达的miRNAs。方法通过在线数据库TargetScan、miRNA和miRwalk预测与Speedy A相互作用的miRNAs,并结合本实验室前期建立的精原细胞和精母细胞小RNA数据库,筛选出评分较高的候选miRNAs。实时定量PCR检测小鼠7、14、21、35、64d睾丸中候选miRNAs和Speedy A基因的表达,筛选出表达趋势呈显著负相关的miRNAs。构建野生型Speedy A基因3’端非翻译区荧光素酶报告基因载体(WT-Speedy A-3’UTR)及miR-23b靶序列突变型载体(mut-Speedy A-3’UTR),分四组转染HEK-293T细胞株:野生型实验组,WT-Speedy A-3’UTR质粒+miR-23bmimic;野生型对照组,WT-Speedy A-3’UTR质粒+miR-23b mimic NC;突变型实验组,mut-Speedy A-3’UTR质粒+miR-23bmimic;突变型对照组:mut-Speedy A-3’UTR质粒+miR-23bmimic NC,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果通过生物信息学方法结合本实验室前期建立的精原细胞和精母细胞小RNA数据库筛选出4个评分较高的miRNA:miR-23b、miR-143、miR-345-3p和miR-881。实时荧光定量PCR检测不同发育时期小鼠睾丸中以上4种miRNAs和Speedy A基因的表达水平,结果显示在不同发育时期的小鼠睾丸中,miR-23b的表达趋势与Speedy A呈显著负相关(P<0.01)。成功构建了重组野生型/突变型(WT/mut)Speedy A3’-UTR载体,通过双荧光素酶报告基因检测显示野生型实验组相比对照组吸光值明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论野生型实验组对其它3组对照组荧光活性有明显的抑制作用,证实miR-23b能够靶向调控Speedy A基因的表达。 展开更多
关键词 SPEEDY A miR-23b 生物信息学 双荧光素酶报告系统
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 5 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部