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北京棒杆菌新型天冬氨酸激酶双突变株Y198N/D201M的构建及酶学性质表征
被引量：
3
1
作者
魏贞
韩彩静
+4 位作者
高云娜
樊占青
王亚南
王哲人
闵伟红
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第18期127-133,共7页
利用定点突变提高天冬氨酸族氨基酸合成途径中的首个关键别构酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)活力,并解除其受到代谢产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)的协同反馈抑制。在获得北京棒杆菌单体AK并分析结构的基础上,选取ATP周围的关键残...
利用定点突变提高天冬氨酸族氨基酸合成途径中的首个关键别构酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)活力,并解除其受到代谢产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)的协同反馈抑制。在获得北京棒杆菌单体AK并分析结构的基础上,选取ATP周围的关键残基位点Tyr198和Asp201进行饱和定点突变,采用高通量筛选方法成功获得了酶活力提高到18.26倍的双突变体Y198N/D201M,动力学结果显示,K_m值由野生型(wild type,WT)的3.58 mmol/L减小到2.37 mmol/L,与底物亲和力增强;n值由WT的1.91减小到1.58,正协同性降低。酶学性质研究表明:双突变体Y198N/D201M最适反应温度由WT的25℃增至28℃,最适pH值由WT的8.0降至7.5,半衰期由WT的4.66 h延长至5.32 h。突变体Y198N/D201M较WT,在各个抑制剂浓度下活性抑制作用表现出不同程度的减弱,甚至在5 mmol/L和10 mmol/L Lys+Met、Thr+Met和Lys+Thr+Met条件下有激活作用。
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关键词
北京棒杆菌
天冬氨酸激酶
双
突变
株
酶活力
酶学性质
下载PDF
职称材料
肺炎克氏杆菌固氮酶双突变株的构建及其对底物还原的特性
被引量：
2
2
作者
赵德华
李季伦
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004年第15期1512-1518,共7页
通过定点突变及基因替代技术, 将肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae, Kp)野生型菌株的固氮酶钼铁蛋白a亚基中铁钼辅因子(FeMoco)周围多肽链的Glna190和Hisa194分别置换为Lys和Gln, 并构建成2个单突变株,命名为Kp-Qa190K和Kp-Ha194Q. ...
通过定点突变及基因替代技术, 将肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae, Kp)野生型菌株的固氮酶钼铁蛋白a亚基中铁钼辅因子(FeMoco)周围多肽链的Glna190和Hisa194分别置换为Lys和Gln, 并构建成2个单突变株,命名为Kp-Qa190K和Kp-Ha194Q. 将上述2个突变分别引入Kp-nifV突变株(与FeMoco 相连接的高柠檬酸被柠檬酸置换)获得另外2个双突变株, 命名为 Kp-Qa190K-nifV-和 Kp-Ha194Q-nifV-. 对上述4种突变株进行诱导培养和细胞的固氮酶活性分析表明, 4种突变株都失去了固氮活性, 乙炔(C2H2)还原活性也大幅度降低, Kp-Qa190K单突变株的乙炔还原活性比Kp-Ha194Q 单突变株下降得多; Kp-Qa190K-nifV-双突变株几乎完全丧失了活性, 而 Kp-Ha194Q-nifV-双突变仍保留野生型菌株10%的乙炔还原活性. 突变株将氘代乙炔(C2D2)还原成氘代乙烯(C2D2H2)的情况是: Kp-Qa190K和Kp-Ha194Q-nifV-突变株的C2D2还原产物中, 反式-1,2-二氘代乙烯比例比Kp野生型增加了1倍, 表明固氮酶催化加氢的立体构型选择性降低. 以上结果表明, 固氮酶活性中心周围多肽环境中Gln a190残基, 及与FeMoco相连的高柠檬酸, 可能直接参与质子和/或电子向活性中心FeMoco的传递. 推测Gln a190和与FeMoco的Mo原子相连的高柠檬酸, 在质子和/或电子通过Mo位?
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关键词
KLEBSIELLA
pneumoniae
双
突变
株
固氮酶活性
底物还原
肺炎克氏杆菌
原文传递
酵母海藻糖酶缺失突变株的构建及其耐性
被引量：
9
3
作者
吕烨
肖冬光
+1 位作者
和东芹
郭学武
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1301-1307,共7页
【目的】构建酵母海藻糖酶缺失突变株,并进行耐性分析,进一步研究海藻糖与酵母耐性之间的关系,为商业生产打下一定的基础。【方法】利用同源重组的方法,敲除了编码酸性海藻糖酶的ATH1基因和中性海藻糖酶的NTH1基因,构建了酸性海藻糖酶...
【目的】构建酵母海藻糖酶缺失突变株,并进行耐性分析,进一步研究海藻糖与酵母耐性之间的关系,为商业生产打下一定的基础。【方法】利用同源重组的方法,敲除了编码酸性海藻糖酶的ATH1基因和中性海藻糖酶的NTH1基因,构建了酸性海藻糖酶缺失突变株(△ath1)、中性海藻糖酶缺失突变株(△nth1)和双缺失突变株(△ath1△nth1),并进行了耐性分析。【结果】结合PCR和Southernblot的结果,验证了突变株构建的正确。所有突变株的海藻糖积累量和细胞密度均高于亲本,冷冻、高温、高糖和酒精耐性提高了。【结论】说明海藻糖含量与酵母耐性有一定的相关性。突变株耐性的改善,表明它们在酿造和烘焙产业中具有潜在的商业价值。
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关键词
海藻糖
中性海藻糖酶缺失
突变
株
酸性海藻糖酶缺失
突变
株
双
缺失
突变
株
酵母耐性
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职称材料
安全有效痢疾疫苗的研究
4
作者
陈锦荣
《生物制品快讯》
2001年第12期16-16,共1页
关键词
痢疾疫苗
免疫接种
野生型M907
aroC
突变
株
PURE
aroC
双
突变
株
IGA水平
预防
下载PDF
职称材料
题名
北京棒杆菌新型天冬氨酸激酶双突变株Y198N/D201M的构建及酶学性质表征
被引量：
3
1
作者
魏贞
韩彩静
高云娜
樊占青
王亚南
王哲人
闵伟红
机构
吉林农业大学食品科学与工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第18期127-133,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31771967)
长春市科技计划项目(17SS030)。
文摘
利用定点突变提高天冬氨酸族氨基酸合成途径中的首个关键别构酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)活力,并解除其受到代谢产物赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)的协同反馈抑制。在获得北京棒杆菌单体AK并分析结构的基础上,选取ATP周围的关键残基位点Tyr198和Asp201进行饱和定点突变,采用高通量筛选方法成功获得了酶活力提高到18.26倍的双突变体Y198N/D201M,动力学结果显示,K_m值由野生型(wild type,WT)的3.58 mmol/L减小到2.37 mmol/L,与底物亲和力增强;n值由WT的1.91减小到1.58,正协同性降低。酶学性质研究表明:双突变体Y198N/D201M最适反应温度由WT的25℃增至28℃,最适pH值由WT的8.0降至7.5,半衰期由WT的4.66 h延长至5.32 h。突变体Y198N/D201M较WT,在各个抑制剂浓度下活性抑制作用表现出不同程度的减弱,甚至在5 mmol/L和10 mmol/L Lys+Met、Thr+Met和Lys+Thr+Met条件下有激活作用。
关键词
北京棒杆菌
天冬氨酸激酶
双
突变
株
酶活力
酶学性质
Keywords
Corynebacterium pekinense
aspartate kinase
double mutant
enzymatic activity
enzymatic properties
分类号
Q517 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
肺炎克氏杆菌固氮酶双突变株的构建及其对底物还原的特性
被引量：
2
2
作者
赵德华
李季伦
机构
中国农业大学生物学院微生物系
出处
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004年第15期1512-1518,共7页
文摘
通过定点突变及基因替代技术, 将肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae, Kp)野生型菌株的固氮酶钼铁蛋白a亚基中铁钼辅因子(FeMoco)周围多肽链的Glna190和Hisa194分别置换为Lys和Gln, 并构建成2个单突变株,命名为Kp-Qa190K和Kp-Ha194Q. 将上述2个突变分别引入Kp-nifV突变株(与FeMoco 相连接的高柠檬酸被柠檬酸置换)获得另外2个双突变株, 命名为 Kp-Qa190K-nifV-和 Kp-Ha194Q-nifV-. 对上述4种突变株进行诱导培养和细胞的固氮酶活性分析表明, 4种突变株都失去了固氮活性, 乙炔(C2H2)还原活性也大幅度降低, Kp-Qa190K单突变株的乙炔还原活性比Kp-Ha194Q 单突变株下降得多; Kp-Qa190K-nifV-双突变株几乎完全丧失了活性, 而 Kp-Ha194Q-nifV-双突变仍保留野生型菌株10%的乙炔还原活性. 突变株将氘代乙炔(C2D2)还原成氘代乙烯(C2D2H2)的情况是: Kp-Qa190K和Kp-Ha194Q-nifV-突变株的C2D2还原产物中, 反式-1,2-二氘代乙烯比例比Kp野生型增加了1倍, 表明固氮酶催化加氢的立体构型选择性降低. 以上结果表明, 固氮酶活性中心周围多肽环境中Gln a190残基, 及与FeMoco相连的高柠檬酸, 可能直接参与质子和/或电子向活性中心FeMoco的传递. 推测Gln a190和与FeMoco的Mo原子相连的高柠檬酸, 在质子和/或电子通过Mo位?
关键词
KLEBSIELLA
pneumoniae
双
突变
株
固氮酶活性
底物还原
肺炎克氏杆菌
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
原文传递
题名
酵母海藻糖酶缺失突变株的构建及其耐性
被引量：
9
3
作者
吕烨
肖冬光
和东芹
郭学武
机构
天津科技大学天津市工业微生物重点实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1301-1307,共7页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金(20050057001)~~
文摘
【目的】构建酵母海藻糖酶缺失突变株,并进行耐性分析,进一步研究海藻糖与酵母耐性之间的关系,为商业生产打下一定的基础。【方法】利用同源重组的方法,敲除了编码酸性海藻糖酶的ATH1基因和中性海藻糖酶的NTH1基因,构建了酸性海藻糖酶缺失突变株(△ath1)、中性海藻糖酶缺失突变株(△nth1)和双缺失突变株(△ath1△nth1),并进行了耐性分析。【结果】结合PCR和Southernblot的结果,验证了突变株构建的正确。所有突变株的海藻糖积累量和细胞密度均高于亲本,冷冻、高温、高糖和酒精耐性提高了。【结论】说明海藻糖含量与酵母耐性有一定的相关性。突变株耐性的改善,表明它们在酿造和烘焙产业中具有潜在的商业价值。
关键词
海藻糖
中性海藻糖酶缺失
突变
株
酸性海藻糖酶缺失
突变
株
双
缺失
突变
株
酵母耐性
Keywords
trehalose
△nthl mutant
△athl mutant
△athlAnthⅠmutant
stress resistance
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
安全有效痢疾疫苗的研究
4
作者
陈锦荣
出处
《生物制品快讯》
2001年第12期16-16,共1页
关键词
痢疾疫苗
免疫接种
野生型M907
aroC
突变
株
PURE
aroC
双
突变
株
IGA水平
预防
分类号
R516.4 [医药卫生—内科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
北京棒杆菌新型天冬氨酸激酶双突变株Y198N/D201M的构建及酶学性质表征
魏贞
韩彩静
高云娜
樊占青
王亚南
王哲人
闵伟红
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
下载PDF
职称材料
2
肺炎克氏杆菌固氮酶双突变株的构建及其对底物还原的特性
赵德华
李季伦
《科学通报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
原文传递
3
酵母海藻糖酶缺失突变株的构建及其耐性
吕烨
肖冬光
和东芹
郭学武
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
9
下载PDF
职称材料
4
安全有效痢疾疫苗的研究
陈锦荣
《生物制品快讯》
2001
0
下载PDF
职称材料
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