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题名双果糖酐水解酶分子改造提升酶活性研究
被引量：1
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作者
徐寒冰
郁书怀
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机构
江南大学食品学院
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出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期1-8,共8页
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基金
国家自然科学基金-青年基金项目(31901630)
江苏省基础研究计划(自然科学基金)-青年基金项目(BK20190583)
江南大学中央高校基本科研计划-青年基金项目(JUSRP12007)。
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文摘
双果糖酐水解酶(difructose anhydrideⅢhydrolase,DFA-Ⅲase)能将新型功能甜味剂双果糖酐转化为益生元菊二糖,然而DFA-Ⅲase酶活性较低,为了提高DFA-Ⅲase酶法合成菊二糖的能力,该研究对来源于Arthrobacter chlorophenolicus A6的双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase进行分子改造。基于已有的AcDFA-Ⅲase的晶体结构,选择酶活性口袋上方loop区和活性口袋中的14个关键位点进行定点突变,得到17种DFA-Ⅲase突变体。利用96孔板作为高通量培养容器,结合DNS法快速测定酶活性,初筛得到一个酶活性提高的突变体D380A。用HPLC法测定分离纯化出的酶活性,验证结果表明其酶活性有显著提高,酶比活性是AcDFA-Ⅲase的162.3%。同源建模分析,380位天冬氨酸突变成丙氨酸后,loop环区域疏水性增强,保证了催化中心的疏水微环境,提高了酶的催化活性。该研究建立的高通量检测方法为DFA-Ⅲase的筛选以及菊二糖的大量生产奠定了基础。
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关键词
双果糖酐水解酶
定点突变
96孔板
高通量筛选
同源建模
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Keywords
DFA-Ⅲase
site-directed mutagenesis
96-well plates
high-throughput screening
homologous modeling
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分类号
TS201.25
[轻工技术与工程—食品科学]
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