蔗糖转运蛋白基因VvSUC11和VvSUC12双价植物表达载体的构建及在甜菜中的遗传转化 被引量：1

1

作者 殷东林 祝建波 +1 位作者 王爱英 向本春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1164-1173,共10页

将葡萄Vitis vinifera L.的蔗糖转运蛋白基因VvSUC11和VvSUC12与甘薯Ipomoea batatas L.Lam.的甘薯贮藏蛋白(Sporamin)基因的根部特异性启动子命名为SP1和SP2重组。以pCAMBIA2301为起始载体,构建了pCAMBIA2301-SP1-VvSUC11-SP2-VvSUC12... 将葡萄Vitis vinifera L.的蔗糖转运蛋白基因VvSUC11和VvSUC12与甘薯Ipomoea batatas L.Lam.的甘薯贮藏蛋白(Sporamin)基因的根部特异性启动子命名为SP1和SP2重组。以pCAMBIA2301为起始载体,构建了pCAMBIA2301-SP1-VvSUC11-SP2-VvSUC12用农杆菌介导法转化了甜菜Beta vulgaris L.品种KWS-9103,发现预培养4 d,侵染时农杆菌的浓度OD600值为0.5,附加0.005%表面活性剂Silwet L-77,延迟筛选4 d,转化效率最高,可达42%。对在卡那霉素中分化并生根的甜菜植株进行PCR和RT-PCR检测,证明目的基因已整合到甜菜中并表达,为进一步研究该基因在甜菜Beta vulgaris中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 蔗糖转运蛋白 双价载体 根部特异性启动子 甜菜 转化

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高效双价(Bt+cpti)表达载体的构建及其表达分析 被引量：1

2

作者 薛计雄 张锐 +4 位作者 张桦 孙国清 孟志刚 周焘 郭三堆 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期91-97,共7页

以已有的中间载体和表达载体为基础,对Bt、cpti基因进行了修饰。在cpti基因的5'端增加了大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI信号肽序列,在3'端增加了内质网滞留信号肽KDEL序列,然后在Bt基因的5'端增加了叶绿体靶向肽序列,构建了带有信... 以已有的中间载体和表达载体为基础,对Bt、cpti基因进行了修饰。在cpti基因的5'端增加了大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI信号肽序列,在3'端增加了内质网滞留信号肽KDEL序列,然后在Bt基因的5'端增加了叶绿体靶向肽序列,构建了带有信号肽的双价表达载体PGBIC(K).B.4A和不含信号肽的对照载体PGBIC.B.4A。通过农杆菌介导的喷花法转化陆地棉Y18,Southern杂交结果显示,外源基因已经整合到了受体植物基因组中;ELISA结果显示,所获得的5株阳性株蛋白表达量分别提高了1～8倍不等。在杀虫实验中,修饰的双价载体的转基因植株1/4-1由于蛋白表达量的积累而显示了较高的棉铃虫抗性。为获得更高抗性的双价转基因抗虫棉提供了一种新的方法,并为基因工程中提高外源蛋白积累量的研究。 展开更多

关键词 双价载体 高效 抗虫性 表达分析

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维管特异启动子BSP驱动的基因Chi、Glu双价载体构建

3

作者 刘玲玲 车树理 +2 位作者 禹娟红 李润红 原霁红 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期49-54,共6页

几丁质和β-1,3-葡聚糖是绝大多数真菌细胞壁的主要成份,可分别被几丁质酶(Chitinase,Chi)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,Glu)降解,而且它们具有协同抗真菌的作用,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶存在于大多数植物细胞中。在正常情况下... 几丁质和β-1,3-葡聚糖是绝大多数真菌细胞壁的主要成份,可分别被几丁质酶(Chitinase,Chi)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,Glu)降解,而且它们具有协同抗真菌的作用,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶存在于大多数植物细胞中。在正常情况下,植物体内的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶只有低水平的组成型表达,但在病原菌侵染、诱导物刺激及各种伤害下可诱导产生大量的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶。而真菌病害是危害植物的主要病害之一,这些病害主要通过韧皮部运输而进一步扩展到其他部位。如果利用维管特异表达启动子调节目的基因在韧皮部高效特异地表达,就可以更为有效地发挥目的基因的作用。为此,克隆了维管特异BSP启动子和Chi、Glu基因,并构建了以BSP驱动的Chi和Glu基因的双价表达载体pBIBCG。重组质粒pBIBCG经过PCR分析鉴定,结果表明,以维管特异启动子BSP驱动的含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功,为植物抗真菌基因工程育种奠定了基础,对提高植物的整体抗病性具有重要的作用。 展开更多

关键词 双价载体 维管特异启动子 几丁质酶 Β-1 3-葡聚糖酶

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AmAS1与Am4’CGT基因双价载体构建及在海棠花中的瞬时表达

4

作者 刘小微 李厚华 +2 位作者 王冰洁 费昭雪 阙怡 《北方园艺》 CAS 北大核心 2016年第14期97-102,共6页

以黄色金鱼草(Antirrhinum majus)、"雪球"海棠(Malus‘Snow drift’)为试材,采用农杆菌介导法,将构建的金鱼草素合酶基因(aureusidin synthase,AmAS1)和查尔酮4’-O-葡萄糖苷转移酶基因(chalcone 4’-O-glucosyltransferase,... 以黄色金鱼草(Antirrhinum majus)、"雪球"海棠(Malus‘Snow drift’)为试材,采用农杆菌介导法,将构建的金鱼草素合酶基因(aureusidin synthase,AmAS1)和查尔酮4’-O-葡萄糖苷转移酶基因(chalcone 4’-O-glucosyltransferase,Am4’CGT)双价表达载体在"雪球"活体花瓣上进行瞬时表达,并通过高效液相色谱分析和基因表达分析对瞬时表达效果进行鉴定。结果表明:成功构建双价表达载体CGT-AS-pCambia 1302,农杆菌侵染"雪球"花苞后,花苞呈现淡黄色,表明目的基因已在花瓣内转录并表达。高效液相色谱分析发现,侵染后的花苞出现新的吸收峰,进一步确定花瓣内有橙酮物质的合成。 展开更多

关键词 海棠 橙酮 双价载体 瞬时表达

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广谱抗病基因chi和hrpZpsta双价表达载体的构建及其在大豆中的遗传转化 被引量：2

5

作者 卢实 王丕武 +4 位作者 曲静 马建 张卓 吴楠 才源 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期26-31,共6页

大豆的真菌性病害已经成为了限制大豆产量增长及品质提高的主要原因,利用基因工程技术培育出具有广谱性抗病能力的大豆新品种,已成为目前提高大豆抗性的有效途径之一。本研究构建了含2种广谱抗病基因chi和hrp Zpsta的双价植物表达载体,... 大豆的真菌性病害已经成为了限制大豆产量增长及品质提高的主要原因,利用基因工程技术培育出具有广谱性抗病能力的大豆新品种,已成为目前提高大豆抗性的有效途径之一。本研究构建了含2种广谱抗病基因chi和hrp Zpsta的双价植物表达载体,利用农杆菌介导技术导入大豆中,获得了能够在转录水平上表达2种外源抗病性基因的转基因大豆。对经抗性筛选得到的阳性苗及后代植株进行PCR检测、Southern杂交、荧光定量PCR检测,共得到T0代阳性植株7株,T1代阳性植株27株。转化植株的基因组在整合外源基因时出现不同情况,chi-hrp Zpsta双价载体分别以单价和双价两种形式随机整合到受体大豆基因组中并且能稳定遗传,同时在转录水平上亦有不同。 展开更多

关键词 大豆 chi-hrpZpsta双价载体 SOUTHERN杂交 荧光定量PCR

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几丁质酶基因与抗真菌蛋白基因、葡聚糖酶基因双价表达载体的构建及农杆菌工程菌株的重组 被引量：4

6

作者 王华 周鹏 郭安平 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第2期250-256,共7页

几丁质酶 (Chitinase,Chi.)、β- 1 ,3 -葡聚糖酶 (β- 1 ,3 - Glucanase,Glu.)和萝卜抗真菌蛋白 (Rs- AFP2 )是植物体内正常的表达产物 ,它们对防御植物的真菌病害具有重要的作用。基于它们在功能上具有协同作用 ,本研究利用基因工程... 几丁质酶 (Chitinase,Chi.)、β- 1 ,3 -葡聚糖酶 (β- 1 ,3 - Glucanase,Glu.)和萝卜抗真菌蛋白 (Rs- AFP2 )是植物体内正常的表达产物 ,它们对防御植物的真菌病害具有重要的作用。基于它们在功能上具有协同作用 ,本研究利用基因工程技术构建了几丁质酶和抗真菌蛋白、几丁质酶和葡聚糖酶双价表达载体 ,通过农杆菌直接转化技术将双价表达载体转入农杆菌EH A1 0 5 ,最后采用 PCR、DNA dot 展开更多

关键词 几丁质酶 葡聚糖酶 抗真菌蛋白 双价表达载体 农杆菌工程菌株 重组

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与拟南芥抗寒性相关的CBF3和AtGolS3基因克隆及其表达载体的构建 被引量：2

7

作者 钟克亚 叶妙水 +2 位作者 胡新文 符少萍 郭建春 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2006年第4期708-712,共5页

用RT-PCR技术从拟南芥(Arabidopsisthaliana)中克隆到抗寒相关基因CBF3、AtGolS3,序列分析后用BLAST软件作同源序列分析的结果显示,它们的核苷酸序列与GenBank中登录的拟南芥CBF3(AF074602)、AtGolS3(AB062850)核苷酸序列完全相同。CBF3... 用RT-PCR技术从拟南芥(Arabidopsisthaliana)中克隆到抗寒相关基因CBF3、AtGolS3,序列分析后用BLAST软件作同源序列分析的结果显示,它们的核苷酸序列与GenBank中登录的拟南芥CBF3(AF074602)、AtGolS3(AB062850)核苷酸序列完全相同。CBF3和AtGolS3基因分别与植物表达载体pVKH相连构建pVKH-35S-CBF3-pA、pVKH-35S-AtGolS3-pA以及通过中间载体pRT101,将AtGolS3连接到pVKH-35S-CBF3-pA上,成为各自带有35S启动子及PolyA终止子的双价植物表达载体pVKH-35S-CBF3-pA-35S-AtGolS3-pA。 展开更多

关键词 CBF3基因 AtGolS3基因 pVKH植物表达载体 双价表达载体

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一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法 被引量：2

8

作者 刘明坤 刘昌财 +3 位作者 许志茹 魏志刚 阎秀峰 刘关君 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-92,共6页

通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时... 通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。 展开更多

关键词 35S Tnos pROKⅡ 双价表达载体

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西伯利亚蓼铜伴侣蛋白与铜锌超氧化物歧化酶基因共转化烟草的耐盐性分析 被引量：2

9

作者 马静 曲春浦 +2 位作者 许志茹 杨传平 刘关君 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期208-217,共10页

为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PC... 为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PCR验证转基因植株后测定了盐胁迫条件下转基因烟草的丙二醛(MDA)、活性氧、脯氨酸含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,以此鉴定转基因植株的耐盐性。结果表明:(1)Ps ATX和Ps SOD基因已成功整合到烟草基因组中;(2)在100 mmol·L-1Na Cl处理条件下,转双价基因植株的MDA、活性氧、脯氨酸含量均比野生型和转单价基因植株低,而SOD活性则高于这两类植株。证明Ps ATX和Ps SOD基因共转化的烟草植株比转单价基因植株具有更强的耐Na Cl能力。本研究将为研究Ps ATX和Ps SOD基因的抗逆机制奠定分子基础。 展开更多

关键词 铜伴侣蛋白基因 铜锌超氧化物歧化酶基因 双价表达载体 耐盐性

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双价反义载体构建及对大白菜的遗传转化 被引量：1

10

作者 佟容 乔宏宇 +4 位作者 王智博 吴春燕 陈姗姗 孙雨晴 于占东 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期533-537,共5页

为获得抗芜菁花叶病毒病、耐抽薹的大白菜植株,进行了双价反义植物表达载体的构建和遗传转化研究。在利用TuMV-Nib、LFY基因,构建成反义双价植物表达载体,转化农杆菌LBA4404,获得工程菌株的基础上,采用农杆菌介导的真空渗入法转化大白菜... 为获得抗芜菁花叶病毒病、耐抽薹的大白菜植株,进行了双价反义植物表达载体的构建和遗传转化研究。在利用TuMV-Nib、LFY基因,构建成反义双价植物表达载体,转化农杆菌LBA4404,获得工程菌株的基础上,采用农杆菌介导的真空渗入法转化大白菜4个高代自交系材料,获得了经PCR检测和TuMV感染鉴定的16株转基因植株。经田间鉴定有7株表现为抗病毒和耐抽薹。该结果可为抗病毒病、耐抽薹的转基因大白菜提供种质材料。 展开更多

关键词 大白菜 双价反义载体 无选择标记转基因 遗传转化

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啤酒花抗病毒双价RNAi植物表达载体的构建及遗传转化 被引量：1

11

作者 王琨 裴娟 +2 位作者 黎玉顺 祝建波 向本春 《山东农业科学》 2017年第1期1-6,共6页

为了构建对啤酒花潜隐病毒(Hp LV)和啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)有抗性的RNAi载体,本研究通过序列比对选取Hp LV外壳蛋白基因致病区202 bp和HpLVd 155 bp的保守序列作为干扰序列,以干扰载体p UCCRNAi为基础,成功构建出针对Hp LV和HpLVd的双... 为了构建对啤酒花潜隐病毒(Hp LV)和啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)有抗性的RNAi载体,本研究通过序列比对选取Hp LV外壳蛋白基因致病区202 bp和HpLVd 155 bp的保守序列作为干扰序列,以干扰载体p UCCRNAi为基础,成功构建出针对Hp LV和HpLVd的双价RNAi载体,通过特异性酶切位点将构建成功的RNAi载体的功能区域连接在植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS上,并利用农杆菌介导法将目的基因导入啤酒花中。经PCR鉴定证明RNAi载体已成功转入啤酒花中。本研究基于RNAi技术的植物表达载体构建和农杆菌介导的遗传转化,为诱导转基因植物的转录后基因沉默、获得抗多种病毒病的植物新材料提供参考。 展开更多

关键词 啤酒花 抗病毒 双价干扰载体 遗传转化

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菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基因的分离克隆及双价表达载体的构建 被引量：1

12

作者 晏慧君 张婷 +3 位作者 杨春梅 于丽霞 张宝琼 李涵 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第6期867-872,共6页

几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串... 几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串联在一起共同组建于一个表达载体pBI121中,重组表达质粒经过限制性酶切分析鉴定,结果表明含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功。为非洲菊、香石竹等花卉抗真菌基因工程育种奠定了基础。 展开更多

关键词 几丁质酶 葡聚糖 pB1121 双价表达载体

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含融合杀虫基因和VHb基因双价表达载体的构建

13

作者 王友如 郭三堆 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期6-8,共3页

目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导... 目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导序列、Kozak序列、多联终止密码子及Nos终止子以及正确切割、加工序列、Poly(A)信号序列。结果:通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得了转基因植株,结论:vgbM基因在转基因烟草中有效表达;融合杀虫基因也表达出活性毒蛋白。 展开更多

关键词 融合杀虫基因 VHB基因 双价表达载体 抗虫性 活性蛋白

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甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究 被引量：9

14

作者 陈利平 陈平华 +6 位作者 陈忠伟 王恒波 许莉萍 刘迪 高三基 郭晋隆 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期99-106,共8页

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分... 甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 展开更多

关键词 甘蔗黄叶病毒 甘蔗花叶病毒 CP基因 双价RNAi表达载体构建 遗传转化

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木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建 被引量：3

15

作者 肖琼 郭运玲 +2 位作者 孔华 贺立卡 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 2009年第5期688-693,共6页

淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一,包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBEII)两种类型,调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术,将这两种分支酶反义基因片段构建在一个植物表达载体中,形成双价反... 淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一,包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBEII)两种类型,调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术,将这两种分支酶反义基因片段构建在一个植物表达载体中,形成双价反义表达载体p1301-SBEII-Spo-SBEI,其中SBEII反义基因置于CaMV35S启动子之后,SBEI反义基因置于块根特异型启动子Sporamin之后,两者具有各自的Nos终止子。通过反复冻融法,将双价表达载体转入农杆菌EHA105,并采用PCR技术对所构建的农杆菌工程菌株进行了鉴定分析。 展开更多

关键词 木薯 淀粉分支酶基因 Sporamin启动子 反义双价表达载体 农杆菌工程菌株

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phaC1、phaC2基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得 被引量：3

16

作者 郑军荣 周鹏 洪葵 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第1期58-65,共8页

利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从类产碱假单胞菌YS1(PseudomonaspsuedoalcaligeneseYS1)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因 :phaC1、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对 phaC1基因进行了改造 ,经过基... 利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从类产碱假单胞菌YS1(PseudomonaspsuedoalcaligeneseYS1)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因 :phaC1、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对 phaC1基因进行了改造 ,经过基因拼接构建了植物表达载体pC3C1(嵌合phaC1)、pC3C2 (嵌合 phaC2 )和 pC3C1C2 (嵌合 phaC1和 phaC2双基因 )。将构建好的嵌合 phaC1和phaC2双基因的植物高效表达载体 pC3C1C2 ,用冻融法转入根癌土壤杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensEHA10 5 )并且通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatobacumHonghuadajinyuan)。 2个月后获得了一批卡那霉素抗性烟草植株 ,抗性植株大田生长表型正常 ,生长速度相对缓慢。抗性植株经过PCR、PCR Southern、Southern检测初步确定有 32 %烟草稳定整合了 phaC1和 phaC2。用氯仿 -次氯酸钠直接从部分Southern检测阳性转化植株中抽提纯化得到PHA ,在产物合成水平确证有 2 5 6 展开更多

关键词 phaC1基因 phaC2基因 双价植物表达载体 转基因烟草 聚-β-羟基脂肪酸脂 PHAS 生物合成 生物可降解塑料 生物反应器

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中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建 被引量：3

17

作者 廖正平 郑益平 +2 位作者 罗鹏 吴雪琴 曾黎辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第12期2382-2390,共9页

参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为... 参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为利用基因工程技术改良中国水仙奠定了基础。 展开更多

关键词 中国水仙 LCYE基因 BCH基因 反义技术 RNAI 双价植物表达载体

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海南PRSV-CP与rhIFNα-2b双价载体构建新策略 被引量：3

18

作者 周鹏 郭安平 黎小瑛 《热带作物学报》 CSCD 2003年第3期58-62,共5页

为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因... 为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因,利用pBI121、pCAMBIA2300载体及相关技术(如技术基因内部位点突变套叠PCR),实施双价基因表达载体的构建策略。本研究成果可为其他多价基因表达载体的构建提供技术依据。 展开更多

关键词 海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋 重组人源干扰素α-2b 双价基因表达载体 转基因 抗病性

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GmVP1基因克隆与转GmVP1/GmNHX1双价基因的大豆发状根耐盐性分析 被引量：2

19

作者 赵甜甜 范会芬 +3 位作者 孙天杰 肖付明 张洁 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期19-25,33,共8页

将Na^+外排和区隔化作用的Na^+/H^+逆向转运蛋白(NHX)的基因和能够为其提供跨液泡膜H^+梯度驱动力的液泡膜H^+-焦磷酸酶(VP)的基因共转化能够提高植物耐盐性。本研究从抗盐大豆品种‘冀豆7号’中克隆得到液泡膜H^+-焦磷酸酶基因GmVP1,... 将Na^+外排和区隔化作用的Na^+/H^+逆向转运蛋白(NHX)的基因和能够为其提供跨液泡膜H^+梯度驱动力的液泡膜H^+-焦磷酸酶(VP)的基因共转化能够提高植物耐盐性。本研究从抗盐大豆品种‘冀豆7号’中克隆得到液泡膜H^+-焦磷酸酶基因GmVP1,构建了GmVP1单价以及GmVP1与GmNHX1双价转化载体,利用发根农杆菌介导的大豆子叶转化体系验证其功能。结果表明,GmVP1在转录水平响应盐胁迫,GmVP1基因在一定条件下可以提高转基因大豆发状根对NaCl的耐受性,GmVP1/GmNHX1双价基因过表达比GmVP1单基因过表达更能提高大豆发状根相对生长量及其耐盐性。 展开更多

关键词 大豆 耐盐性 液泡膜H^+-焦磷酸酶基因 GmNHX1 双价基因载体构建

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抗除草剂bar基因植物表达载体的构建与抗性功能的检测 被引量：2

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作者 孟灵真 陈全家 +3 位作者 杨婷 阿依夏木.古丽 王希东 曲延英 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第4期265-268,共4页

根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的... 根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的质粒并与pBI121-bar重组,重组质粒命名为pBI121-bar/Bt。重组质粒导入农杆菌LBA4404工程菌中,转化新海24号棉花胚性愈伤组织。PPT抗性实验证明,构建的pBI121-bar/Bt载体获得抗除草剂抗性,并筛选出PPT临界筛选浓度为3.0mg/L。 展开更多

关键词 抗除草剂 抗虫 双价植物表达载体 棉花 PPT头孢霉素

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