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一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用 被引量:34
1
作者 罗文新 张军 +5 位作者 杨海杰 李少伟 谢小燕 逄淑强 李少菁 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期578-581,共4页
构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为Hi... 构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为His标签 ;含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因克隆至 pTO T7载体 ,在E .coli中的表达结果表明 ,融合EGFP达到菌体总蛋白量的 5 0 %以上 ,90 %以上的融合蛋白以可溶性形式存在 ,融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的 pT T7载体的表达产量的比较研究结果表明 ,Ω序列在 pTO T7载体中能显著提高表达效率。 展开更多
关键词 增强子 原核细胞 表达载体 PTO-T7 Ω序列
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日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3在原核细胞的高效融合表达和特性鉴定 被引量:22
2
作者 李德发 沈继龙 +4 位作者 祖莹 汪学龙 王维 郭泽坤 余龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期50-53,共4页
目的 构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法 用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Western... 目的 构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法 用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Westernblot分析。结果 获得pET2 8a -Sj14 - 3- 3重组表达载体 ,SDS -PAGE和Westernblot显示Sj14 - 3- 3基因在 pET2 8a中表达的融合蛋白约为 32 4kDa ,与天然 14 - 3- 3蛋白具有相同的免疫活性。 结论 日本血吸虫信号蛋白14 - 3- 3在原核细胞中得以高效表达 ,表达产物具有免疫活性 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白质 原核细胞 融合表达 特性鉴定 信号转导 免疫保护
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抗菌肽的研究进展(上)——基本特性及其活性影响因素 被引量:9
3
作者 杨星剑 王金洛 +1 位作者 徐福洲 杨兵 《农业新技术(今日养猪业)》 2005年第3期38-40,共3页
关键词 抗菌肽 活性影响 研究进展 真核细胞 高等动物 基因编码 生物细胞 外界条件 作用机制 原核细胞 双分子层 细胞 分子量 热稳定 微生物 胆固醇 多肽
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High Level Expression of Grass Carp Reovirus VP7 Protein in Prokaryotic Cells 被引量:14
4
作者 Lan-lan ZHANG Jin-yu SHEN +2 位作者 Cheng-feng LEI Xiao-ming LI Qin FANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第1期51-56,共6页
Sequences analysis revealed Grass carp reovirus (GCRV) s10 was 909 nucleotides coding a 34 kDa protein denoted as VP7, which was determined to be a viral outer capsid protein (OCP). To obtain expressed OCP in vitro, a... Sequences analysis revealed Grass carp reovirus (GCRV) s10 was 909 nucleotides coding a 34 kDa protein denoted as VP7, which was determined to be a viral outer capsid protein (OCP). To obtain expressed OCP in vitro, a full length VP7 gene was produced by RT-PCR amplification, and the amplified fragment was cloned into T7 promoted prokaryotic expression vector pRSET. The recombinant plasmid,which was named as pR/GCRV-VP7,was then transformed into E.coli BL21 host cells. The data indicated that the expressed recombinant was in frame with the N-terminal fusion peptide. The over-expressed fusion protein was produced by inducing with IPTG, and its molecular weight was about 37kDa, which was consistent with its predicted size. In addition, the fusion protein was produced in the form of the inclusion body with their yield remaining steady at more than 60% of total bacterial protein. Moreover,the expressed protein was able to bind immunologically to anti-his-tag monoclonal antibody (mouse) and anti-GCRV serum (rabbit). This work provides a research basis for further structure and function studies of GCRV during entry into cells. 展开更多
关键词 Grass carp reovirus (GCRV) VP7 protein Prokaryotic expression
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融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究 被引量:8
5
作者 贾荣 樊明文 +3 位作者 边专 郭继华 陈智 杜民权 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期456-458,I003,共4页
目的 将变形链球菌 (Streptococcusmutans)表面蛋白PAc编码A区和P区 (A P)的序列克隆到真核载体pGLU中 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗 ,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA P质粒中A P片段序列与pGLU质粒连接 ,构建... 目的 将变形链球菌 (Streptococcusmutans)表面蛋白PAc编码A区和P区 (A P)的序列克隆到真核载体pGLU中 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗 ,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA P质粒中A P片段序列与pGLU质粒连接 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P。将pGLUA P转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA P的表达。通过脂质体将pGLUA P转染大鼠原代肌母细胞 ,以免疫组织化学检测GLUA P的表达。结果 GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P经酶切分析证实携带GLU和A P片段。pGLUA P转化的大肠杆菌BL2 1 (DE3)经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论 成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA P ,所携带的基因序列正确 。 展开更多
关键词 融合防龋DNA疫苗 pGLUA-P 葡糖转移酶类 表面抗原 龋齿 变形链球菌 原核细胞 真核细胞
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氧化应激与原核基因表达的调控 被引量:9
6
作者 陈瑗 周玫 《生命的化学》 CAS CSCD 1994年第6期3-6,共4页
氧化应激与原核基因表达的调控陈瑗,周玫(第一军医大学自由基医学研究室,广州510515)关键词氧化应激,基因表达,原核细胞在正常情况下,细胞中活性氧的生成和消除处于平衡状态。当活性氧浓度超过细胞消除能力时即产生氧化应... 氧化应激与原核基因表达的调控陈瑗,周玫(第一军医大学自由基医学研究室,广州510515)关键词氧化应激,基因表达,原核细胞在正常情况下,细胞中活性氧的生成和消除处于平衡状态。当活性氧浓度超过细胞消除能力时即产生氧化应激。如氧化应激程度超过细胞防御能力... 展开更多
关键词 氧化应激 基因表达 原核细胞 原核基因
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猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 被引量:7
7
作者 李红卫 涂长春 +5 位作者 余兴龙 金扩世 吕宗吉 李茂祥 章金钢 殷震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期146-152,共7页
应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,... 应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,以pHCE2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和pET28a(+)中,获得重组质粒pBVE2和pETE2,用酶切、PCR和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Westernblot和直接ELISA检测表明重组质粒pBVE2和pETE2转化、诱导的受体菌均能表达E2抗原。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 克隆 表达 原核细胞 猪瘟 诊断
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草鱼呼肠孤病毒RNA聚合酶基因功能区在原核细胞中的表达 被引量:6
8
作者 方勤 朱作言 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期86-88,共3页
An about 1.5kb functional domain sequence of GCRV-RdRp gene was obtained by using RT-PCR amplification.The amplified fragment was cloned into T7 promoted prokaryotic expression system pRSET-C vector and then was trans... An about 1.5kb functional domain sequence of GCRV-RdRp gene was obtained by using RT-PCR amplification.The amplified fragment was cloned into T7 promoted prokaryotic expression system pRSET-C vector and then was transformed into CaCl 2 treated TOP10F’and BL21(DE3)pLysS competent cells respectively.The recombinants were detected with restriction enzyme digestion and further confirmed the interest insert by sequencing pRSET-C/GCRV-RdRp plasmid,which was in frame with the N-terminal tag and in the proper orientation.SDS-PAGE revealed that the highly expressed fusion protein is produced by inducing with l nm IPTG,and its molecular weight is around 55kD,which is the right size corresponding to the predicted value.It indicated the fused protein was produced in the form of inclusion body with its yield remained steadly more than 60% of total bacterial protein. It also showed that the expressed protein was able to bind immunologically to rabbit anti-GCRV-VP2 serum. 展开更多
关键词 草鱼 呼肠孤病毒 RNA聚合酶 基因表达 原核细胞
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解脲支原体感染对人早孕胎盘蜕膜的影响 被引量:8
9
作者 夏昱 杨华 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2005年第1期57-59,共3页
关键词 UU感染 早孕 蜕膜 解脲支原体感染 胎盘 女性生殖道 常见 原核细胞 微生物 发现
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硒蛋白的基因表达与调控 被引量:4
10
作者 胥保华 许梓荣 《动物营养学报》 CAS CSCD 2003年第3期12-17,共6页
硒蛋白是微量元素硒以硒代半胱氯酸(SeC)形式进入多肽链的蛋白质。SeC的遗传密码是UGA。在原核细胞中,4种基因产物SELA、SELB、SELC和SELD参与了硒蛋白的合成过程。真核生物硒蛋白mRNA3’-UTR的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)是真核细胞UG... 硒蛋白是微量元素硒以硒代半胱氯酸(SeC)形式进入多肽链的蛋白质。SeC的遗传密码是UGA。在原核细胞中,4种基因产物SELA、SELB、SELC和SELD参与了硒蛋白的合成过程。真核生物硒蛋白mRNA3’-UTR的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)是真核细胞UGA密码编码SeC的顺式作用元件。动物的硒营养状态不影响硒蛋白基因的转录,但影响硒蛋白mRNA的稳定性。饲料硒水平与含硒酶活性呈正相关。 展开更多
关键词 硒蛋白 基因表达 基因调控 硒代半胱氨酸 多肽链 蛋白质 遗传密码 原核细胞 真核细胞
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原核细胞表达的重组蛋白质复性研究进展 被引量:3
11
作者 阎哲 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 1997年第1期10-14,共5页
基因重组蛋白质的折叠复性是生物工程下游技术中最复杂、最关键的问题,本文概述了近年来基因重组蛋白质折叠复性的过程、机理、方法及检测手段方面的研究进展.
关键词 基因重组 蛋白质 复性 原核细胞
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热休克蛋白与抗丝虫感染研究 被引量:6
12
作者 吴建军 方政 《中国热带医学》 CAS 2004年第5期877-879,共3页
热休克蛋白是原核细胞和真核细胞在应激情况下合成的一组结构和功能高度保守的蛋白。有些热休克蛋白是持续合成的 ,在分子折叠中起着管家基因的作用。作为显性的免疫原 ,热休克蛋白广泛分布于各种丝虫 ,在丝虫的发育过程及宿主抗感染免... 热休克蛋白是原核细胞和真核细胞在应激情况下合成的一组结构和功能高度保守的蛋白。有些热休克蛋白是持续合成的 ,在分子折叠中起着管家基因的作用。作为显性的免疫原 ,热休克蛋白广泛分布于各种丝虫 ,在丝虫的发育过程及宿主抗感染免疫中发挥了重要的作用。热休克蛋白作为免疫反应中的靶抗原之一 ,有望成为抗丝虫疫苗的候选分子。 展开更多
关键词 热休克蛋白 丝虫感染 靶抗原 抗感染免疫 免疫反应 原核细胞 免疫原 发育过程 显性 应激
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细菌的氧化应激及基因表达调控 被引量:7
13
作者 郭书巧 徐鹏 倪万潮 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期5-8,共4页
细菌受到氧化胁迫时,在细胞内形成氧化伤害并作为一种生理信号激活特定的调控子,诱导某些具有抗氧化作用的蛋白质从而保护自身。其中最为重要的是两种氧化还原应答转录因子SoxR和OxyR调控子。前者是MerR家族成员,含有铁硫中心,在细胞内... 细菌受到氧化胁迫时,在细胞内形成氧化伤害并作为一种生理信号激活特定的调控子,诱导某些具有抗氧化作用的蛋白质从而保护自身。其中最为重要的是两种氧化还原应答转录因子SoxR和OxyR调控子。前者是MerR家族成员,含有铁硫中心,在细胞内以二聚体的形式存在,在感受到氧化剂刺激后激活SoxS基因的表达,形成SoxRS调控子,从而激活一系列抗氧化基因的表达;后者是LysR蛋白家族成员,在细胞内以四聚体的形式存在,含有一对半胱胺酸残基,能被H2O2氧化形成二硫键,激活下游基因的表达。 展开更多
关键词 原核细胞 氧化胁迫 SoxR OXYR
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猪弓形虫病的诊断与防治 被引量:1
14
作者 王永 《中国畜牧业》 2024年第3期99-100,共2页
猪弓形虫病是一种由弓形虫寄生于猪体内引起的疾病。该疾病在规模化生猪养殖中比较常见,因为猪容易通过食用感染了弓形虫的饲料或接触污染物而感染该病。此外,猪弓形虫病还对人类健康产生威胁,因为人类可通过食用感染了弓形虫的猪肉或... 猪弓形虫病是一种由弓形虫寄生于猪体内引起的疾病。该疾病在规模化生猪养殖中比较常见,因为猪容易通过食用感染了弓形虫的饲料或接触污染物而感染该病。此外,猪弓形虫病还对人类健康产生威胁,因为人类可通过食用感染了弓形虫的猪肉或接触的污染物而感染该病,引起严重的疾病,甚至会威胁生命。一、猪弓形虫病的病原体弓形虫属原生动物,是引起猪弓形虫病的病原体,该属原生动物具有单细胞结构,在结构上类似原核细胞,生存能力极强。 展开更多
关键词 猪弓形虫病 弓形虫 诊断与防治 原生动物 病原体 原核细胞 细胞 生存能力
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现代动物细胞培养反应器概述 被引量:7
15
作者 王洪跃 戴晓云 《中国医药生物技术》 CSCD 2010年第2期156-157,共2页
动物细胞在很多方面是不同于原核细胞和真菌的,例如较低的生长率、较高的剪切敏感性以及较低的气泡耐受性,这些特性会对动物细胞生物反应器的设计产生一定的影响。特别是搅拌与通气系统的构造需要满足细胞生长于尽可能优化的罐内环境中... 动物细胞在很多方面是不同于原核细胞和真菌的,例如较低的生长率、较高的剪切敏感性以及较低的气泡耐受性,这些特性会对动物细胞生物反应器的设计产生一定的影响。特别是搅拌与通气系统的构造需要满足细胞生长于尽可能优化的罐内环境中。只有实现均质搅拌,才可避免出现温度、pH、基质和产品浓度梯度的情况; 展开更多
关键词 动物细胞培养 生物反应器 原核细胞 细胞生长 通气系统 浓度梯度 生长率 耐受性
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低氧适应的进化 被引量:5
16
作者 吕国蔚 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第2期185-190,共6页
关键词 低氧活应 原核细胞 真核细胞 转录网络 信号转导
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柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白的原核表达及其免疫原性 被引量:6
17
作者 杨永娟 郝春生 +5 位作者 李懿 宋冬梅 刘宇 马淑花 田龙 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期1-4,8,共5页
目的原核表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)VP1蛋白,并检测其免疫原性。方法通过RT-PCR法从CA16病毒青岛株中扩增VP1基因,克隆至原核表达载体pET43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET43.1a-VP1,转化感受态E.coli R... 目的原核表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)VP1蛋白,并检测其免疫原性。方法通过RT-PCR法从CA16病毒青岛株中扩增VP1基因,克隆至原核表达载体pET43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET43.1a-VP1,转化感受态E.coli Rossatte(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组CA16 VP1蛋白通过Ni柱亲和层析纯化后,采用不同剂量(5、10、20、40μg)免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价,微量细胞病变抑制法检测血清中和抗体效价。结果重组表达质粒pET43.1a-VP1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组CA16 VP1蛋白相对分子质量约为34 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%;纯化的重组CA16 VP1蛋白纯度可达95%以上,可与猴CA16抗血清反应;不同剂量的重组CA16 VP1蛋白免疫BALB/c小鼠,可诱导产生CA16特异性抗体,血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价均明显高于对照组,且抗体效价与免疫剂量存在一定的量效关系;各剂量CA16 VP1组免疫小鼠血清中和抗体效价均小于1∶8。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CA16 VP1蛋白,纯化的重组蛋白可诱导小鼠特异性体液免疫应答,为进一步研究CA16的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 VP1蛋白 原核细胞 基因表达 免疫原性
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中国旱獭干扰素α家族基因在真核细胞和原核细胞中的表达 被引量:5
18
作者 卢银平 王宝菊 +5 位作者 黄红平 田拥军 杨燕 董继华 陆蒙吉 杨东亮 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-128,共5页
目的将不同基因型中国旱獭干扰素α(IFNα)基因在真核和原核细胞中进行表达,检测其生物学活性,以期利用克隆的中国旱獭IFN在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的IFN治疗方案和策略。方法利用分子克隆技术将14个不同亚型的中国旱獭IFNα家... 目的将不同基因型中国旱獭干扰素α(IFNα)基因在真核和原核细胞中进行表达,检测其生物学活性,以期利用克隆的中国旱獭IFN在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的IFN治疗方案和策略。方法利用分子克隆技术将14个不同亚型的中国旱獭IFNα家族基因亚克隆到真核表达载体,将中国旱獭IFNα5亚型基因亚克隆到原核表达载体。病毒保护实验检测表达产物的生物学活性,比较不同基因亚型IFNα生物学活性的差异,分析中国旱獭IFNα生物学活性的种属特异性。结果 14个基因亚型中国旱獭IFNα中,8个功能基因亚型真核表达产物有生物学活性,而6个假基因亚型产物没有生物学活性,8个功能基因亚型真核表达产物生物学活性存在差异,且其活性都受种属特异性限制。原核表达纯化产物具有较好的生物学活性。结论中国旱獭IFNα家族基因能在真核和原核细胞中表达,表达产物具有生物学活性。本研究为在中国旱獭乙型肝炎病毒感染模型上探索IFN治疗策略奠定了实验基础。 展开更多
关键词 干扰素Α 旱獭属 真核细胞 原核细胞
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禽白血病病毒p27基因在原核细胞的表达及生物学特性的初步分析 被引量:5
19
作者 韩静 陈晨 +1 位作者 曹红 陈福勇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期293-297,共5页
将禽白血病病毒(ALV)的p27基因克隆入表达性载体pET28a,在大肠杆菌以HisTag融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫家兔,制备了抗ALVp27的多克隆抗体,经亲和纯化后,用此抗体建立了对ALV抗原的双抗体夹心法ELISA,并对疑似病料进... 将禽白血病病毒(ALV)的p27基因克隆入表达性载体pET28a,在大肠杆菌以HisTag融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫家兔,制备了抗ALVp27的多克隆抗体,经亲和纯化后,用此抗体建立了对ALV抗原的双抗体夹心法ELISA,并对疑似病料进行了实验室诊断。检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到98.6%,证明表达产物保留了天然p27蛋白的相关抗原性。交叉试验和群特异性试验证明,此方法具有良好的特异性,并且可以检测出A、BJ、亚群的禽白血病病毒p27抗原。用此ALV抗体和所建立的ELISA方法成功地进行了禽白血病病毒抗原的实验室诊断。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 P27基因 生物学特性 初步分析 原核细胞 ELISA方法 实验室诊断 双抗体夹心法 表达产物 多克隆抗体 检测试剂盒 特异性试验 ALV 大肠杆菌 高效表达 融合蛋白 亲和纯化 检测结果 交叉试验 病毒抗原 克隆人 His
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Interactions between marine microorganisms and their phages 被引量:6
20
作者 ZHANG YongYu HUANG ChunXiao +1 位作者 YANG Jun JIAO NianZhi 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2011年第17期1770-1777,共8页
Viruses are the most abundant biological entities in marine ecosystems.Most of them are phages that infect bacteria and archaea.Phages play important roles in causing the mortality of prokaryotic cells,structuring mic... Viruses are the most abundant biological entities in marine ecosystems.Most of them are phages that infect bacteria and archaea.Phages play important roles in causing the mortality of prokaryotic cells,structuring microbial communities,mediating horizontal gene transfer between different microbes,influencing the microbial food web process,and promoting biogeochemical cycles (such as C,N,etc.) in the ocean.Here we provided an overview of recent advances in research on the interactions between marine microorganisms and their phages,and suggest future research directions based on our understanding of the literature and our own work. 展开更多
关键词 海洋微生物 相互作用 噬菌体 生物地球化学循环 微生物群落结构 海洋生态系统 原核细胞 基因转移
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