不同流动剪切力对原代大鼠成骨细胞细胞骨架的调节作用 被引量：9

1

作者 陈伟辉 乔鞠 +1 位作者 田卫东 李声伟 《广东牙病防治》 2003年第2期83-85,T001,共4页

目的　从细胞水平探索细胞骨架在将机械应力刺激信号转导进入细胞中并产生应答反应的作用机制。方法　在建立力学刺激细胞培养系统的基础上 ,对体外分离培养的原代大鼠颅骨成骨细胞分别施加 1.2或1.9N/m2 的流动剪切力 ,激光共聚焦显微... 目的　从细胞水平探索细胞骨架在将机械应力刺激信号转导进入细胞中并产生应答反应的作用机制。方法　在建立力学刺激细胞培养系统的基础上 ,对体外分离培养的原代大鼠颅骨成骨细胞分别施加 1.2或1.9N/m2 的流动剪切力 ,激光共聚焦显微镜下观察流动剪切力作用后成骨细胞细胞骨架的改变。结果　1.2N/m2 的流动剪切力作用 1h后 ,受力细胞及其细胞突起沿流动方向一致被拉长。细胞中央微丝呈束状排列 ,荧光标记强度明显增强。去除剪切力继续培养 2 4h后 ,细胞恢复无方向的排列 ,细胞胞浆微丝重新分布于细胞的周围。 1.9N/m2 的流动剪切力作用 1h后 ,受力细胞发生明显的皱缩 ,细胞脱落明显 ,胞浆微丝出现解聚消失现象。继续培养 2 4h后 ,细胞形态及微丝无明显恢复。结论　细胞骨架是成骨细胞受到流动剪切力后的一个机械刺激感受体 。 展开更多

关键词 流动剪切力 原代大鼠 成骨细胞 细胞骨架 调节作用

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低浓度胶原酶原位循环灌流法用于原代大鼠肝细胞分离 被引量：9

2

作者 姚云清 张定凤 +3 位作者 黄爱龙 周卫平 任 红 罗 云 《现代医药卫生》 2001年第2期84-85,共2页

目的:探索高效的原代大鼠肝细胞分离方法.方法:改进并建立低浓度胶原酶原位循环灌流法,比较肝细胞产量、存活率以及胶原酶用量等.结果:低浓度胶原酶原位循环灌流法肝细胞产量为1.584±0.525×108/100g大鼠体重,存活率达95.2... 目的:探索高效的原代大鼠肝细胞分离方法.方法:改进并建立低浓度胶原酶原位循环灌流法,比较肝细胞产量、存活率以及胶原酶用量等.结果:低浓度胶原酶原位循环灌流法肝细胞产量为1.584±0.525×108/100g大鼠体重,存活率达95.2±2.9%,肝细胞纯度＞95%,胶原酶用量减少为4.5 mg/100g大鼠体重.而非循环门脉灌流法肝细胞产量为0.508±0.456×108/100g大鼠体重,存活率为84±8%,胶原酶用量10mg/100g大鼠体重.结论:低浓度胶原酶原位循环灌流法为一经济、高效、实用的原代大鼠肝细胞分离技术. 展开更多

关键词 肝细胞分离 原代大鼠 低浓度胶原酶 原位循环灌流法

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原代大鼠胰岛的分离纯化及功能鉴定 被引量：4

3

作者 李小东 郭庆 +4 位作者 高璟英 张婉 武冬梅 刘云峰 章毅 《中西医结合心脑血管病杂志》 2014年第3期345-346,共2页

目的探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法,为成人胰岛的分离纯化奠定基础。方法通过用胶原酶P消化胰腺及利用Histopaque 1077分离液离心分离纯化雄性SD大鼠胰岛,用双硫棕(DTZ)染色,吖啶橙-碘化丙啶(AO/PI)染色和胰岛素分泌实验来鉴定胰岛... 目的探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法,为成人胰岛的分离纯化奠定基础。方法通过用胶原酶P消化胰腺及利用Histopaque 1077分离液离心分离纯化雄性SD大鼠胰岛,用双硫棕(DTZ)染色,吖啶橙-碘化丙啶(AO/PI)染色和胰岛素分泌实验来鉴定胰岛的纯度、活性和功能;利用激光共聚焦技术检测胰岛细胞中钙离子浓度。结果分离获得的胰岛可被DTZ和AO/PI分别染成猩红色和绿色;体外刺激胰岛素分泌实验,2.8mM、8.3mM、16.7mM葡萄糖情况下胰岛素分泌量分别是:(11.7±1.4)uIU/mL、(38.2±8.7)uIU/mL、(86.3±5.1)uIU/mL;在2.8mM葡萄糖基础上,8.3mM葡萄糖明显增加胰岛细胞中钙离子浓度,16.7mM葡萄糖在8.3mM葡萄糖基础上又进一步升高钙离子浓度。结论采用胶原酶P消化法及Histopaque 1077分离液离心分得的胰岛纯度高,活性、功能良好,随着葡萄糖浓度的增加,胰岛细胞中钙离子浓度明显增加。 展开更多

关键词 胰岛 分离 钙离子 原代大鼠

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三种脂质体法转染试剂转染原代大鼠气道平滑肌细胞效果的比较 被引量：1

4

作者 徐玉东 王宇 +2 位作者 魏颖 尹磊淼 杨永清 《中国医药生物技术》 2013年第5期384-387,共4页

气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）是呼吸道的重要组成部分之一，受气道内各类免疫细胞所释放的细胞因子和炎性介质的调节产生相应的收缩，其自身也能够分泌细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子和基质金属蛋白... 气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）是呼吸道的重要组成部分之一，受气道内各类免疫细胞所释放的细胞因子和炎性介质的调节产生相应的收缩，其自身也能够分泌细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子和基质金属蛋白酶等，参与气道炎症、气道高反应性与气道重塑的发生发展，是研究哮喘、COPD等气道呼吸性疾病细胞分子机制的重要载体。国内外研究中使用的ASMCs大多从活组织（比如动物气管、支气管和活检样品等）中分离并原代培养获得，这比细胞系更能准确地模拟来源组织在体内环境的特异性特征。 展开更多

关键词 气道平滑肌细胞 转染试剂 原代大鼠 脂质体法 分泌细胞因子 基质金属蛋白酶 气道高反应性 细胞分子机制

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乙型肝炎病毒致原代大鼠肝细胞凋亡的初步研究

5

作者 闫平男 王志玉 贾挺 《青岛医药卫生》 2005年第2期123-124,共2页

关键词 肝细胞凋亡 原代大鼠 乙型肝炎病毒(HBV) 步研究 体外感染模型 免疫活性细胞 传染性疾病 转氨酶升高 免疫损伤 临床表现 直接损伤 功能状态 初步探讨 内复制 于细胞

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三叶青提取物对肝癌细胞HepG_2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究 被引量：54

6

作者 丁钢强 郑军献 +1 位作者 魏克民 浦锦宝 《浙江预防医学》 2005年第9期1-2,5,共3页

目的探讨三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用。方法采用体外细胞培养技术,以细胞活性、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力的改变为指标,观察三叶青提取物对肝癌细胞HepG2,体外毒作用的时效、量效关系,共观察其对正常原代... 目的探讨三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用。方法采用体外细胞培养技术,以细胞活性、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力的改变为指标,观察三叶青提取物对肝癌细胞HepG2,体外毒作用的时效、量效关系,共观察其对正常原代培养大鼠肝细胞的影响。结果三叶青提取物以1×10-4g/L的浓度与HepG2共同培养,在24h较空白对照组的细胞活性有显著降低;不同浓度的提取物和HepG2共同培养,乙酸乙酯提取部位对细胞活性及酶学改变有显著性影响;对原代培养大鼠肝细胞活性及LDH也有一定的影响。结论三叶青提取物对HepG2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关,但对正常原代大鼠细胞毒性较小。 展开更多

关键词 HEP G2 原代大鼠肝细胞 三叶青

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知母皂苷BⅡ对Aβ_(25-35)诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用 被引量：20

7

作者 邓云 马百平 +3 位作者 从玉文 沈玉先 张晶晶 沈玉君 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期244-247,共4页

目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧... 目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10-4、10-5mol.L-1能明显增强Aβ25-35(20μmol.L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。 展开更多

关键词 知母皂苷BⅡ AΒ25-35 原代大鼠神经细胞

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赤豆荚果总黄酮提取物对原代培养大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用 被引量：13

8

作者 李波 赵青威 +2 位作者 Nadine Weber 楼宜嘉 Peter Proksch 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期397-400,405,共5页

目的:探讨赤豆荚果总黄酮提取物抗氧化作用以及对培养大鼠原代肝细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用Photochem抗氧化测定仪对赤豆荚果总黄酮提取物体外抗氧化作用进行评价,同时评价其对培养大鼠原代肝细胞Fe2+氧化损伤保护作用的量效... 目的:探讨赤豆荚果总黄酮提取物抗氧化作用以及对培养大鼠原代肝细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用Photochem抗氧化测定仪对赤豆荚果总黄酮提取物体外抗氧化作用进行评价,同时评价其对培养大鼠原代肝细胞Fe2+氧化损伤保护作用的量效、时效关系。结果:赤豆荚果总黄酮提取物具有较强的抗氧化作用,在40,80,120ng剂量下,抗氧化作用大于芹菜素(P<0.05)。培养的原代肝细胞中加入100 μmol/L Fe2+后肝细胞活性减弱,培养液中ALT活力升高(P<0.05),脱落明显。加入提取物后,可有效抑制上述损伤作用。论:赤豆荚果总黄酮提取物具有较强的体外抗氧化作用,对Fe2+导致的大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 原代大鼠肝细胞 氧化损伤 赤豆 黄酮 MTT 丙氨酸氨基转移酶

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果糖修饰壳聚糖微载体的制备及其原代大鼠肝细胞培养 被引量：5

9

作者 张立国 潘继伦 +1 位作者 李结良 俞耀庭 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期116-119,共4页

利用果糖修饰的壳聚糖为材料 ,液体石蜡作分散介质 ,戊二醛作交联剂 ,通过反相悬浮法制备了性能优良的微米级果糖修饰壳聚糖微载体。用其进行原代大鼠肝细胞培养 ,利用相差显微镜和扫描电镜对细胞形态进行观察 ,并测定了细胞的代谢活性... 利用果糖修饰的壳聚糖为材料 ,液体石蜡作分散介质 ,戊二醛作交联剂 ,通过反相悬浮法制备了性能优良的微米级果糖修饰壳聚糖微载体。用其进行原代大鼠肝细胞培养 ,利用相差显微镜和扫描电镜对细胞形态进行观察 ,并测定了细胞的代谢活性。结果显示果糖修饰的壳聚糖微载体是一种优良的肝细胞培养支架。 展开更多

关键词 果糖修饰壳聚糖 微载体 原代大鼠肝细胞 细胞培养

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天麻素抑制Keap1/Nrf2-泛素-蛋白酶体信号对高糖诱导原代大鼠心肌细胞损伤的作用及机制

10

作者 胡琦兰 张明山 +4 位作者 王银银 韦映丽 陶玲 张敏 沈祥春 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第7期937-946,共10页

目的探讨天麻素(GAS)抑制Keap1/Nrf2-泛素-蛋白酶体信号对高糖诱导原代大鼠心肌细胞损伤的作用及其机制。方法利用40 mmol/L高糖制作原代大鼠心肌细胞尿病心肌细胞损伤模型,将细胞分为正常对照组(25 mmol/L葡萄糖)、模型组、GAS低剂量(0... 目的探讨天麻素(GAS)抑制Keap1/Nrf2-泛素-蛋白酶体信号对高糖诱导原代大鼠心肌细胞损伤的作用及其机制。方法利用40 mmol/L高糖制作原代大鼠心肌细胞尿病心肌细胞损伤模型,将细胞分为正常对照组(25 mmol/L葡萄糖)、模型组、GAS低剂量(0.75μmol/L)治疗组、GAS高剂量(1.5μmol/L)治疗组及阳性药(二甲双胍,0.2 mmol/L)治疗组;48 h后取出细胞;利用吉姆萨染色法观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH外漏率,蛋白免疫印迹法检测血心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Keap1及血红素氧合酶1(HO-1)的表达,免疫荧光法检测Nrf2;为进一步研究GAS对蛋白酶体的作用,引入蛋白酶体抑制剂MG132,并将细胞分为正常对照组、模型组、MG132治疗组(1.0μmol/L)、GAS治疗组(1.5μmol/L)及MG132与GAS联合治疗组(1.0μmol/L MG132+1.5μmol/L GAS),利用蛋白免疫印迹法检测细胞中Nrf2,Keap1及泛素-蛋白酶体相关蛋白泛素激活酶(UBE1)、人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(PSMD11)、人蛋白酶体亚基α7(PSMA7)的表达,免疫荧光法检测Nrf2,免疫沉淀法检测泛素化Nrf2的表达。结果GAS可改善高糖诱导原代大鼠心肌细胞形态损伤、降低LDH外漏率(P<0.05);模型组细胞中ANP,BNP,Keap1,UBE1、PSMD11,PSMA7与泛素化的Nrf2的表达增加(P<0.05),Nrf2与HO-1的表达降低(P<0.05);给予不同浓度的GAS与阳性药二甲双胍后、可部分逆转上述蛋白的表达(P<0.05);GAS还可在一定程度上改善Nrf2的入核情况,同时GAS与MG132均有效下调模型组细胞中UBE1、PSMD11、PSMA7、Keap1与泛素化的Nrf2的表达(P<0.05),并增加Nrf2的表达(P<0.05),但GAS与MG132联用与单独使用GAS相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论GAS可以改善高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤,其机制可能是通过抑制Keap1介导Nrf2的泛素化、同时减少Nrf2的降解而抑制蛋白酶体活性。 展开更多

关键词 天麻素 原代大鼠心肌细胞 血心钠肽 脑钠肽 核因子E2相关因子2 泛素蛋白酶体系统 高糖

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三种原代大鼠肝细胞分离方法的比较 被引量：3

11

作者 张丽芳 王萍 胡晓 《江西医学院学报》 CAS 2009年第5期40-43,共4页

目的寻求一种高效、价廉的原代大鼠肝细胞分离方法。方法采用组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法对大鼠原代肝细胞进行分离。比较3种方法所获得的肝细胞的产率、存活率、纯度及胶原酶的用量。结果组织块法、胶原酶原位... 目的寻求一种高效、价廉的原代大鼠肝细胞分离方法。方法采用组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法对大鼠原代肝细胞进行分离。比较3种方法所获得的肝细胞的产率、存活率、纯度及胶原酶的用量。结果组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法所获得大鼠原代肝细胞的产量分别(0.21±0.11)、(1.87±0.51)、(1.94±0.55)×108/只大鼠;存活率分别为(54.34±8.21)%、(85.18±4.90)%、(90.34±4.46)%;肝细胞纯度分别为(68.80±10.30)%、(85.12±2.87)%、(91.84±30.3)%;胶原酶用量分别为(17.38±2.13)、(78.75±20.83)、(31.2±12.46)mg/只大鼠。结论相比于组织块法和胶原酶原位灌流法,胶原酶二步灌流法为一种经济、高效的原代大鼠肝细胞分离方法。 展开更多

关键词 原代大鼠肝细胞分离 组织块法 胶原酶原位灌流法 改良二步胶原酶灌流法 动物 实验 大鼠

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不同来源肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应的对比 被引量：2

12

作者 张志超 李妤 +2 位作者 丁琳 柳军 尚靖 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第5期850-853,共4页

目的:通过对比不同来源的人肝癌细胞系HepG2和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应,指导两种肝细胞在体外降脂药物评价中的实际应用。方法:用游离脂肪酸(油酸/棕榈酸,2:1)诱导HepG2细胞、原代大鼠肝细胞脂肪变性,并用100μmol&#... 目的:通过对比不同来源的人肝癌细胞系HepG2和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应,指导两种肝细胞在体外降脂药物评价中的实际应用。方法:用游离脂肪酸(油酸/棕榈酸,2:1)诱导HepG2细胞、原代大鼠肝细胞脂肪变性,并用100μmol·L-1苯扎贝特干预,检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、活性氧(ROS)含量,细胞内脂滴数目、并检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:FFA刺激使HepG2细胞和原代大鼠肝细胞脂质沉积(TG、脂滴)和氧化应激(ROS、MDA、SOD)水平上升。苯扎贝特对HepG2细胞1 mmol·L-1FFA造模组和原代大鼠肝细胞0.5 mmol·L-1FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平改善显著;而HepG2细胞0.5 mmol·L-1FFA造模组和原代大鼠肝细胞1 mmol·L-1FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平在苯扎贝特干预后变化不明显。结论:在相同FFA造模浓度,原代大鼠肝细胞病理特征变化更为明显;苯扎贝特对两种肝细胞在脂质沉积和氧化应激水平的作用也不完全相同。因而HepG2细胞和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应是不完全相同的。 展开更多

关键词 HEPG2细胞 原代大鼠肝细胞 脂质沉积 氧化应激

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滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注诱导的海马神经元线粒体自噬的影响 被引量：1

13

作者 刘桐赫 伍大华 +5 位作者 赵梓婷 施佳仪 张博璟 马倩柔 张闰程 张秀丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1189-1194,共6页

目的探究滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的原代海马神经元损伤的保护机制。方法分离的原代海马神经元经免疫荧光鉴定后,OGD/R诱导神经元损伤,激光共聚焦扫描显微镜观测不同再灌注时... 目的探究滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的原代海马神经元损伤的保护机制。方法分离的原代海马神经元经免疫荧光鉴定后,OGD/R诱导神经元损伤,激光共聚焦扫描显微镜观测不同再灌注时间自噬流的变化。OGD/R诱导的原代海马神经元再经滋肾活血方含药血清干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果10%的滋肾活血方含药血清可以明显提升细胞活力及降低细胞凋亡比例,增加神经元中自噬体的数量,并上调自噬相关蛋白PINK1、Parkin、p-ATG16L1的表达。结论滋肾活血方能有效抵抗OGD/R诱导的原代海马神经元凋亡,其作用可能与调控PINK1-Parkin通路促进线粒体自噬有关。 展开更多

关键词 滋肾活血方 原代大鼠海马神经元 OGD/R 线粒体自噬 含药血清 细胞凋亡

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mPEG-PLGA聚合物对大鼠肝脏CYP450酶活性的影响 被引量：1

14

作者 邱丽慧 斯陆勤 +4 位作者 涂坤 吴琪 李高 黄建耿 孙明辉 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期1276-1282,共7页

目的：研究mPEG-PLGA聚合物对大鼠肝CYP450酶活性的影响。方法：采用芘荧光探针技术测定mPEG-PLGA聚合物的临界胶束浓度（CMC）,并用薄膜分散法制备mPEG-PLGA聚合物胶束;分别采用大鼠肝微粒体和原代大鼠肝细胞模型,将mPEG-PLGA聚合物溶... 目的：研究mPEG-PLGA聚合物对大鼠肝CYP450酶活性的影响。方法：采用芘荧光探针技术测定mPEG-PLGA聚合物的临界胶束浓度（CMC）,并用薄膜分散法制备mPEG-PLGA聚合物胶束;分别采用大鼠肝微粒体和原代大鼠肝细胞模型,将mPEG-PLGA聚合物溶液与CYP450酶特异性探针底物孵育,经液-质联用技术（LC-MS/MS）检测代谢产物,通过比较代谢产物生成量的变化,评价聚合物对CYP450酶的抑制和诱导作用。结果：mPEG-PLGA聚合物的CMC为5.37μg·mL^-1;mPEG-PLGA聚合物浓度低于CMC时对大鼠肝CYP450酶无抑制作用;当聚合物胶束质量浓度≥100μg·mL-1时显示有抑制作用,且呈现浓度依赖性。mPEG-PLGA聚合物对CYP1A1/B2、CYP1A2、CYP2B1、CYP2C6、CYP2C11、CYP2D2、CYP3A1/2（底物为咪达唑仑）、CYP3A1/2（底物为睾酮）7种酶亚型的IC50值分别为1.13,2.37,2.38,1.77,1.32,1.17,1.12,0.91 mg·mL^-1,其中对CYP3A1/2的抑制作用最为明显。mPEG-PLGA聚合物在0.1～1 000μg·mL-1质量浓度范围对CYP1A2酶均有诱导作用,且在高质量浓度1 000μg·mL-1时最强（P〈0.001）;而该聚合物仅在0.1μg·mL-1时对CYP2B1、CYP2C6和CYP3A1/2酶呈现诱导作用（P〈0.05）。结论：mPEG-PLGA聚合物对大鼠肝脏CYP450酶亚型活性有一定的抑制和诱导作用,其抑制和诱导作用程度与酶亚型种类和聚合物浓度有关。 展开更多

关键词 mPEG-PLGA聚合物 CYP450 大鼠肝微粒体 原代大鼠肝细胞 抑制 诱导

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根皮素对rBMECs摄取人参皂苷Rb1的影响 被引量：2

15

作者 王玉珠 顾圣莹 +4 位作者 张吉刚 朱冠华 武鑫 刘皋林 李晓宇 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期226-232,共7页

目的以原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞为模型,研究根皮素对大鼠脑微血管内皮细胞摄取人参皂苷Rb1的影响。方法实验分为2组,人参皂苷Rb1对照组和根皮素干预组。运用LC-MS/MS测定大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取量,BCA法测细胞... 目的以原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞为模型,研究根皮素对大鼠脑微血管内皮细胞摄取人参皂苷Rb1的影响。方法实验分为2组,人参皂苷Rb1对照组和根皮素干预组。运用LC-MS/MS测定大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取量,BCA法测细胞蛋白浓度。结果根皮素干预组大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取量显著低于人参皂苷Rb1对照组(P<0.05)。结论根皮素可显著抑制大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取。 展开更多

关键词 摄取 根皮素 人参皂苷RB1 原代大鼠脑微血管内皮细胞

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苯巴比妥钠对环磷酰胺致大鼠肝细胞毒性的影响 被引量：1

16

作者 吴运生 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期1652-1654,共3页

目的:利用原代培养正常大鼠肝细胞研究苯巴比妥钠(PNB)对环磷酰胺(CP)致离体大鼠肝细胞的毒性作用。方法:用两步灌注法分离原代大鼠肝细胞;观察苯巴比妥钠(PNB)对环磷酰胺(CP)致离体大鼠肝细胞的毒性作用。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定... 目的:利用原代培养正常大鼠肝细胞研究苯巴比妥钠(PNB)对环磷酰胺(CP)致离体大鼠肝细胞的毒性作用。方法:用两步灌注法分离原代大鼠肝细胞;观察苯巴比妥钠(PNB)对环磷酰胺(CP)致离体大鼠肝细胞的毒性作用。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定PNB对原代大鼠肝细胞的最大无毒浓度(TC0),先用PNB的最大无毒浓度(TC0)诱导原代大鼠肝细胞24h,再直接加含不同浓度CP的培养液培养24h,MTT法测药物对细胞生长抑制率的影响,计算IC50。并测定药物作用后培养液上清中AST、ALT和LDH活性及培养液中GSH和细胞内GSH的含量。结果:经苯巴比妥钠诱导后的环磷酰胺各剂量组与未经苯巴比妥钠诱导的环磷酰胺各剂量组比较,细胞生长抑制率降低,培养液上清AST、ALT和LDH活性降低,培养液上清和细胞内GSH含量升高。结论:苯巴比妥钠能减轻环磷酰胺致离体大鼠肝细胞的毒性作用。 展开更多

关键词 苯巴比妥钠 环磷酰胺 原代大鼠肝细胞 细胞毒性

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miRNA-204靶向LC3B在AngⅡ诱导的心肌肥厚中的作用 被引量：1

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作者 黄炯华 戴文军 +3 位作者 林育辉 伍金雷 谢文杰 陈永权 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第9期1175-1178,共4页

目的探讨体外血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导原代大鼠心肌细胞肥大中miRNA-204靶向自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)表达的作用。方法以原代大鼠心肌细胞为研究对象,根据不同的处理分为对照组、AngⅡ组、联合1组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感... 目的探讨体外血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导原代大鼠心肌细胞肥大中miRNA-204靶向自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)表达的作用。方法以原代大鼠心肌细胞为研究对象,根据不同的处理分为对照组、AngⅡ组、联合1组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染阴性对照慢病毒载体)和联合2组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染miRNA-204慢病毒过表达载体)。各组在干预治疗后48~72h,行激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化,荧光定量PCR探测miRNA-204的表达,蛋白印迹测定LC3B的表达;同时,双荧光素酶活性基因报告验证miRNA-204的靶基因。结果与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞相对表面积明显增大,同时LC3B蛋白表达明显升高、miRNA-204表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与联合1组比较,联合2组能明显减少LC3B蛋白表达,同时使心肌细胞相对表面积缩小(P<0.05)。进一步的荧光素酶活性报告基因实验结果提示,miRNA-204能结合LC3B的非翻译区的野生型片段减少荧光素霉活性(P<0.05);但不能结合其突变型片段灭活荧光素酶活性(P>0.05)。结论 miRNA-204能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用是通过靶向LC3B的表达实现的。 展开更多

关键词 微RNA-204 心肌肥厚 血管紧张素Ⅱ 原代大鼠心肌细胞

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钙敏感受体参与镉致原代大鼠成骨细胞损伤 被引量：1

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作者 刘伟 冉迪 刘宗平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1311-1316,共6页

为探究钙敏感受体(CaSR)在镉致原代大鼠成骨细胞损伤中的作用,本研究用不同浓度的镉(1、2、5和10μmol/L)处理原代大鼠成骨细胞3 h,或用2μmol/L镉处理成骨细胞不同时间(10 min、30 min、1 h、3 h、6 h和12 h),或用2μmol/L镉与CaSR抑制... 为探究钙敏感受体(CaSR)在镉致原代大鼠成骨细胞损伤中的作用,本研究用不同浓度的镉(1、2、5和10μmol/L)处理原代大鼠成骨细胞3 h,或用2μmol/L镉处理成骨细胞不同时间(10 min、30 min、1 h、3 h、6 h和12 h),或用2μmol/L镉与CaSR抑制剂/激活剂共处理成骨细胞3 h。通过Western-blot检测CaSR蛋白表达水平,q RT-PCR检测CaSR基因转录水平,Hoechst33258染色观察细胞核形态变化。结果显示,不同浓度的镉处理以及2μmol/L镉处理成骨细胞不同时间,均能显著增强成骨细胞中CaSR蛋白的表达水平;镉处理显著升高成骨细胞中CaSR基因的转录水平;CaSR抑制剂可缓解镉对成骨细胞细胞核的损伤,CaSR激活剂加剧镉对成骨细胞细胞核的损伤。上述结果表明,Ca SR在镉致原代大鼠成骨细胞损伤过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 镉 钙敏感受体 原代大鼠成骨细胞 细胞损伤

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三氯生对原代大鼠卵巢颗粒细胞孕酮分泌影响的实验研究 被引量：1

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作者 杨鑫 魏真真 +2 位作者 陈威威 翁鑫宇 余晓丹 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第32期6222-6225,共4页

目的:研究三氯生对原代大鼠卵巢颗粒细胞孕酮(P4)分泌功能的影响。方法:原代大鼠卵巢颗粒细胞培养备用。取备用的卵巢颗粒细胞采用不同浓度的三氯生(0、0.01、0.1、1μM)染毒。24 h后分别采用MTT法检测颗粒细胞的相对活力、酶联免疫法(E... 目的:研究三氯生对原代大鼠卵巢颗粒细胞孕酮(P4)分泌功能的影响。方法:原代大鼠卵巢颗粒细胞培养备用。取备用的卵巢颗粒细胞采用不同浓度的三氯生(0、0.01、0.1、1μM)染毒。24 h后分别采用MTT法检测颗粒细胞的相对活力、酶联免疫法(ELISA法)检测颗粒细胞P4分泌水平、实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)及western blot法检测类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的基因及蛋白表达水平。结果:三氯生在本研究所采用的浓度范围内对颗粒细胞的活性并没有影响(P>0.05);三氯生(0.1、1μM)可抑制颗粒细胞P4的分泌,且呈现剂量依赖性下降(P<0.05)。三氯生(0.1、1μM)可使St AR的基因表达水平显著增高、P450scc的基因表达水平下降(P<0.05)。1μM三氯生可使St AR及P450scc的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。三氯生对3β-HSD的基因及蛋白表达水平皆没有影响(P>0.05)。结论:三氯生可抑制原代大鼠卵巢颗粒细胞的P4分泌,对类固醇激素合成关键分子的影响可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 三氯生 原代大鼠卵巢颗粒细胞 孕酮

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SPINK3促进体外培养的原代大鼠肝细胞增殖

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作者 常翠芳 罗亚茹 +7 位作者 郗玲玲 杨婧 郭建林 王改平 李青青 王雪 郭萃 徐存拴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1280-1288,共9页

肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)... 肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)在大鼠肝再生中表达显著改变。研究表明,SPINK3是一类结构与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)相似的生长因子,能够与表皮生长因子受体(EGFR)结合促进细胞增殖。本文通过基因过表达和干涉的方法处理原代大鼠肝细胞,通过CCK8法、Ki67免疫荧光法、PI单染法和Annexin V/PI双染法检测SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞活力、增殖、周期和凋亡的影响。结果显示SPINK3过表达时能够显著提高原代大鼠肝细胞的细胞活力,促进其细胞周期和增殖,并抑制其细胞凋亡,而干涉SPINK3表达则显著降低原代大鼠肝细胞的细胞活力,抑制其细胞周期和增殖,并促进其细胞凋亡。以上结果表明,SPINK3能够促进体外培养的原代大鼠肝细胞的增殖,并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ 原代大鼠肝细胞 细胞周期 细胞凋亡

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