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应用原代人呼吸道上皮细胞（HAE）分离鉴定陈旧性呼吸道样本中流感病毒 被引量：5
1
作者 朱娜 隗合江 +5 位作者 宋敬东 牛培华 王文 王大燕 舒跃龙 谭文杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期374-378,共5页
目的 采用分化良好的原代人呼吸道上皮细胞（HAE）对陈旧性呼吸道样本中流感病毒H3N2分离并与MDCK细胞进行比较.方法 选择青海地区1株2010年因不明原因肺炎采集的鼻咽拭子标本,经检测流感核酸弱阳性,血凝阴性.分别接种等量的呼吸道样本... 目的 采用分化良好的原代人呼吸道上皮细胞（HAE）对陈旧性呼吸道样本中流感病毒H3N2分离并与MDCK细胞进行比较.方法 选择青海地区1株2010年因不明原因肺炎采集的鼻咽拭子标本,经检测流感核酸弱阳性,血凝阴性.分别接种等量的呼吸道样本于HAE和MDCK细胞并进行传代,观察细胞病变,电镜观察病毒形态,测定全基因组序列,同时测定血凝活性.结果 MDCK细胞无法分离获得病毒,但HAE可成功分离病毒：盲传3代后,可观察明显细胞病变;电镜下为典型的流感病毒形态;流感血凝抑制活性1∶16;经病毒基因组序列测定确定为近年来流行的季节性流感病毒H3N2,命名A/Qinghai/178/2010（H3N2）,其序列与南京2010年流行株A/Nanjing/1655/2010（H3N2）亲缘关系最近.结论 HAE可应用于陈旧性呼吸道样本的病毒分离鉴定,用于流感病毒分离比MDCK细胞更灵敏. 展开更多
关键词 原代人呼吸道上皮细胞 甲型流感病毒 病毒分离 陈旧性样本
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一株Ⅲ型WU多瘤病毒的分离培养和全基因组进化分析
2
作者 黄益曼 陈爱珺 +6 位作者 王超 魏田力 呼壮 丛珊珊 谭精晶 姚立红 郑丽舒 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期182-190,共9页
目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本,利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对... 目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本,利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对WUPyV阳性样本进行病毒分离培养,Sanger测序获得全基因组,结合GenBank数据库中已公布的全基因组信息进行系统发育和进化动力学研究。结果WUPyV在2020—2022年的检出率为4.7%(31/659),并成功分离1株Ⅲc型WUPyV临床病毒株BJ0593。WUPyV全基因组及各基因片段同源性较高,VP2基因的平均进化速率约为每年1.256×10^(-4)个氨基酸替换/位点,种群动态在近十年内趋于平缓。结论本研究首次成功分离Ⅲ型WUPyV临床病毒株,为WUPyV的分子进化及致病性研究提供基础。 展开更多
关键词 WU多瘤病毒 分离培养 原代人呼吸道上皮细胞 全基因组分析
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人原代呼吸道上皮细胞培养及抗呼吸道合胞病毒活性
3
作者 丁惠如 赵敏 +5 位作者 程宁宁 付远辉 彭向雷 虞结梅 郑妍鹏 何金生 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期20-25,共6页
为建立人原代呼吸道上皮细胞(Human airway epithelial cell,hAEC)的培养方法,并在hAEC体系上探讨3-硫代吲哚类化合物RSV-A-4和免疫抑制剂代谢产物6-MMPr的抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)活性及其机制,从而构建可用... 为建立人原代呼吸道上皮细胞(Human airway epithelial cell,hAEC)的培养方法,并在hAEC体系上探讨3-硫代吲哚类化合物RSV-A-4和免疫抑制剂代谢产物6-MMPr的抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)活性及其机制,从而构建可用于RSV药物筛选及药效评价的细胞模型。采集人呼吸道上皮细胞样本,分离细胞后建立hAEC的培养方法,并进行细胞形态和活力鉴定;在hAEC体系上检测小分子化合物RSV-A-4和6-MMPr的抗RSV活性及其细胞毒性;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Time-of-addition assay技术,探讨RSV-A-4和6-MMPr的抑制RSV复制的作用机制。培养的hAEC经鉴定:其体外培养存活率可达93.51%;RSV-A-4和6-MMPr的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为(207.30±4.77)μmol/L和(3191.00±6.11)μmol/L,6-MMPr的半数细胞毒性浓度(Half maximal cytotoxic concentration,CC_(50))为(95526.00±10.97)μmol/L,而RSV-A-4对hAEC未见明显细胞毒性;RSV-A-4和6-MMPr均在RSV病毒基因组复制阶段抑制RSV复制。成功建立可用于抗RSV药物筛选及体外评价的hAEC培养体系,RSV-A-4和6-MMPr在细胞水平均能有效抑制RSV复制。 展开更多
关键词 人原代呼吸道上皮细胞 呼吸道合胞病毒 抗病毒化合物 抗病毒活性 抗病毒机制
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