黄艾美耳球虫大配子体发育及卵囊壁形成超微结构的研究 被引量：3

1

作者 王维 林昆华 殷佩云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期341-351,共11页

黄艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）大配子的发育在盲肠和结肠腺上皮中的带虫空泡内进行。大配子发育过程中出现两种成囊颗粒（ＷＦＢＩ和ＷＦＢＩｌ），且ＷＦＢＩｌ先于ＷＦＢＩ出现。其带虫空泡内有被膜空泡存在。... 黄艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）大配子的发育在盲肠和结肠腺上皮中的带虫空泡内进行。大配子发育过程中出现两种成囊颗粒（ＷＦＢＩ和ＷＦＢＩｌ），且ＷＦＢＩｌ先于ＷＦＢＩ出现。其带虫空泡内有被膜空泡存在。作者观察到了被膜空泡从虫体表面脱落的现象。此外，还发现一例大配子体在宿主细胞核中发育的现象。成熟的大配子受精以后，囊被开始形成。卵囊形成的标志是大配子两层膜（ｍ＿１，ｍ＿２）松弛，ＷＦＢＩ迁移到两层膜松弛后留下的空隙内，崩解并融合形成囊壁外层（ＯＷ）；在其内侧形成三层新膜（ｍ＿３、ｍ＿４、ｍ＿５），ＷＦＢⅡ崩解并透过ｍ＿５进入ｍ＿３与ｍ＿４之间的间隙中，融合形成囊壁内层（ＩＷ），ｍ＿１、ｍ＿２游离于带虫空泡内，ｍ＿５成为合子的限制膜。 展开更多

关键词 超微结构 球虫 共美耳属 大配子体发育 卵囊壁

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毁灭泰泽球虫(Tyzzeria perniciosa)内生发育的超微结构研究 4.大配子发育与卵囊壁形成 被引量：4

2

作者 汪明 孔繁瑶 《北京农业大学学报》 CSCD 北大核心 1989年第1期107-113,共7页

毁灭泰泽球虫的大配子是在含有泡内小管的带虫空泡中发育。成囊颗粒Ⅰ在大配子的细胞基质中发育,而成囊颗粒Ⅰ则形成于内质网之嵴内。少数多膜小体见于年轻大配子的细胞质浅层。成熟大配子含有大量的多糖颗粒、少数电子半透明小泡、内... 毁灭泰泽球虫的大配子是在含有泡内小管的带虫空泡中发育。成囊颗粒Ⅰ在大配子的细胞基质中发育,而成囊颗粒Ⅰ则形成于内质网之嵴内。少数多膜小体见于年轻大配子的细胞质浅层。成熟大配子含有大量的多糖颗粒、少数电子半透明小泡、内质网、线粒体和小管。合子外层膜的膨胀和分离标志着卵囊壁形成的开始。成囊颗粒Ⅰ的物质通过分子渗透过程在合子表面沉积,形成外层。当外层从合子表面分离之后,成囊颗粒Ⅱ的内容物在合子限制膜下累积成层。内层的形成可能是要通过多层物质的分泌与融合的连续过程。粗面内质网在成囊颗粒Ⅱ物质的转运,以及新膜的分离和形成中均起着重要的作用。成熟的卵囊壁由三层组成,分别称为外周膜、外层和内层。 展开更多

关键词 毁灭泰泽球虫 大配子发育 卵囊壁

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毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的分离与纯化

3

作者 查夕馨 杜彩娟 +2 位作者 黄晓星 刘丹丹 陶建平 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第2期94-96,共3页

用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6～12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔... 用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6～12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔径10.0μm的聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜过滤获得纯化的卵囊壁。研究结果为进一步研究毒害艾美耳球虫卵囊壁的结构及其蛋白组成奠定了基础。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 卵囊壁 分离 纯化

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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备 被引量：2

4

作者 于慧珠 岳城 +2 位作者 陈兆国 米荣升 夏延富 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期622-626,共5页

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检... 为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多

关键词 隐孢子虫鼠基因型 卵囊壁蛋白 CP41 克隆 原核表达

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隐孢子虫重组蛋白包被抗原的筛选及ELISA方法的建立及初步应用 被引量：2

5

作者 李军 唐林生 +7 位作者 彭昊 陶立 潘艳 陈泽祥 许力干 谢永平 杨威 黄维义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期286-290,共5页

为建立检测牛隐孢子虫抗体的间接ELISA方法,本研究将重组表达的隐孢子虫卵囊壁蛋白（COWP）、热休克蛋白70（HSP70）蛋白及COWP-HSP70串联蛋白分别作为包被抗原,进行反应条件的优化,建立了3种间接ELISA检测方法。建立的这3种方法均具有... 为建立检测牛隐孢子虫抗体的间接ELISA方法,本研究将重组表达的隐孢子虫卵囊壁蛋白（COWP）、热休克蛋白70（HSP70）蛋白及COWP-HSP70串联蛋白分别作为包被抗原,进行反应条件的优化,建立了3种间接ELISA检测方法。建立的这3种方法均具有较高的特异性和敏感性。与伊氏锥虫,球虫和弓形虫阳性血清均无交叉反应,最低检出血清稀释倍数分别为1∶1 600、1∶3 200和1∶3 200。经过筛选,确定COWP-HSP70串联蛋白为包被抗原的间接ELISA方法为最佳检测方法。以该方法进行的重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数分别为3.9%～8.2%和4.7%～8.3%。采用建立的ELISA方法与传统的粪检法分别对174份临床样品进行检测,隐孢子虫感染的检出率分别为9.2%和12.07%,两者符合率为97.13%。本研究建立的以COWPHSP70串联蛋白为包被抗原的牛隐孢子虫间接ELISA检测方法适用于临床牛隐孢子虫感染的检测。 展开更多

关键词 隐孢子虫 卵囊壁蛋白 热休克蛋白70 酶联免疫吸附试验

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安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白的原核表达及其免疫原性研究 被引量：1

6

作者 彭昊 唐林生 +6 位作者 李军 黄维义 陶立 陈泽祥 谢永平 许力干 杨威 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1870-1875,共6页

【目的】验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白(COWP)的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础。【方法】根据Gen Bank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列(DQ060431)设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后... 【目的】验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白(COWP)的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础。【方法】根据Gen Bank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列(DQ060431)设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用蛋白印迹法检测其免疫原性。【结果】扩增获得的COWP基因片段为549bp,其序列与Gen Bank已公布COWP同源基因序列(DQ060431)的同源性达100%,将其插入p ET-32a载体可构建p ET-32a-COWP表达载体。重组菌在30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h后,其表达形式以可溶性表达为主;NTA-Ni亲和层析柱层析时用200 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,即能得到纯化的重组蛋白,重组蛋白分子量约40 k Da。以抗His标签鼠单克隆抗体或鼠抗安氏隐孢子虫高免血清为一抗进行Western blotting检测,均能获得预期的目的条带。【结论】重组COWP蛋白具有良好的免疫原性,可作为安氏隐孢子虫病免疫学诊断的候选抗原。 展开更多

关键词 安氏隐孢子虫 卵囊壁蛋白 原核表达 免疫原性

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菲莱氏温扬球虫(Wenyonella philiplevinei)受精和卵囊壁形成的超微结构研究 被引量：1

7

作者 李安兴 孔繁瑶 +1 位作者 索勋 殷佩云 《北京农业大学学报》 CSCD 北大核心 1993年第3期101-105,共5页

本文利用透射电镜研究了寄生于家鸭小肠上皮细胞的菲莱氏温扬球虫的受精和卵囊壁的形成过程。作者在感染后96 h 的样品中发现一例大、小配子已受精;小配子已进入大配子中,大配子胞质中有一根纵切的鞭毛,小配子的核呈流体状,位于大配子... 本文利用透射电镜研究了寄生于家鸭小肠上皮细胞的菲莱氏温扬球虫的受精和卵囊壁的形成过程。作者在感染后96 h 的样品中发现一例大、小配子已受精;小配子已进入大配子中,大配子胞质中有一根纵切的鞭毛,小配子的核呈流体状,位于大配子核附近。卵囊壁是由成囊颗粒内含物进入合子表面的膜之间沉积成层而形成。成囊颗粒Ⅰ形成外层卵囊壁,成囊颗粒Ⅱ形成内层卵囊壁。沉积于膜之间的成囊颗粒Ⅰ内含物逐渐浓缩,堆积成颗粒状,使卵囊壁外层外表面形成颗粒状突起。成熟的卵囊壁由三层组成:即薄的外周膜、外层和内层。其内的合子原生质还被两层单位膜包裹。 展开更多

关键词 卵囊壁形成 家鸭 菲莱氏温扬 球虫

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安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因与热休克蛋白70基因的重组联合表达 被引量：1

8

作者 李军 唐林生 +7 位作者 彭昊 陶立 潘艳 陈泽祥 许力干 谢永平 杨威 黄维义 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1217-1222,共6页

利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.... 利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.5mmol/L IPTG诱导表达6h,表达产物主要以可溶的形式表达。使用小鼠抗安氏隐孢子虫超免疫血清为第一抗体进行Western-blot检测,结果有明显的目的条带出现,说明重组蛋白能被抗安氏隐孢子虫抗体识别。 展开更多

关键词 安氏隐孢子虫 卵囊壁蛋白基因 热休克蛋白70基因 表达

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毒害艾美耳球虫卵囊壁蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析

9

作者 杜彩娟 查夕馨 +3 位作者 黄晓星 刘丹丹 许金俊 陶建平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期854-858,共5页

利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术,分析了毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁可溶性蛋白。用鼠抗毒害艾美耳球虫重组配子体蛋白rEnGAM56和rEnGAM59多克隆抗体,对卵囊壁可溶性蛋白进行了Western blot分析。结果显示,至少有24条较清晰的... 利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术,分析了毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁可溶性蛋白。用鼠抗毒害艾美耳球虫重组配子体蛋白rEnGAM56和rEnGAM59多克隆抗体,对卵囊壁可溶性蛋白进行了Western blot分析。结果显示,至少有24条较清晰的电泳条带,其中6条为相对明显的主带,其相对分子质量分别为37 000,35 000,34 000,20 000,14 000和12 000。Western blot分析显示,鼠抗rEnGAM59和rEnGAM56多抗均能识别1条条带,前者的相对分子质量约14 000,后者约30 000。推测30 000和14 000卵囊壁蛋白分别来自毒害艾美耳球虫配子体蛋白EnGAM56和EnGAM59。 展开更多

关键词 毒害艾美耳球虫 卵囊壁蛋白 SDS-PAGE WESTERN BLOT

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弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的重组表达和特异性单克隆抗体制备

10

作者 白宇 李培德 +4 位作者 胡景炎 何杰 陈欢利 吴春琴 金俊杰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第3期60-65,共6页

为研究制备弓形虫卵囊壁蛋白和特异性单克隆抗体,以弓形虫弱毒株ME49株DNA为模板,应用PCR技术扩增卵囊壁蛋白OWP1基因,将其克隆至原核表达载体构建重组表达质粒p ET-28a-OWP1,经过IPTG诱导表达和His纯化树脂纯化重组蛋白His-OWP1。重组... 为研究制备弓形虫卵囊壁蛋白和特异性单克隆抗体,以弓形虫弱毒株ME49株DNA为模板,应用PCR技术扩增卵囊壁蛋白OWP1基因,将其克隆至原核表达载体构建重组表达质粒p ET-28a-OWP1,经过IPTG诱导表达和His纯化树脂纯化重组蛋白His-OWP1。重组蛋白His-OWP1作为免疫原,免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,重组蛋白GST-OWP1作为检测筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的单克隆抗体。结果表明,获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(4A2和2C10)。Western blot结果表明研究制备的单克隆抗体能够识别重组表达蛋白。制备获得的2株稳定性好、效价高的单克隆抗体,可为今后研究特异敏感的弓形虫病血清学检测方法提供材料。 展开更多

关键词 弓形虫 卵囊壁蛋白1 重组表达 单克隆抗体

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多雨季节须防鸡的球虫病

11

作者 王燕平 张怀吉 杨忠义 《山西农业（致富科技版）》 1994年第9期35-35,共1页

鸡的球虫病在平均气温达20～30℃时和雨水较多的季节易发生。我省7～10月份有利于球虫卵囊的发育。症状表现:精神沉郁,消瘦。

关键词 多雨季节 鸡球虫病 卵囊壁 雏鸡 裂殖体 农业技术 山西 鸡舍 拌粉 强饲

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隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定 被引量：17

12

作者 刘海鹏 曹建平 +8 位作者 沈玉娟 陈有贵 李小红 卢潍媛 徐馀信 刘宜升 刘述先 周晓农 汤林华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期81-86,共6页

目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物... 目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7．4±0．32)μm×(5．4±0．21)μm,长宽比为1．3±0．07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100％和99％。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。 展开更多

关键词 安氏隐孢子虫 小亚基核糖体RNA 卵囊囊壁蛋白 种系发生分析

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