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抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用
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作者 崔京涛 闫文娟 +4 位作者 张伟红 王巧凤 许少侠 谢宏杰 倪安平 《国际病毒学杂志》 2017年第1期13-17,共5页
目的制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用。方法CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/e小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合。酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆。... 目的制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用。方法CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/e小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合。酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆。免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,最终获得的杂交瘤制备腹水并使用ProteinG进行纯化。纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定。结果3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆。剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆最终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即2385-1。免疫荧光显示2385-1株单抗与CklV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原。免疫印迹试验显示2385-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合。2385-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgGl。ProteinG纯化腹水后的单抗效价≥1:12800。纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合。结论初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 单克隆抗体 即刻抗原 早期抗原 晚期抗原
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流式细胞术在巨细胞病毒感染诊断中的应用
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作者 谭龙益 张莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期534-535,共2页
关键词 流式细胞术 巨细胞病毒 早期即刻抗原 诊断
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不同实验方法在诊断和监测新生儿先天性巨细胞病毒感染中的临床研究 被引量:16
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作者 李易娟 曾瑜 +1 位作者 庄思齐 陈玮琪 《中华围产医学杂志》 CAS 2005年第3期187-191,共5页
目的探讨外周血白细胞巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)抗原(即刻早期抗原和早期抗原)检测、唾液聚合酶链反应(PCR)检测CMV-DNA和血清学检测CMV-IgM三种实验方法在诊断和监测新生儿先天性CMV感染中的作用.方法对98例患儿之母在孕期血CMV... 目的探讨外周血白细胞巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)抗原(即刻早期抗原和早期抗原)检测、唾液聚合酶链反应(PCR)检测CMV-DNA和血清学检测CMV-IgM三种实验方法在诊断和监测新生儿先天性CMV感染中的作用.方法对98例患儿之母在孕期血CMV-IgM阳性的高危新生儿出生后14 d内检查血CMV-IgM、外周血白细胞CMV抗原和唾液PCR-CMV-DNA,比较三种方法的检测结果,并对新生儿进行临床观察和随访.结果(1)98例中,48例诊断先天性CMV感染.症状性感染7例,无症状性感染41例;无一例CMV-IgM阳性.症状性感染组CMV抗原、PCR阳性检出率分别为7/7、5/7;无症状性感染组阳性检出率分别为71%(29/41)、46%(19/41).CMV抗原检测法、PCR检测法的诊断敏感性分别为75%、54%.症状性感染儿每5万白细胞中CMV阳性细胞数16~52个,无症状性感染儿3~31个,症状性感染儿CMV抗原指数水平显著高于无症状感染儿(P<0.05).(2)随访10例患儿,2例症状性感染儿CMV抗原和PCR转阴,症状消失;1例CMV肝炎治疗后CMV抗原和PCR检测仍阳性,最后发展为肝硬化.7例无症状性感染儿,CMV抗原在6个月内转阴或减少至低水平;2例伴唾液PCR阳性,复查时1例转阴,1例仍阳性.结论CMV抗原检测法具有早期、敏感、量化的特点,PCR法能发现潜伏性感染,两者联合应用能提高诊断阳性率,对治疗和随访患儿提供有效帮助;CMV-IgM法对先天性CMV感染的早期诊断的敏感性低. 展开更多
关键词 先天性巨细胞病毒感染 实验方法 临床研究 先天性CMV感染 聚合酶链反应(PCR) 监测 症状性感染 CMV抗原 外周血白细胞 IGM阳性 阳性检出率 抗原检测法 即刻早期抗原 PCR检测法 血清学检测 高危新生儿 诊断敏感性 无症状感染
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小儿巨细胞病毒活动性感染的两种诊断方法比较 被引量:6
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作者 聂兴草 方峰 +1 位作者 董永绥 李革 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2002年第7期422-424,共3页
目的 通过血清人巨细胞病毒 (HCMV)IgM和尿快速培养HCMV检测临床标本的比较 ,进一步评价血清特异性IgM诊断活动性HCMV感染的价值。 方法 ①ELISA法检测患儿血抗HCMV IgG、IgM。②通过检测尿培养物中HCMV即刻早期抗原 (IEA)快速诊断活... 目的 通过血清人巨细胞病毒 (HCMV)IgM和尿快速培养HCMV检测临床标本的比较 ,进一步评价血清特异性IgM诊断活动性HCMV感染的价值。 方法 ①ELISA法检测患儿血抗HCMV IgG、IgM。②通过检测尿培养物中HCMV即刻早期抗原 (IEA)快速诊断活动性HCMV感染。结果 ① 119例尿培养阳性者 ,血抗HCMV IgG均为阳性。②与尿快速培养法相比 ,血IgM的特异性和敏感性分别达到 97 7%和 6 9 7% ;血IgM阳性数与尿快速培养阳性数比率在≤ 1个月、~ 1岁和~ 3岁组分别为 4 5 8%、75 75和 82 4 % ,表明IgM检测结果在各年龄组均有假阴性 ,其中尤以 1个月以下婴儿多见。③ 2例 3个月左右患儿血IgM阳性而尿培养阴性。 11例随访患儿中 ,9例在结束更昔洛韦治疗后 1个月复查 ,3例IgM迟于尿培养转阴 ,2例尿培养阴性而血IgM仍为阳性 ,表明IgM检测结果可有假阳性。 结论 血清特异性IgM检测可用于诊断活动性CMV感染 ,但其意义有一定局限性 。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 抗HCMV-IgM 即刻早期抗原 抗体检测 抗原检测 活动性巨细胞病毒感染 儿童
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重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征病因研究 被引量:7
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作者 赵瑞秋 管小琴 +1 位作者 罗治国 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1547-1549,共3页
目的:明确重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征(Infantile hepatitis syndromeI,HS)的病因诊断。方法:ELISA常规检测血清HCMV-IgM、弓形体-IgM、RuV-IgM、HSV-IgM、甲乙丙戊肝炎病毒标志物,肝活检行光镜和电镜诊断,免疫组织化学染色检测... 目的:明确重庆地区胆汁淤积型婴儿肝炎综合征(Infantile hepatitis syndromeI,HS)的病因诊断。方法:ELISA常规检测血清HCMV-IgM、弓形体-IgM、RuV-IgM、HSV-IgM、甲乙丙戊肝炎病毒标志物,肝活检行光镜和电镜诊断,免疫组织化学染色检测肝组织HCMV极早期抗原(Immediate earlyantigenI,EA)和早期抗原(Earlyantigen,EA)、HBcAg、胆盐输出泵(Bile salt exportpump,BSEP)和多重耐药相关蛋白3(Multidrug resistance 3,MDR3)。结果:36例胆汁淤积型IHS中人巨细胞病毒(Human cy-tomegalovirus,HCMV)肝炎10例;HCMV肝炎合并风疹病毒(Rubella virus,RuV)感染1例;HCMV肝炎合并单纯疱诊病毒(Her-pds simplex virus,HSV)感染1例;HCMV、HSV和RuV混合感染1例;胆道闭锁7例[5例合并HCMV感染,1例合并HCMV和乙肝病毒(Hepatitis b virus,HBV)感染];糖原累积病2例;尼曼皮克病合并HCMV肝炎1例;分类不明脂质代谢障碍1例;HCMV肝炎合并疑诊线粒体肝病1例;HCMV肝炎合并疑诊铁沉积病1例;疑诊脂质代谢障碍、胆汁酸代谢障碍和进行性家族性肝内胆汁淤积Ⅰ型(Progressive familial intrahepatic cholestasis,PFICⅠ)各1例;7例病因仍不清。结论:HCMV肝炎是重庆地区胆汁淤积型IHS的首要原因,存在与其他病毒合并感染和参与代谢性肝病发病的现象。肝组织学检查可作为早期诊断胆道闭锁的补充,电镜检查有助于某些遗传代谢性肝病的诊断。暂未在重庆地区胆汁淤积型IHS中发现BSEP和MDR3基因变异。 展开更多
关键词 婴儿肝炎综合征 胆汁淤积型 组织形态学 巨细胞病毒 即刻早期抗原 早期抗原 胆盐输出泵 多重耐药相关蛋白3
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大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期抗原表达的实验研究 被引量:3
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作者 舒赛男 方峰 董永绥 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期967-970,共4页
目的 :通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原 (HCMVIEA)的抑制作用 ,探讨大蒜新素体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制。方法 :采用细胞形态观察和MTT比色法检测大蒜新素的细胞毒性。以流式细胞术定量检测和比较大蒜... 目的 :通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原 (HCMVIEA)的抑制作用 ,探讨大蒜新素体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制。方法 :采用细胞形态观察和MTT比色法检测大蒜新素的细胞毒性。以流式细胞术定量检测和比较大蒜新素不同剂量 ,不同处理时间 (2 4 ,4 8,72 ,96h)以及病毒感染不同阶段 (病毒吸附前、吸附时和吸附后 )应用大蒜新素时HCMVIEA表达水平变化。结果 :人胚肺成纤维细胞对大蒜新素的最大耐受浓度为 9.6 0mg·L-1。病毒吸附后持续用药可显著抑制HCMVIEA的表达 ,用药 72hHCMVIEA抑制率达 89.3% ;大蒜新素预处理细胞后感染病毒 ,HCMVIEA抑制率为 2 8.6 % ;药物与病毒吸附同时应用 ,即刻早期抗原 (IEA)抑制率仅为 10 .3%。结论 :大蒜新素体外持续用药可显著抑制HCMVIEA的表达 ;其预防作用较弱 ;即时抑制效应不明显。大蒜新素对IEA表达的明显抑制可能是大蒜新素抗HCMV效应的主要作用机制之一。 展开更多
关键词 大蒜新素 人巨细胞病毒 即刻早期抗原 表达 实验研究 流式细胞术
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人巨细胞病毒主要即刻早期抗原的致病机制与治疗 被引量:1
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作者 甄宏 《国外医学(流行病学.传染病学分册)》 2002年第5期299-301,共3页
在细胞和分子水平对人巨细胞病毒致病机制的研究发现,主要即刻早期抗原(major immediate early antigen,MIEA)可促进人巨细胞病毒自身的产毒复制、影响宿主细胞基因表达、改变细胞生长周期导致细胞增殖或凋亡,并引发一系列炎症反应,是... 在细胞和分子水平对人巨细胞病毒致病机制的研究发现,主要即刻早期抗原(major immediate early antigen,MIEA)可促进人巨细胞病毒自身的产毒复制、影响宿主细胞基因表达、改变细胞生长周期导致细胞增殖或凋亡,并引发一系列炎症反应,是人巨细胞病毒致病的重要因素。抑制MIEA表达和对抗其功能的治疗显示出潜在优越性和良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 即刻早期抗原 致病机制 治疗
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IE抗原检测在HCMV感染中的诊断意义
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作者 赵宏 范骏 +5 位作者 陈晓明 张旋 胡建华 高海女 杨美芳 马伟杭 《浙江检验医学》 2008年第4期34-35,共2页
目的探索即刻早期抗原(immediate early antigen,IE抗原)检测在骨髓移植术后人巨细胞病毒感染中的诊断价值。方法回顾性分析骨髓移植术后160份外周血标本,根据外周血巨细胞病毒被膜抗原pp65的不同分为感染组和对照组,运用免疫组化法检... 目的探索即刻早期抗原(immediate early antigen,IE抗原)检测在骨髓移植术后人巨细胞病毒感染中的诊断价值。方法回顾性分析骨髓移植术后160份外周血标本,根据外周血巨细胞病毒被膜抗原pp65的不同分为感染组和对照组,运用免疫组化法检测外周血人巨细胞病毒IE抗原和被膜抗原pp65。结果20名患者中,实验组16名(136份血标本),对照组4名(24份血标本)。160份外周血标本中,人巨细胞病毒pp65抗原阳性标本95份(59.38%),IE抗原阳性94份(56.75%)(P=0.91);IE抗原和pp65抗原术后检出时间分别为2.44±1.38周和3.17±1.16周(P=0.031)。结论IE抗原检测能发现早期特异性反应HCMV感染。 展开更多
关键词 即刻早期抗原 被膜蛋白 巨细胞病毒 感染 检测
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