南极假丝酵母脂肪酶B的催化机理及应用前景 被引量：21

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作者 赵天涛 高静 李伟杰 《分子催化》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期155-160,共6页

关键词 南极假丝酵母脂肪酶 催化机理 影响因素 双底物抑制 应用

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南极假丝酵母脂肪酶B在制备手性药物中的应用 被引量：3

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作者 矫春丽 刘学杰 《药学研究》 CAS 2014年第7期406-410,共5页

结合近期国内外的文献,本文详细介绍了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在手性醇、胺、酸选择性的拆分以及转酯等的应用。利用脂肪酶合成手性药物是药物合成研究的一个重要领域,CALB在一些药物的拆分和合成中表现出了良好的选择性,本文主要综... 结合近期国内外的文献,本文详细介绍了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在手性醇、胺、酸选择性的拆分以及转酯等的应用。利用脂肪酶合成手性药物是药物合成研究的一个重要领域,CALB在一些药物的拆分和合成中表现出了良好的选择性,本文主要综述了其在手性醇、胺、酸选择性拆分以及转酯中的应用,希望能够为手性药物的合成提供方向。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶 南极假丝酵母脂肪酶B 手性药物 合成

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纳米金颗粒生物杂化酶制备及其催化阿魏酸淀粉酯合成研究

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作者 王艳 李虹佳 +5 位作者 苑宏博 刘天娇 谢金晖 程美佳 孙立瑞 辛嘉英 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2023年第2期1-10,共10页

以玉米淀粉,阿魏酸乙酯为原料,南极假丝酵母脂肪酶(CAL)为直接催化剂,借助CAL对氯金酸溶液有还原作用制备纳米金杂化南极假丝酵母脂肪酶(CAL-AuNPs),提高酶催化反应活性进而实现阿魏酸淀粉酯的高效合成。以纳米金在紫外光谱中的特征峰... 以玉米淀粉,阿魏酸乙酯为原料,南极假丝酵母脂肪酶(CAL)为直接催化剂,借助CAL对氯金酸溶液有还原作用制备纳米金杂化南极假丝酵母脂肪酶(CAL-AuNPs),提高酶催化反应活性进而实现阿魏酸淀粉酯的高效合成。以纳米金在紫外光谱中的特征峰吸光度值为指标,确定CAL-AuNPs的最佳制备条件为:杂化时间24 h,温度35℃,CAL-AuNPs添加量为0.6 g,氯金酸溶液浓度为0.1 mg/mL。利用分光光度计法测定淀粉取代度,并以取代度为指标探究阿魏酸淀粉酯的最佳合成条件,实验结果表明,当反应温度为60℃,底物比为1∶3(淀粉:阿魏酸乙酯),反应时间24 h,有机溶剂添加量为10 mL,CAL-AuNPs添加量为6%时,阿魏酸淀粉酯合成效果最佳,取代度最高为0.2654。且当阿魏酸淀粉酯浓度为3 mg/mL时其抑制DPPH自由基能力最强,抑制率为47.58%。 展开更多

关键词 纳米金 南极假丝酵母脂肪酶 纳米金南极假丝酵母脂肪酶杂化酶 阿魏酸淀粉酯 DPPH清除

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响应面法优化CALA在毕赤酵母中的组成型表达 被引量：2

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作者 严慧玲 蓝东明 +1 位作者 王永华 杨博 《现代食品科技》 EI CAS 2011年第8期972-976,共5页

南极假丝酵母脂肪酶A(CALA)是现有研究中唯一一种对甘油三酯sn-2位显示出偏好的脂肪酶。本文在完成CALA在毕赤酵母中组成型表达的基础上,为了提高CALA的酶活,采用响应面法建立了CALA发酵培养基和培养条件的二阶数学模型,并验证了模型的... 南极假丝酵母脂肪酶A(CALA)是现有研究中唯一一种对甘油三酯sn-2位显示出偏好的脂肪酶。本文在完成CALA在毕赤酵母中组成型表达的基础上,为了提高CALA的酶活,采用响应面法建立了CALA发酵培养基和培养条件的二阶数学模型,并验证了模型的有效性;筛选出了2个影响毕赤酵母发酵产CALA的主要因素:培养温度、葡萄糖含量和初始pH;确定了优化的发酵条件:发酵时间为72 h,初始pH值7.2、酵母粉10 g/L、葡萄糖27 g/L、温度31℃。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶A 响应面 发酵 毕赤酵母

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分子动力学模拟研究壳寡糖与脂肪酶相互作用机制 被引量：2

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作者 杨宝燕 郑敦锦 +10 位作者 何康平 江文豪 沈锐锋 吕咏锶 罗幸林 罗佳伟 陈胤熹 郑少鹏 郝锦亨 陈梓诗 曹诗林 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第6期72-81,共10页

壳聚糖及其衍生物在酶固定化领域有着广泛的应用。了解酶与壳聚糖衍生物在分子水平上的相互作用机制,对相关生物催化剂的设计和应用具有重要意义。本研究采用分子动力学模拟方法研究南极假丝酵母脂肪酶B(CaLB)与壳寡糖(OCTS)的相互作用... 壳聚糖及其衍生物在酶固定化领域有着广泛的应用。了解酶与壳聚糖衍生物在分子水平上的相互作用机制,对相关生物催化剂的设计和应用具有重要意义。本研究采用分子动力学模拟方法研究南极假丝酵母脂肪酶B(CaLB)与壳寡糖(OCTS)的相互作用,并对脂肪酶与催化底物进行分子对接研究脂肪酶催化活性中心和底物结合构象和结合亲和力。结果表明,脂肪酶与OCTS之间的静电和L-J相互作用在自组装过程的初始阶段起着重要的作用。模拟过程结束后,CaLB-OCTS组装体共包含14个OCTS分子和1个CaLB分子。CaLB与OCTS之间存在静电相互作用和氢键相互作用,在模拟过程中,L-J势能和库仑势能分别降低了约1480 kJ/mol和2324.0 kJ/mol,两者间的平均氢键数从0增加到约17,CaLB与OCTS的可及面积均因为相互作用而降低了20 nm2。二级结构表明,与游离酶对照相比,CaLB-OCTS的β折叠含量从9.78%增加至12.62%,无规卷曲loop从49.21%下降至46.50%,CaLB-OCTS的β折叠的含量更高,而无规卷曲含量更低。此外,CaLB-OCTS保留了其原有的蛋白骨架结构以及活性位点口袋的构象。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶 壳寡糖 分子动力学模拟 分子对接

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南极假丝酵母脂肪酶A的表面展示及酶学性质 被引量：1

6

作者 严慧玲 蓝东明 +1 位作者 王永华 杨博 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1070-1076,共7页

采用a凝集素作为载体蛋白,首次将南极假丝酵母脂肪酶A展示在酿酒酵母细胞表面,通过MD平板筛选获得表面展示型的CALA酵母工程菌株。免疫荧光检测显示CALA被成功展示在酵母细胞壁表面,重组子经诱导后能在三丁酸甘油酯板上形成透明圈,说明... 采用a凝集素作为载体蛋白,首次将南极假丝酵母脂肪酶A展示在酿酒酵母细胞表面,通过MD平板筛选获得表面展示型的CALA酵母工程菌株。免疫荧光检测显示CALA被成功展示在酵母细胞壁表面,重组子经诱导后能在三丁酸甘油酯板上形成透明圈,说明展示的CALA具有活性。重组酵母在液体培养基培养72 h,活性达到最高,为80.4 U/g干细胞。酿酒酵母展示的CALA最适温度及pH值为70°C和pH 8.0。经50°C保温2 h,仍含有60%水解酶活力。展示的CALA在pH 7.0和pH 8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理2 h,展示的CALA仍保持70%的活性。以上结果表明酵母展示的CALA可作为一种有潜质商业用途的全细胞催化剂。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶A 酵母表面展示 全细胞催化 酶学性质

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CALA在毕赤酵母中的表达、纯化及酶学特性研究

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作者 严慧玲 蓝东明 +1 位作者 王永华 杨博 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期175-181,共7页

将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基因克隆至组成型表达载体pGAPZαA中,电激转入X-33,获得高效表达的CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和阴离子交换层析等步骤,获得纯化的重组CALA,其比酶活达384.90 U/mg。该酶最适温度... 将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基因克隆至组成型表达载体pGAPZαA中,电激转入X-33,获得高效表达的CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和阴离子交换层析等步骤,获得纯化的重组CALA,其比酶活达384.90 U/mg。该酶最适温度为70℃,最适pH值为8.0。经50℃保温2 h,仍含有60%水解酶活力;在pH7.0和8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理1 h,仍保持90%的活性;非离子型表面活性剂能提高CALA的酶活,金属离子在不同程度上抑制CA-LA的酶活。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶A 毕赤酵母 组成型表达 纯化 酶学性质

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动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸

8

作者 汤灵娇 詹晓 +2 位作者 杨立荣 钱明心 吴坚平 《化学反应工程与工艺》 CAS 北大核心 2019年第1期55-63,共9页

利用固定化的南极假丝酵母脂肪酶B(CAL-B)实现外消旋底物1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸酯[(±)-1]的动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸[(R)-1-TIC]。考察了不同来源CAL-B制剂的催化效果,以及关键反应条件对底物稳... 利用固定化的南极假丝酵母脂肪酶B(CAL-B)实现外消旋底物1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸酯[(±)-1]的动态动力学拆分高效制备(R)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸[(R)-1-TIC]。考察了不同来源CAL-B制剂的催化效果,以及关键反应条件对底物稳定性和酶催化速率的双重影响。结果表明:商品化脂肪酶制剂QLlip-9提供了最佳的催化效果;反应温度提高至30℃、醋酸铵缓冲液的初始pH值提高至8.0时,虽然底物稳定性略微下降,但完全转化所需时间大幅缩短,整体催化效率明显提高;pH值恒定控制策略则加快了反应后期无效底物的消旋化速率,从而进一步提高催化效率。当(±)-1浓度为20 g/L时,QLlip-9浓度降至10 g/L基本不影响催化效果,最佳酶/底物比率(酶与底物的质量比)达到1:2。在上述优化条件下,反应时间缩短至6h,转化率不低于99%,产物的对映体过量值(enantiomeric excess of product, e.e.p)为96%,生产速率达到0.24 g/(h·g酶),为目前文献报道最高水平的8倍。在此基础上,实现了8批次的重复利用,并在300 mL,1 000 mL和20 L体系中实现了逐级规模放大,最终通过浓缩结晶法提取获得e.e.p≥99%的(R)-1-TIC晶体(分离收率不低于80%)。以上研究不仅大幅提高了该反应的整体催化效率,并且降低了酶的使用量。 展开更多

关键词 (R)-1 2 3 4-四氢异喹啉-1-羧酸 南极假丝酵母脂肪酶 B 动态动力学拆分 催化效率

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一种测定福寿花浸膏中虾青素含量的酶解-正相高效液相色谱法研究

9

作者 陈小兵 林劲冬 +2 位作者 冼啟志 许雪磊 陶正国 《广东饲料》 2020年第11期41-46,共6页

福寿花浸膏中所含的虾青素主要以脂肪酸酯的形式存在,为了应用液相色谱法准确测定其虾青素的含量,需要将虾青素酯定量转化为虾青素。由于虾青素在碱皂化过程中容易降解,所以要求严格的测定多采用胆固醇酯酶催化水解预处理结合高效液相... 福寿花浸膏中所含的虾青素主要以脂肪酸酯的形式存在,为了应用液相色谱法准确测定其虾青素的含量,需要将虾青素酯定量转化为虾青素。由于虾青素在碱皂化过程中容易降解,所以要求严格的测定多采用胆固醇酯酶催化水解预处理结合高效液相色谱的方法进行。但胆固醇酯酶法检测虾青素的成本很高,难以在日常检测中推广应用。本文以福寿花浸膏样品为研究对象,对比了价格低廉的商品化南极假丝酵母脂肪酶(CALB)和胆固醇酯酶在相同条件下进行催化水解预处理进而以正相高效色谱法测定虾青素含量的结果。研究表明,采用6 U/mL南极假丝酵母脂肪酶在pH 7.0的TRIS缓冲溶液中水解福寿花浸膏样品60 min,再经正相高效液相色谱测算其虾青素含量达到9.194%,其60 min酶解程度与胆固醇酯酶水解50min相当且已水解完全,酶解120 min与60 min基本保持不变。由于商品化南极假丝酵母脂肪酶相对胆固醇酯酶使用成本低得多,用南极假丝酵母脂肪酶代替胆固醇酯酶解决了酶解法测定天然虾青素含量的高成本问题,该方法同时具有用时短、操作简便、重复性好的优点,有望广泛应用到福寿花、虾壳、雨生红球藻等天然虾青素原料及饲料中的虾青素测定。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶 酶解 虾青素酯 福寿花浸膏 液相色谱

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南极假丝酵母脂肪酶B的酿酒酵母表面展示及其催化己酸乙酯的合成 被引量：23

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作者 潘志友 韩双艳 +1 位作者 林影 郑穗平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期673-678,共6页

从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)全基因片段,利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白α-凝集素的C端连接融合,构建表面展示载体pICAS-celAL-C... 从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)全基因片段,利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白α-凝集素的C端连接融合,构建表面展示载体pICAS-celAL-CALB,转化酵母后获得重组酵母菌Saccharomyces cerevisiae pICAS-celAL-CALB。该重组酵母菌经葡萄糖诱导表达及分析,表明CALB已在酿酒酵母细胞表面成功展示,水解活力达26.26 u/(g·dry cell)。重组酵母菌经冻干能有效地实现在非水相中全细胞催化己酸和乙醇酯化合成己酸乙酯。反应物己酸与乙醇的摩尔比为1:1.25,己酸乙酯的产率为98.0%,具有较好的操作稳定性。 展开更多

关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 己酸乙酯

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展示南极假丝酵母脂肪酶B的毕赤酵母全细胞催化合成短链芳香酯 被引量：11

11

作者 金子 林影 +2 位作者 黄登峰 苏国栋 韩双艳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1927-1932,共6页

展示酶的酵母细胞作为全细胞催化剂,既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。本研究将细胞表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的重组毕赤酵母用于非水相中催化合成短链芳香酯,通过滴定和气相... 展示酶的酵母细胞作为全细胞催化剂,既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。本研究将细胞表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的重组毕赤酵母用于非水相中催化合成短链芳香酯,通过滴定和气相色谱的方法测定底物酸的转化率,从底物的碳链长度、醇的结构、酵母冻干粉的添加量、底物浓度及底物的酸醇摩尔比等方面考察了展示CALB的毕赤酵母全细胞催化合成短链芳香酯的特性。研究结果表明:该全细胞催化剂可催化C10以下的酸和醇直接酯化合成多种短链芳香酯,酸的转化率达到90%以上;其中己酸和乙醇为酶的最适底物;酵母冻干粉的添加量20g/L(306.0U/g-drycell)、己酸浓度0.8mol/L、酸醇摩尔比1:1.1是合成己酸乙酯的最佳条件。在此条件下反应1.5h,己酸的转化率达到97.3%。在现有的关于脂肪酶非水相催化合成短链芳香酯的报道中,该全细胞催化剂显示出较好的底物耐受性以及较高的催化反应速率。因此,展示CALB的毕赤酵母全细胞催化剂在合成短链芳香酯方面具有较大的商业化应用潜能。 展开更多

关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 短链芳香酯

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脂肪酶酯化白酒黄水的工艺条件优化 被引量：10

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作者 颜晨麟 李站胜 +2 位作者 张家惠 黎冰倩 林影 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第1期220-226,共7页

本研究以浓香型白酒副产物黄水为研究对象,研究食用酒精(95%,V/V)添加量、反应温度及南极假丝酵母展示脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)添加量等工艺条件对黄水酯化效果的影响,并对产物的精制工艺进行探讨。单因素实验及响应... 本研究以浓香型白酒副产物黄水为研究对象,研究食用酒精(95%,V/V)添加量、反应温度及南极假丝酵母展示脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)添加量等工艺条件对黄水酯化效果的影响,并对产物的精制工艺进行探讨。单因素实验及响应面优化结果表明,在食用酒精用量为52.5%(V/V)、CALB酶添加量5.32%(W/V)、31.5℃下反应48 h,增酯增香的效果最佳,乙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯及总酯含量依次为1.81 g/L、6.09 g/L、14.49 g/L、22.39 g/L,白酒风味酯浓度提升了31.9倍;且酵母展示CALB酶重复使用10次转化率保持不变。黄水酯化反应产物蒸馏、萃取可得白酒呈香物质混合液,总酯回收率为76.56%。本研究可利用黄水生产天然等同香料及白酒调酒液等功能性酯化液,经优化后的工艺条件温和、反应周期短且酯含量提升明显,易于放大和工业化生产,对黄水资源再生利用具有重大意义。 展开更多

关键词 黄水 南极假丝酵母脂肪酶B 响应面实验

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南极假丝酵母脂肪酶B处理对白酒丢糟中有机酸酯化效果的影响 被引量：10

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作者 孙海龙 王有旭 朱文众 《食品科技》 CAS 北大核心 2013年第6期26-30,共5页

我国白酒行业每年有大量丢糟产生,丢糟的综合利用意义重大。基于脂肪酶的催化作用可以将丢糟中的有机酸转化成呈香的酯类,实验室对南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)在丢糟再利用方面进行了研究。通过对工艺条件... 我国白酒行业每年有大量丢糟产生,丢糟的综合利用意义重大。基于脂肪酶的催化作用可以将丢糟中的有机酸转化成呈香的酯类,实验室对南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)在丢糟再利用方面进行了研究。通过对工艺条件的考察,得到在CALB用量0.2%(w/w)、食用酒精(95%,v/v)添加量20%(w/w)、25℃反应8d条件下效果最好。另外中试实验结果表明,用所优化的工艺处理白酒丢糟能够提高丢糟中呈香物质的含量,所得60%(v/v)综合酒样品中乙酸乙酯浓度达到112.5mg/100mL、乳酸乙酯浓度达到126.6mg/100mL。 展开更多

关键词 丢糟 南极假丝酵母脂肪酶B 乙酸乙酯 乳酸乙酯

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酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的酶学性质研究 被引量：8

14

作者 黄登峰 潘志友 +2 位作者 林影 韩双艳 郑穗平 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第7期627-630,共4页

本文对酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的一般酶学性质进行研究,得出如下结论:酵母表面展示CALB在碱性条件下具有很好的稳定性和水解活性。其水解对硝基苯酚酯的最适反应pH值范围是8.0～8.5,与... 本文对酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的一般酶学性质进行研究,得出如下结论:酵母表面展示CALB在碱性条件下具有很好的稳定性和水解活性。其水解对硝基苯酚酯的最适反应pH值范围是8.0～8.5,与游离的CALB商品酶相比,向碱性条件偏移。最适反应温度范围是40～45℃。最适反应底物为对硝基苯酚丁酸酯,表现出极为明显的底物特异性。Ca2+、Mg2+对其有明显的激活作用。K+对其有微弱的激活作用。而Co2+、Cu2+对其有明显的抑制作用。本研究为酵母表面展示脂肪酶的应用研究奠定理论基础。 展开更多

关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 酶学性质

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南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究 被引量：7

15

作者 孙金鹏 钱圣一 +1 位作者 敬科举 卢英华 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期765-771,共7页

为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得... 为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/mg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0~8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子（10 mmol/L）Ca2＋,Zn2＋,Mn2＋有助于CALB酶活力的提高,而Cu2＋,Ag＋,Fe3＋强烈抑制酶催化反应. 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 毕赤酵母 分泌表达 酶学性质

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脂肪酶处理白酒丢糟提升复糟酒的品质 被引量：7

16

作者 李站胜 颜晨麟 +3 位作者 江宁 吴璇 林影 韩双艳 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2019年第5期191-197,123,共8页

本项目以浓香型白酒丢糟为研究对象,研究巴氏灭菌、反应温度、食用酒精添加量、南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)及反应时间等工艺条件对复糟酒酯化效果的影响。实验结果表明,经巴氏灭菌处理后,在食用酒精(95%,V... 本项目以浓香型白酒丢糟为研究对象,研究巴氏灭菌、反应温度、食用酒精添加量、南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)及反应时间等工艺条件对复糟酒酯化效果的影响。实验结果表明,经巴氏灭菌处理后,在食用酒精(95%,V/V)用量为20 mL/100 g丢糟、CALB酶添加量1.5‰(W/W)、20℃下反应3 d,增酯增香的效果最好,乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及总酯含量依次为3.17 g/L、0.59 g/L、0.76 g/L、4.53 g/L。在此基础上进行1 kg酒糟处理量小试实验,得乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及总酯含量依次为3.44 g/L、0.85 g/L、0.70 g/L和4.98 g/L,其中浓香型白酒的主要呈香物质乙酸乙酯和己酸乙酯分别较无CALB酶处理实验组提高了16.38倍和16.67倍,且放大前后各酯含量基本保持稳定。本研究为进一步放大实验提供了依据,对脂肪酶催化白酒丢糟资源化再生利用具有重要意义。 展开更多

关键词 丢糟 南极假丝酵母脂肪酶B 正交实验

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南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化 被引量：7

17

作者 吴蓉 曹佳睿 +3 位作者 曹君 刘飞翔 杨猛 苏二正 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期138-148,共11页

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显... 旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20℃下使用0.5%(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75%(W/V)山梨醇、2.25%(W/V)鱼蛋白胨、1%(W/V)安琪酵母提取物、0.75%(W/V)Na2HPO4。在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平。成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 大肠杆菌 可溶性表达 发酵优化

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毕赤酵母新启动子GCW14在细胞表面展示CALB中的应用 被引量：6

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作者 张轩薇 叶燕锐 +2 位作者 刘晓肖 鲁柳柳 林影 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期129-135,共7页

以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子P_(GCW14)与诱导型启动子P_(AOXI)、组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)4种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较... 以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子P_(GCW14)与诱导型启动子P_(AOXI)、组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)4种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较这4个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示,P_(GCW14)的启动子活性与P_(AOX1)相当,最高菌体酶活力分别在发酵48 h和168h时达到694.8 U/g(Dry cell weight)和684.3 U/g(Dry cell weight),以P_(GCW14)为启动子的重组菌产酶周期大大缩短;组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)的最高菌体酶活分别在发酵24 h和168 h达到266.7 U/g(Dry cell weight)和449.2 U/g(Dry cell weight),可见P_(GCW14)的启动子活力性要高于P_(GAP)和P_(TEF1)。此外,以P_(GCW14)为启动子,利用壁蛋白Gcw14p自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 启动子 南极假丝酵母脂肪酶B 酵母表面展示

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酵母表面展示脂肪酶合成己二酸二异辛酯 被引量：6

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作者 张娜 金子 +2 位作者 林影 郑穗平 韩双艳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1027-1031,共5页

展示酶的酵母细胞既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。采用表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的毕赤酵母细胞催化合成己二酸二异辛酯(Diisooctyladipate,DIOA),对该反应体系进行优化,并... 展示酶的酵母细胞既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。采用表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的毕赤酵母细胞催化合成己二酸二异辛酯(Diisooctyladipate,DIOA),对该反应体系进行优化,并实现了初步工艺放大制备。经条件优化后,在10 mL反应体系中,DIOA的产率可达85.0%。该工艺放大到200 mL反应体系时,DIOA产率可达97.8%。经减压蒸馏,DIOA纯度可达到98.2%。该酵母表面展示脂肪酶在合成绿色润滑油己二酸二异辛酯中具有良好应用前景。 展开更多

关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 己二酸二异辛酯 绿色润滑油

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南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的分泌表达及其硅藻土固定化应用 被引量：6

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作者 张玲敏 王斌 潘力 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第14期107-114,共8页

为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)表达量,根据黑曲霉(Aspergillus niger)密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB... 为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)表达量,根据黑曲霉(Aspergillus niger)密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB活力为171 U/mL。研究重组CALB的酶学性质,最适反应温度和pH值分别为50℃和8.0,在pH 6.0~9.0和45℃以下具有较高的稳定性,10 mmol/L Cu2+、Zn2+和0.1 g/100 mL十二烷基硫酸钠强烈抑制酶活力,而1 mmol/L Ca2+、0.1 g/100 mL山梨醇对酶活力具有非常明显的激活作用。此外,以硅藻土为载体固定CALB,固定化酶活力为187 U/g。将制备的硅藻土-CALB固定化酶用于生物合成己酸乙酯,经反应条件优化后在无溶剂体系中己酸乙酯产率达91%。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 黑曲霉 分泌表达 酶学性质 固定化 酯化

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