大肠杆菌表达的单链抗体柱复性的研究 被引量：7

1

作者 朱迎春 王琰 +3 位作者 高荣凯 刘群英 化冰 陈宇萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期169-172,共4页

对包含体表达的抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）纯化复性进行了探索．尝试了利用金属螯合亲和层析和凝胶层析柱进行柱上在位复性的可行性．对包含体表达的ＳｃＦｖ进行透析复性与柱复性，比较其相对复性率及蛋... 对包含体表达的抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）纯化复性进行了探索．尝试了利用金属螯合亲和层析和凝胶层析柱进行柱上在位复性的可行性．对包含体表达的ＳｃＦｖ进行透析复性与柱复性，比较其相对复性率及蛋白质回收率，发现柱上复性效果优于传统的透析复性．抗ＨＢｓＡｇＳｃＦｖ经凝胶色谱ＳｅｐｈａｃｙｌＳ２００柱复性的相对复性率为９８％，蛋白质回收率为８１％．由于将纯化复性同步进行，简化了操作程序。 展开更多

关键词 单链抗体scfv 包含体 纯化 复性 乙型肝炎病毒

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抗H3N2亚型犬流感病毒重组犬源化抗体的制备及特性分析

2

作者 韩德敏 赵丹 +1 位作者 李思宇 刘永杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期484-492,共9页

由于异源抗体在宠物临床治疗中易引起宿主免疫排斥反应,因此制备基于本动物源的基因工程抗体显示了更大的发展优势和前景。为制备H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)的重组犬源化抗体scFv-Fc,采集CIV感染犬外周血淋巴细胞... 由于异源抗体在宠物临床治疗中易引起宿主免疫排斥反应,因此制备基于本动物源的基因工程抗体显示了更大的发展优势和前景。为制备H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)的重组犬源化抗体scFv-Fc,采集CIV感染犬外周血淋巴细胞提取总RNA,利用PCR技术扩增IgG重链(VH)、轻链(VL)和Fc片段。利用重叠延伸PCR将VH和VL通过弹性肽链linker连接成单链抗体(scFv)片段,并转化大肠杆菌,挑取阳性菌测序。经分析筛选后,将目标scFv与Fc片段链接,构建scFv-Fc重组犬源抗体片段。经诱导表达,获得分子量约为50 kD的scFv和约为89 kD的重组抗体scFv-Fc。抗体活性测定结果表明,scFv能与CIV特异性结合,1 mg/mL scFv的ELISA效价为1∶210,血凝抑制(HI)效价为1∶27,中和抗体效价为1∶20。1 mg/mL scFv-Fc的HI效价为1∶26,ELISA效价1∶25,中和抗体效价为1∶20。本研究成功制备了针对H3N2亚型犬流感病毒的重组犬源scFv-Fc,为该病毒感染的治疗提供了物质基础。 展开更多

关键词 犬流感病毒 犬 单链抗体scfv 重组抗体scfv-Fc 免疫学活性

原文传递

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2特异性人源肺癌噬菌体单链抗体的筛选和鉴定 被引量：2

3

作者 赵文思 罗弋 +1 位作者 黎博一 张涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2343-2347,共5页

目的通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库,并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体。方法取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA,PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL,SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因sc Fv,克隆入噬菌体表达载体p ... 目的通过噬菌体展示库技术构建人肺癌单链抗体库,并筛选出抗多药耐药蛋白ABCG2的特异性单链抗体。方法取肺腺癌患者癌旁阳性淋巴结提RNA,PCR扩增重链和轻链可变区基因VH、VL,SOE-PCR扩增单链抗体可变区基因sc Fv,克隆入噬菌体表达载体p CANTAB5E,制备初级抗体库。以A549细胞及ABCG2蛋白对抗体库进行6轮淘选。Western blot检测单链抗体的可溶性表达和对ABCG2蛋白表达的影响,ELISA和ICC鉴定其特异性,CCK-8检测其顺铂增敏作用。结果成功筛选出抗ABCG2人源肺腺癌噬菌体单链抗体。Western blot证实其可溶性表达,大小约为34×103且可明显下调ABCG2蛋白的表达。ELISA和ICC检测到该抗体对ABCG2抗原的识别率高达75%,并与A549细胞具有结合特异性。CCK8结果则显示该sc Fv可增加A549细胞对顺铂的敏感性,明显减小其IC50值。结论成功构建了人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选出了能与ABCG2蛋白特异性结合的单链抗体,为后续体内可视化研究和靶向ABCG2+的肺癌干样细胞奠定基础。 展开更多

关键词 噬菌体单链抗体scfv 肺腺癌 ABCG2 靶向治疗 化疗增敏

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人源化抗肾小球基底膜抗体的单链抗体scFv3的原核表达及鉴定

4

作者 肖静 刘章锁 +2 位作者 王雅楠 赵国强 王沛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期50-53,共4页

目的:在原核细胞中构建并表达抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3,并鉴定其活性。方法:用PCR扩增抗GBM抗体单链抗体scFv3基因,将scFv3 DNA与pGEM-T Easy质粒连接,构建克隆载体pGEM-scFv3。用酶切后电泳鉴定构建载体的正确性;测序检... 目的:在原核细胞中构建并表达抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3,并鉴定其活性。方法:用PCR扩增抗GBM抗体单链抗体scFv3基因,将scFv3 DNA与pGEM-T Easy质粒连接,构建克隆载体pGEM-scFv3。用酶切后电泳鉴定构建载体的正确性;测序检测质粒重组后序列有无改变。再将scFv3亚克隆入表达载体pQE-80L,构建pQE80L-scFv3重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta2,酶切鉴定。IPTG诱导表达蛋白后,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物的抗体活性。结果:PCR扩增scFv3 DNA片段约为750 bp,与预期结果相同;克隆载体pGEM-scFv3酶切后显示scFv3成功的克隆入pGEM-T Easy质粒;测序验证插入片段全序列无改变;表达载体pQE80L-scFv3酶切图谱与预期相同;SDS-PAGE显示,在分子量约为27 kD处可见目的蛋白带,Western blot证实scFv3能与抗GBM抗体结合。结论:成功构建并表达了抗GBM抗体的单链抗体scFv3蛋白,为进一步研究scFv3的生物学特性和基因工程抗体的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 抗GBM抗体 单链抗体scfv3 原核表达 鉴定

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HIF1α特异性人源喉癌噬菌体单链抗体的制备及其对放疗增敏的实验研究

5

作者 周寒静 刘静姝 +2 位作者 隆姝孜 唐翠萍 张涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期1625-1630,共6页

目的利用噬菌体肽库技术,构建HIF1α人源喉癌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),研究其对放疗敏感性的影响。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RTPCR和重叠延伸PCR扩增得到可变区基因scFv,将其重组到载体pCANTAB5E... 目的利用噬菌体肽库技术,构建HIF1α人源喉癌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),研究其对放疗敏感性的影响。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RTPCR和重叠延伸PCR扩增得到可变区基因scFv,将其重组到载体pCANTAB5E中,转化至TG1大肠杆菌,以制备初级抗体库。以HEP2细胞及HIF1α纯化抗原对抗体库进行淘选。SDS-PAGE电泳检测scFv的可溶性表达,Western blot检测其对HIF1α蛋白表达的影响,ELISA和细胞免疫化学鉴定其特异性,CCK-8检测scFv联合X线照射后HEP2细胞的存活率,克隆形成实验分析scFv处理后HEP2细胞放疗存活曲线。结果成功制备HIF1α人源喉癌单链抗体scFv,SDS-PAGE电泳证实其可溶性表达且相对分子质量约为34×10~3,Western blot表明其能下调HIF1α蛋白的表达。ELISA检测到该抗体对HIF1α抗原的识别率高达79%,细胞免疫化学显示该抗体与HEP2细胞特异性结合。CCK-8检测结果显示scFv联合X线照射后,较单纯X线照射组明显降低了HEP2细胞的存活率(P<0.05),克隆形成实验结果显示scFv对放射的增敏比为1.89。结论成功构建了HIF1α人源喉癌单链抗体,且其能增加HEP2细胞对放疗的敏感性。 展开更多

关键词 噬菌体单链抗体scfv 喉癌 HIF1Α 放疗增敏

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日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用 被引量：13

6

作者 何卓 汪世平 +4 位作者 肖小芹 曾少华 刘明社 李林 周帅锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期921-928,共8页

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28k... 运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础. 展开更多

关键词 日本血吸虫 未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scfv) 噬菌体展示抗体库 CDNA文库

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单链抗体及其在生物医学中的应用 被引量：16

7

作者 马颖 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第z1期1-5,共5页

单链抗体是一种小分子基因工程抗体,以其独有的优势在显像定位诊断、靶向治疗和基因治疗等方面展示了乐观的应用前景。本文对单链抗体的构建、表达及在生物医学中的应用作一综述。

关键词 单链抗体(scfv) 噬菌体抗体库 靶向治疗

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抗人CD19单链抗体基因的构建、表达及功能测定 被引量：12

8

作者 陈森 饶青 +1 位作者 王建祥 王敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期686-691,共6页

采用RTPCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接(spliceoverlapextension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD19单链抗体(抗CD19... 采用RTPCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接(spliceoverlapextension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD19单链抗体(抗CD19ScFv)基因。将其克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达。SDSPAGE和Westernblot分析结果表明,抗CD19ScFv在BL21(DE3)菌中获得表达,重组蛋白的相对分子量为27kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实抗CD19ScFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD19结合,保留了鼠源性单抗与CD19结合活性。抗人CD19ScFv的构建与表达,为下一步针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 CD19 单链抗体(scfv) 原核表达

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人源天然ScFv噬菌体抗体库的构建及鉴定 被引量：8

9

作者 毛晓燕 乔玉玲 +2 位作者 卢卫嘉 马瑞 赵红 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期18-22,共5页

噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本,通过提取淋巴细胞、逆转录-PCR(RT-PCR)、抗体可变区基因的扩增、重叠PCR获得单链抗体(ScFv)基因,将ScFv克隆入噬粒载体,通过近300次的电转化获得了库容量为... 噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本,通过提取淋巴细胞、逆转录-PCR(RT-PCR)、抗体可变区基因的扩增、重叠PCR获得单链抗体(ScFv)基因,将ScFv克隆入噬粒载体,通过近300次的电转化获得了库容量为1.3×109的全人源天然ScFv噬菌体抗体库。通过随机挑克隆测序和用5种不同抗原筛选对抗体库进行了初步验证。随机测序表明抗体库具有较好的多样性,用5种不同抗原对其进行筛选,均获得了特异性噬菌体抗体的不同富集,表明成功构建了一个多样性良好的人源天然ScFv噬菌体抗体库。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 抗体库 单链抗体(scfv)

原文传递

人源抗c-Met单链抗体腹腔注射可抑制A549肺腺癌荷瘤小鼠移植瘤生长

10

作者 安然 刘明珠 +4 位作者 张露 彭上 甄翔程 闵静婷 李正红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期549-555,共7页

目的 该实验旨在验证间质上皮转化单链抗体(Met scFv)在体内对皮下移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 建立裸鼠肿瘤模型,皮下注射A549肺腺癌细胞,成瘤后通过腹腔注射IRDye680 LT N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯标记的Met scFv,借助小动物成像仪进... 目的 该实验旨在验证间质上皮转化单链抗体(Met scFv)在体内对皮下移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 建立裸鼠肿瘤模型,皮下注射A549肺腺癌细胞,成瘤后通过腹腔注射IRDye680 LT N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯标记的Met scFv,借助小动物成像仪进行实时监测以观察该抗体在荷瘤小鼠体内的动态分布情况,检测肿瘤组织细胞c-Met与抗体的亲和力,定期尾静脉注射Met scFv,观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线。免疫组织化学染色法检测Met scFv是否能有效结合肿瘤组织中的c-Met抗原。结果 裸鼠体内分布结果表明,在最初的3 h内,Met scFv主要分布于腹腔内。经过大约48 h,荧光信号开始在肿瘤组织中聚集。瘤体免疫组织化学染色结果显示,肿瘤组织中c-Met高表达;定期尾静脉注射Met scFv,可使小鼠瘤体生长明显减缓。结论 Met scFv在体内特异性识别肿瘤细胞且表现出显著的抗肿瘤活性。 展开更多

关键词 细胞间质上皮转化(c-Met) 单链抗体(scfv) 抗原识别 抗肿瘤活性

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抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定 被引量：4

11

作者 何峰容 王晓娟 +4 位作者 周小欧 李曼君 朱慧芬 吴万敏 沈关心 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期224-226,共3页

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性... 目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(AId)。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000 bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 SARS 噬菌体抗体库技术 独特型抗体(AId) 单链抗体(scfv)

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全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定 被引量：5

12

作者 张倩倩 赵茜 +7 位作者 张晓 丁贵鹏 金秋 高畅 熊四平 陈玉平 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期927-931,共5页

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scF... 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒G蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体(scfv) 中和活性

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兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展 被引量：3

13

作者 吴双敏 李龙 +2 位作者 侯仁 陈玉霜 彭大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期755-764,共10页

因不合理或违规使用兽药,导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留,继而危害人类健康、破坏生态环境。因此,兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力,根据其特性已发开了不... 因不合理或违规使用兽药,导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留,继而危害人类健康、破坏生态环境。因此,兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力,根据其特性已发开了不同的检测方法,如免疫分析法、受体检测法及生物传感器法等方法,广泛用于生物医药的研究。由于分子识别元件是分析的主体,影响分析的选择性,因此不同识别元件与兽药相互作用的机制越来越受到人们的重视。随着计算机技术的发展,同源建模和分子对接广泛用于残留检测技术,主要用于药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等生物分子之间相互作用的研究。笔者重点介绍了单链抗体(ScFv)、受体和适配体3种识别元件与兽药小分子之间的互作机制,主要分析生物识别元件与兽药结合部位形成的氢键、疏水性及关键氨基酸或碱基,在分子水平上探究药物与识别元件的机理和规律,从而找出影响识别元件与药物结合的关键因素,并对3种识别元件进行了总结,以期为全面了解识别机制和体外进化,制备出亲和力更广的ScFv、受体、适配体提供理论支撑,为后续药物残留检测技术和药物开发奠定基础。 展开更多

关键词 生物识别元件 单链抗体(scfv) 受体 适配体 同源建模 分子对接

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靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用 被引量：3

14

作者 刘传苗 刘明珠 +3 位作者 黄艳平 储菲 李永海 李正红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期401-407,共7页

目的制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用。方法将scFv基因插入至p Fuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯... 目的制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用。方法将scFv基因插入至p Fuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响。结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关。结论制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞。 展开更多

关键词 c-Met 单链抗体(scfv) A549细胞 靶向性 补体依赖的细胞毒性(CDC) 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)

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应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1 被引量：3

15

作者 刘蓉 杨炼 +3 位作者 孙秀兰 张根义 张灏 姚卫蓉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期281-283,共3页

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。... 利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。 展开更多

关键词 单链抗体(scfv) 黄曲霉毒素B1(AFB1) 酶联免疫吸附法(ELISA)检测

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单链抗体联合治疗仔猪病毒性腹泻病的效果研究 被引量：3

16

作者 张凡庆 陈玉雪 +2 位作者 杨亮 龚建培 朱建国 《中国猪业》 2018年第6期43-45,48,共4页

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)是引起仔猪严重腹泻的两种高度接触性传染病。本文将实验室已有的两株针对TGEV和PEDV的单链抗体(single chain fragment variable,sc... 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)是引起仔猪严重腹泻的两种高度接触性传染病。本文将实验室已有的两株针对TGEV和PEDV的单链抗体(single chain fragment variable,scFv)进行大量表达和纯化,将纯化后的scFv应用到发生疫病的猪场。同时比较了scFv、scFv与奶粉联合使用对仔猪病毒性腹泻的治疗效果,结果证实scFv单独使用后仔猪存活率达到65.0%,scFv与奶粉联合使用后仔猪存活率达到72.7%。本研究探索了一种利用scFv治疗PEDV和TGEV感染的新的给药方法。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 单链抗体(scfv) 治疗

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全人源抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的构建 被引量：2

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作者 王净 王慧 +1 位作者 袁媛 李青 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第11期2139-2142,共4页

目的:利用噬菌体展示技术构建全人源性抗乳腺癌单链抗体库。方法:从临床获取未化疗乳腺癌病人外周血样30份,分离出单个核细胞(PBMC),提取总RNA,用RT-PCR技术逆转录获得cDNA,并扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)基因,经重叠延伸PCR(SOE... 目的:利用噬菌体展示技术构建全人源性抗乳腺癌单链抗体库。方法:从临床获取未化疗乳腺癌病人外周血样30份,分离出单个核细胞(PBMC),提取总RNA,用RT-PCR技术逆转录获得cDNA,并扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR),在体外将两者连接成单链抗体(scFv)基因片段,将该片段用Sfi I和Not I酶切后克隆至pCantab5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,收集培养后平板上的菌落,即构建初级噬菌体单链抗体库。结果:得到长度约为360bp和340bp的VH和VL,拼接后得到的scFv长度约为750bp;经PCR初步鉴定插入率约为80%,BstN 1多样性酶切检验,酶切图谱呈多样性。经测序验证,最终获得库容约为2.4×106pfu/ml初级单链抗体库。结论:本研究获得了全人源抗乳腺癌噬菌体单链抗体库,为下一步筛选抗人乳腺癌细胞特异性单链抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 全人源抗体库 乳腺癌 单链抗体(scfv) 噬菌体抗体库

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抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26～28kDa单链抗体与EGFP的融合表达及靶向性研究 被引量：3

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作者 何卓 汪世平 +6 位作者 周帅锋 秦永华 高冬梅 汪希雅 李林 余路新 徐绍锐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期704-707,共4页

目的体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位，探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值。方法扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因．克隆至PET32a／SIEA26～28kDa-scFv质粒，构建PET... 目的体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位，探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值。方法扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因．克隆至PET32a／SIEA26～28kDa-scFv质粒，构建PET32a／EGFP-scFv质粒。转化至感受态E．coli BL21（DE3）中。并诱导表达单链抗体融合蛋白。分析单链抗体融合蛋白与SIEA26～28kDa的结合特异性。单链抗体融合蛋白与日本血吸虫成虫、虫卵切片孵育，荧光显微镜下观测GFP信号。确定特异性单链抗体的靶向性。结果重组质粒PET32a／EGFP-scFv构建成功．Trx-EGFP-scFv融合蛋白高效表达．与SIEA26-28kDa特异性结合。GFP信号主要集中在未成熟卵卵胚．雌虫卵巢、卵黄腺及与生殖系统邻近的肠腔组织。结论SIEA26-28kDa单链抗体与血吸虫未成熟卵胚胎及雌虫生殖系统具有较强的靶向性，具有潜在抗卵胚发育、抗雌虫生殖作用，为SIEA26-28kDa单链抗体在抗日本血吸虫病疫苗免疫靶向方面的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 未成熟卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scfv) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 靶向性

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肺腺癌靶向性超氧化物歧化酶的构建及功能分析 被引量：1

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作者 卢敏 龚兴国 +3 位作者 汪辰卉 郑乐 郭建军 章申峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-58,共8页

临床上,超氧化物歧化酶(SOD)的低肿瘤细胞定位能力限制了其在抗肿瘤领域的广泛应用,这一直是国内外学者们试图解决的难点.研究中,以基因工程方法连接念珠藻Fe-SOD(iron-superoxidedismutase)基因和抗SPC-A-1肺腺癌LC-1ScFv(singlechain... 临床上,超氧化物歧化酶(SOD)的低肿瘤细胞定位能力限制了其在抗肿瘤领域的广泛应用,这一直是国内外学者们试图解决的难点.研究中,以基因工程方法连接念珠藻Fe-SOD(iron-superoxidedismutase)基因和抗SPC-A-1肺腺癌LC-1ScFv(singlechainFv)基因,并融合表达获得了SOD-ScFv融合蛋白.纯化后SOD-ScFv表现出SOD和ScFv的双重活性.SPC-A-1肺腺癌细胞中,融合蛋白的异硫氰酸荧光素(FITC)染色追踪和自由基含量分析表明,SOD-ScFv具备识别SPC-A-1肺腺癌细胞、透膜并清除胞内自由基的功能,最终达到抑制肿瘤细胞生长的目的.研究提出的靶向抗肿瘤机制将克服临床上SOD无目标趋向性和难于进入实体瘤的两大应用局限性,并提供了一种利用LC-1ScFv来靶向投递抗肿瘤药物的思路. 展开更多

关键词 FE-SOD 单链抗体(scfv) 融合表达 靶向治疗

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严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)人源性单链抗体文库的构建 被引量：2

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作者 张文帅 曾晓燕 +2 位作者 迟莹 刘静娴 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期390-394,共5页

目的构建人源性严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)单链抗体(scFv)文库,并用SFTSV颗粒对文库进行初步筛选。方法提取8例SFTS恢复期患者外周血淋巴细胞的总RNA,逆转录为cDNA;并以此为模板PCR扩增人源抗体轻链库(Vκ和Vλ)和重链库(V... 目的构建人源性严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)单链抗体(scFv)文库,并用SFTSV颗粒对文库进行初步筛选。方法提取8例SFTS恢复期患者外周血淋巴细胞的总RNA,逆转录为cDNA;并以此为模板PCR扩增人源抗体轻链库(Vκ和Vλ)和重链库(VH),再经过重叠PCR随机拼接成scFv基因文库,最后克隆入噬菌粒载体pComb3XSS中,将重组噬菌粒电转化感受态XL1-Blue细胞,得到SFTSV抗体文库,检测文库库容及多样性,并用SFTSV颗粒作抗原对抗体文库进行初步筛选。结果构建的人源SFTSV抗体文库的库容为2.8×10~7,测序结果表明文库多样性好,经过初步筛选获得21个克隆的人源化scFv,具有与SFTSV颗粒结合的活性。结论成功构建了人源抗SFTSV的scFv文库。 展开更多

关键词 严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 人源抗体文库 单链抗体(scfv)

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