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多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用
被引量：
2
1
作者
徐小洁
张文红
+3 位作者
康磊
韩锋产
颜真
阎小君
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期572-574,579,共4页
目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immu...
目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads,IB),通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体,荧光偏振(fluorescence polarization,FP)法鉴定抗体的特异性,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,紫外分光光度法测定其回收率。结果:合成的MAP具有较强的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶12800。MAP制备免疫磁珠的最佳包被浓度为100mg/L,包被效率最高可达79%。应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体,经鉴定与其他抗原表位无反应性,其纯度为95%,抗体的回收率为5.8%。结论:MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体,其性质类似单克隆抗体。这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景。
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关键词
多聚抗原肽
免疫磁珠
单
表位
抗体
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职称材料
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎外周血和肠系膜淋巴结CD_4^+CD_(25)^+Foxp3^+调节T细胞表达的影响
被引量：
1
2
作者
张茹
王立生
+3 位作者
王建尧
姚君
魏铖
师瑞月
《海南医学》
CAS
2012年第20期15-17,共3页
目的观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达的影响。方法采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型...
目的观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达的影响。方法采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型(UC模型),将实验小鼠随机分成四组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP-2治疗组和兔IgG治疗组。除NC组外,其他实验组均给予5%DSS造模7d后停用造模药,药物治疗组给予后续干预治疗7d。记录分析疾病活动指数(DAI),14d后处死小鼠,取结肠组织行HE染色;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4+CD25+Foxp3+的Treg细胞的百分比率,并进行统计学分析。结果 TSP-2治疗组小鼠第9~14天DAI明显低于MD组(P<0.05);MD组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于NC组(P<0.05);TSP-2治疗组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于MD组(P<0.05);兔IgG治疗组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSP-2可以提高CD4+CD25+Foxp3+Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥治疗作用。
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关键词
抗小鼠TLR2
胞外段
单
表位
抗体
TSP-2
溃疡性结肠炎
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职称材料
小鼠PGRP-L分子N端基因片段的克隆与原核表达
被引量：
5
3
作者
何智
陈政良
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期370-374,共5页
采用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠肝组织总RNA中扩增到长约500bp的小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)分子N端基因片段,将其克隆入pUCm-T载体构建重组质粒pmGN,DNA测序表明该基因片段长530bp,序列与GenBank中的完全一致。应用PCR技术,从重组质...
采用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠肝组织总RNA中扩增到长约500bp的小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)分子N端基因片段,将其克隆入pUCm-T载体构建重组质粒pmGN,DNA测序表明该基因片段长530bp,序列与GenBank中的完全一致。应用PCR技术,从重组质粒pmGN中扩增目的基因片段,插入表达质粒pET-28a构建重组表达载体pET-GN,导入大肠杆菌BL21中诱导表达目的蛋白,表达产物以Ni+-NTAagarose层析柱纯化。SDS-PAGE和Westernblot分析发现,表达产物主要以包涵体形式存在,相对分子质量约29000。ELISA表明,重组蛋白能被抗mPGRP-L分子N端单表位多克隆抗体所识别。为mPGRP-L分子的研究奠定了一定基础。
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关键词
小鼠肽聚糖识别蛋白
克隆
原核表达
单
表位
多克隆
抗体
天然免疫
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职称材料
题名
多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用
被引量：
2
1
作者
徐小洁
张文红
康磊
韩锋产
颜真
阎小君
机构
第四军医大学全军基因诊断技术研究所国家肿瘤生物重点实验室
西安交通大学医学院免疫学及病原微生物学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期572-574,579,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2002AA230231)
文摘
目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads,IB),通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体,荧光偏振(fluorescence polarization,FP)法鉴定抗体的特异性,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,紫外分光光度法测定其回收率。结果:合成的MAP具有较强的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶12800。MAP制备免疫磁珠的最佳包被浓度为100mg/L,包被效率最高可达79%。应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体,经鉴定与其他抗原表位无反应性,其纯度为95%,抗体的回收率为5.8%。结论:MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体,其性质类似单克隆抗体。这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景。
关键词
多聚抗原肽
免疫磁珠
单
表位
抗体
Keywords
multiple antigen peptides （MAP）
immunomagnetic beads （IB）
single-epitope antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎外周血和肠系膜淋巴结CD_4^+CD_(25)^+Foxp3^+调节T细胞表达的影响
被引量：
1
2
作者
张茹
王立生
王建尧
姚君
魏铖
师瑞月
机构
暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院
深圳市儿童医院
出处
《海南医学》
CAS
2012年第20期15-17,共3页
基金
广东省自然科学基金项目(编号:10151802001000002)
深圳市重点基金项目(编号:200901003)
文摘
目的观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达的影响。方法采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型(UC模型),将实验小鼠随机分成四组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP-2治疗组和兔IgG治疗组。除NC组外,其他实验组均给予5%DSS造模7d后停用造模药,药物治疗组给予后续干预治疗7d。记录分析疾病活动指数(DAI),14d后处死小鼠,取结肠组织行HE染色;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4+CD25+Foxp3+的Treg细胞的百分比率,并进行统计学分析。结果 TSP-2治疗组小鼠第9~14天DAI明显低于MD组(P<0.05);MD组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于NC组(P<0.05);TSP-2治疗组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于MD组(P<0.05);兔IgG治疗组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSP-2可以提高CD4+CD25+Foxp3+Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥治疗作用。
关键词
抗小鼠TLR2
胞外段
单
表位
抗体
TSP-2
溃疡性结肠炎
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
小鼠PGRP-L分子N端基因片段的克隆与原核表达
被引量：
5
3
作者
何智
陈政良
机构
南方医科大学免疫学教研室
出处
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期370-374,共5页
文摘
采用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠肝组织总RNA中扩增到长约500bp的小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)分子N端基因片段,将其克隆入pUCm-T载体构建重组质粒pmGN,DNA测序表明该基因片段长530bp,序列与GenBank中的完全一致。应用PCR技术,从重组质粒pmGN中扩增目的基因片段,插入表达质粒pET-28a构建重组表达载体pET-GN,导入大肠杆菌BL21中诱导表达目的蛋白,表达产物以Ni+-NTAagarose层析柱纯化。SDS-PAGE和Westernblot分析发现,表达产物主要以包涵体形式存在,相对分子质量约29000。ELISA表明,重组蛋白能被抗mPGRP-L分子N端单表位多克隆抗体所识别。为mPGRP-L分子的研究奠定了一定基础。
关键词
小鼠肽聚糖识别蛋白
克隆
原核表达
单
表位
多克隆
抗体
天然免疫
Keywords
mouse peptidoglycan recognition protein
cloning
expression
monoepitope mulitclone antibody
in-nate immunity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用
徐小洁
张文红
康磊
韩锋产
颜真
阎小君
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
下载PDF
职称材料
2
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎外周血和肠系膜淋巴结CD_4^+CD_(25)^+Foxp3^+调节T细胞表达的影响
张茹
王立生
王建尧
姚君
魏铖
师瑞月
《海南医学》
CAS
2012
1
下载PDF
职称材料
3
小鼠PGRP-L分子N端基因片段的克隆与原核表达
何智
陈政良
《现代免疫学》
CAS
CSCD
北大核心
2005
5
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职称材料
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