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抗人脑胶质瘤单克隆抗体H_(12)的荧光标记 被引量：2
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作者 庄明华 白晔 +6 位作者 高立达 李明远 牟家婉 何俊 李勇 蒋忠华 东云华 《汕头大学医学院学报》 2001年第4期248-250,共3页
目的 :探讨H1 2 单克隆抗体的不同浓度对FITC荧光标记结果的影响。方法 :紫外吸收法测定抗体蛋白质浓度 ,透析标记法进行抗体荧光标记 ,并以ELISA法对抗体进行特异性鉴定及效价分析。结果 :标记前后抗体特异性经ELISA鉴定未见明显差异... 目的 :探讨H1 2 单克隆抗体的不同浓度对FITC荧光标记结果的影响。方法 :紫外吸收法测定抗体蛋白质浓度 ,透析标记法进行抗体荧光标记 ,并以ELISA法对抗体进行特异性鉴定及效价分析。结果 :标记前后抗体特异性经ELISA鉴定未见明显差异。结论 :①FITC荧光标记前抗体蛋白质浓度应达 (10～ 2 0 )mg mL ,才能得到合适的F P比值。②F P值在 1～ 2之间者较为理想 ,如果过标记的抗体F P >2则可导致非特异性染色的增加 ,增加假阳性率 ;标记不足F P <1则可导致假阴性率增加。③标记后虽可出现特异性下降和蛋白量的丢失 ;但特异性鉴定与标记前未见明显差异。故标记后抗体H1 2 展开更多
关键词 单克隆抗体h12 脑胶质瘤 荧光标记
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单克隆抗体18H12抑制PAMC-82胃癌干细胞的自我更新和侵袭能力
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作者 杨婷 舒雄 +4 位作者 孙立新 遇珑 孙力超 杨治华 冉宇靓 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1081-1086,共6页
目的:探讨靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体18H12对胃癌干细胞自我更新和侵袭能力的作用。方法:以胃癌细胞株PAMC-82为模型,用流式细胞术检测其亲本细胞和通过成球培养富集干细胞后细胞膜表面烯醇化酶1(enolase-1,ENO1)的表达水平,用... 目的:探讨靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体18H12对胃癌干细胞自我更新和侵袭能力的作用。方法:以胃癌细胞株PAMC-82为模型,用流式细胞术检测其亲本细胞和通过成球培养富集干细胞后细胞膜表面烯醇化酶1(enolase-1,ENO1)的表达水平,用流式细胞术分选出ENO1+和ENO1-细胞,并检测其自我更新和侵袭能力。以商业化的ENO1抗原和抗体作为样品,利用免疫共沉淀实验(co-immunoprecipitation,CoIP)验证靶向ENO1的18H12抗体能够准确识别ENO1。分别用18H12处理PAMC-82细胞12、24、48 h后,用甲基纤维素成球实验和Transwell小室法分别检测18H12对PAMC-82细胞自我更新和侵袭能力的影响。结果:细胞膜表面的ENO1在PAMC-82球体细胞中的表达水平明显高于亲本细胞(P<0.01),ENO1可作为一个靶向胃癌干细胞的潜在靶点。分选的ENO1+细胞的自我更新和侵袭能力明显强于ENO1-细胞和亲本细胞(P<0.05或P<0.01)。18H12抗体能够准确识别ENO1,与商业化抗体识别的条带一致。单抗18H12能显著抑制PAMC-82细胞的自我更新和侵袭能力(均P<0.01)。结论:单克隆抗体18H12能够显著抑制胃癌干细胞的自我更新和侵袭能力,有望成为靶向胃癌干细胞的候选抗体药物。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 单克隆抗体18h12 PAMC-82细胞 自我更新 侵袭
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靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对DBA/1小鼠单关节炎的保护作用 被引量：2
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作者 娄苇苇 杜晓楠 +3 位作者 袁慧慧 窦云鹏 赵文明 李慎涛 《微生物学免疫学进展》 2017年第2期8-16,共9页
目的制备同时拮抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κB受体活化因子配体(re-ceptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的人源化单克隆抗体(h8G12),通过单关节炎小鼠模型,评估h8G12在抑制TNF-α引起的炎症反应... 目的制备同时拮抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κB受体活化因子配体(re-ceptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的人源化单克隆抗体(h8G12),通过单关节炎小鼠模型,评估h8G12在抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏中的保护作用。方法培养稳定表达h8G12的CHO细胞株,观察细胞生长状态,用间接ELISA检测细胞培养上清中h8G12的表达水平。纯化的h8G12经SDS-PAGE、West-ern blot分析及鉴定,用间接ELISA观察其亲和力。通过向DBA/1小鼠膝关节腔注射人TNF-α重组蛋白和人RANKL重组蛋白,建立单关节炎小鼠模型。用组织学评估观察不同给药方案[阴性对照组、阳性对照组、阿达木单抗(adalimumab,ADA)组和h8G12组]对小鼠单关节炎引起的炎症浸润、软骨侵蚀、膝关节腔内破骨细胞分化的保护作用。结果 CHO细胞株培养96 h时细胞生长状态良好,可稳定分泌h8G12;纯化的h8G12纯度可达90%,Western blot可见特异性条带,且可与rh TNF-α和rh RANKL结合。在单关节炎小鼠模型中,苏木精-伊红染色显示,h8G12组关节腔、周围软组织及骨髓腔内炎性细胞浸润明显少于阳性对照组,炎症评分降低了50%,治疗效果与ADA相似。甲苯胺蓝染色显示,h8G12组病理评分出现显著下降,h8G12治疗后小鼠关节结构相对完好,关节软骨厚度接近正常水平。抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,h8G12组关节腔内破骨细胞明显减少。结论 h8G12可有效抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏,为类风湿关节炎的治疗提供了新方法。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 肿瘤坏死因子Α 核因子ΚB受体活化因子配体 人源化单克隆抗体(h8G12)
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