脐带华通胶间充质干细胞的分离培养及鉴定 被引量：13

1

作者 陈宇 张宁坤 +3 位作者 杨明 沈燕华 王丽华 高连如 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期2412-2415,2420,共5页

目的探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养方法,并通过成脂成骨诱导及表面标记物的检测进行鉴定。方法剔除脐带动脉、静脉和外膜,取遗留的华通胶组织,将其剪成细小的碎块,用浓度为0.2%的Ⅱ型胶原酶消化,提取脐带华通胶间充质干细... 目的探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养方法,并通过成脂成骨诱导及表面标记物的检测进行鉴定。方法剔除脐带动脉、静脉和外膜,取遗留的华通胶组织,将其剪成细小的碎块,用浓度为0.2%的Ⅱ型胶原酶消化,提取脐带华通胶间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD90、CD105、CD73、HLA-ABC、CD34、CD45及HLA-DR,成骨细胞、成脂细胞分化诱导。结果脐带华通胶经胶原酶消化后,可提取大量间充质干细胞,流式细胞仪检测脐带华通胶干细胞不表达造血干细胞的表面特征,而表达间充质干细胞的标志,例如CD44、CD90、CD105及CD73,并且干细胞HLA-ABC阳性表达,CD34、CD45及HLA-DR呈阴性。组织化学染色显示茜素红、碱性磷酸酶及油红染色强阳性。结论该方法可较好地分离脐带华通胶间充质干细胞,将为实验研究和临床应用提供一种新的干细胞来源。 展开更多

关键词 脐带 华通胶 间充质干细胞 分离培养 鉴定

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甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架的制备与表征 被引量：1

2

作者 袁勋 丁振罡 +7 位作者 付力伟 吴江 郑亚哲 张智超 田广招 眭翔 刘舒云 郭全义 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第22期3517-3523,共7页

背景:随着组织工程为关节软骨损伤修复这一世界难题带来了新的希望,构建成分仿生的光固化3D打印水凝胶支架对软骨组织工程具有重要意义。目的:通过数字光处理3D打印技术构建成分仿生的甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架,评... 背景:随着组织工程为关节软骨损伤修复这一世界难题带来了新的希望,构建成分仿生的光固化3D打印水凝胶支架对软骨组织工程具有重要意义。目的:通过数字光处理3D打印技术构建成分仿生的甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架,评价其生物相容性。方法:从人脐带中分离提取华通胶组织后进行脱细胞处理,冷冻干燥后磨成粉末,溶于PBS中制备50 g/L的脱细胞华通胶溶液。制备甲基丙烯酰化透明质酸,冻干后溶于PBS中制备50 g/L的甲基丙烯酰化透明质酸溶液。将脱细胞华通胶溶液与甲基丙烯酰化透明质酸溶液以体积比1∶1混合,加入光引发剂后作为生物墨水。通过数字光处理3D打印技术分别制备甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶支架(记为HAMA水凝胶支架)与甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架(记为HAMA/WJ水凝胶支架),表征支架的微观结构、溶胀性能、生物相容性与促软骨分化性能。结果与结论:①扫描电镜下见两组支架均呈三维立体的网状结构,其中HAMA/WJ水凝胶支架纤维连接更加均匀;两组支架均在10 h内达到溶胀平衡,HAMA/WJ水凝胶支架的平衡溶胀比低于HAMA水凝胶支架(P<0.05)。②CCK-8实验显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖;死活染色显示骨髓间充质干细胞在两组支架上生长良好,并且HAMA/WJ水凝胶支架上的细胞立体分布均匀、细胞数量更多;鬼笔环肽染色显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架上的骨髓间充质干细胞黏附与铺展更佳。③将骨髓间充质干细胞接种于两组支架后进行成软骨诱导培养,qRT-PCR检测结果显示,HAMA/WJ水凝胶支架组聚集蛋白聚糖、SOX9、Ⅱ型胶原mRNA表达量均高于HAMA水凝胶支架组(P<0.05,P<0.01)。④结果表明,数字光处理3D生物打印HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖、黏 展开更多

关键词 华通胶 甲基丙烯酰化透明质酸 水凝胶 支架 数字光处理3D打印 软骨损伤 骨髓间充质干细胞 组织工程

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华通胶修饰的聚己内酯静电纺丝人工血管支架的构建及性能分析

3

作者 何芳玲 蒋廷波 《中国临床新医学》 2024年第2期179-185,共7页

目的构建华通胶(WJ)修饰的聚己内酯(PCL)静电纺丝人工血管支架,并分析其性能。方法采用胰蛋白酶法对WJ组织进行脱细胞处理,通过组织学染色和生化成分定量分析WJ组织的脱细胞效率,以及脱细胞前后WJ组织生化成分的差异。通过酶联免疫吸附... 目的构建华通胶(WJ)修饰的聚己内酯(PCL)静电纺丝人工血管支架,并分析其性能。方法采用胰蛋白酶法对WJ组织进行脱细胞处理,通过组织学染色和生化成分定量分析WJ组织的脱细胞效率,以及脱细胞前后WJ组织生化成分的差异。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脱细胞前后WJ组织生物活性因子的水平差异。将经过处理的WJ与PCL混合制备纺丝液,并采用静电纺丝技术制备管状的WJ/PCL静电纺丝人工血管支架,分析其纳米纤维结构、纤维直径分布、生物力学性能及血液相容性。结果通过胰蛋白酶法脱细胞处理可有效去除WJ基质的细胞核成分,保留了WJ基质的大部分生化成分[包括糖胺聚糖(GAG)、蛋白质、纤维、透明质酸和羟脯氨酸]以及生物活性因子[包括血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)]。经静电纺丝技术制备的WJ/PCL静电纺丝人工血管支架呈现典型的纳米纤维结构,且经傅立叶红外光谱(FTIR)验证,其同时含有WJ和PCL的特征峰。WJ/PCL静电纺丝人工血管支架表现出良好的生物力学特性和血液相容性,可有效抑制血小板黏附。结论WJ是一种理想的天然材料,可用于与PCL等合成材料复合,制备具有理想生物特性的静电纺丝人工血管支架。 展开更多

关键词 华通胶 静电纺丝 复合生物支架 人工血管

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人脐带华通胶间充质干细胞的体外分离培养及鉴定 被引量：6

4

作者 胡晶琼 李慧玉 +4 位作者 欧阳为相 胡丽 卢聪 张兰男 陈莉莉 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期529-533,共5页

目的研究由脐带华通胶组织(Wharton’s jelly)在体外分离、培养、扩增获得脐带间充质干细胞(umbilical cord derived mesenchymal stem cells,以下简称UC-MSCs)的方法,并进行UC-MSCs的各项鉴定。方法脐带华通胶组织采用胶原酶以及胰酶... 目的研究由脐带华通胶组织(Wharton’s jelly)在体外分离、培养、扩增获得脐带间充质干细胞(umbilical cord derived mesenchymal stem cells,以下简称UC-MSCs)的方法,并进行UC-MSCs的各项鉴定。方法脐带华通胶组织采用胶原酶以及胰酶序贯消化法分离得到UC-MSCs,用流式细胞仪分析其表型特征,向成骨、成脂以及成神经元细胞诱导分化并鉴定。结果由人脐带华通胶可以有效获得间充质干细胞。原代细胞培养24～48h内细胞开始贴壁生长,5～7d左右可以传代培养,在2～3周时间内可以迅速扩增至107到108数量级。各项分化鉴定试验证实UC-MSCs具有多向分化潜能,能分化成骨、成脂细胞以及神经元细胞。UC-MSCs在体外培养传至20～30代仍保持稳定的细胞表面标记。结论由人脐带华通胶可以有效地获得间充质干细胞,这种UC-MSCs能在体外长期传代培养,生物学特性稳定,具有多向分化的潜能,是今后细胞治疗很有前景的种子细胞。 展开更多

关键词 间充质干细胞 脐带 华通胶 诱导分化

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改良原代培养体系提高人脐带间充质干细胞的产量 被引量：4

5

作者 高彦琳 张宁坤 +2 位作者 陈厚良 高连如 朱智明 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第10期1477-1481,共5页

背景:目前关于脐带间充质干细胞培养方法的研究很多,但尚无关于初次培养后废弃物的相关研究。目的:探讨优化人脐带来源间充质干细胞体外培养的最佳方法。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,记为初次培养组。将原代培养... 背景:目前关于脐带间充质干细胞培养方法的研究很多,但尚无关于初次培养后废弃物的相关研究。目的:探讨优化人脐带来源间充质干细胞体外培养的最佳方法。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,记为初次培养组。将原代培养瓶中的培养液及组织离心,重新分成组织组、混合组和纯液组进行再次培养。观察4组原代细胞的细胞形态、获得时间和细胞得率;MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型。结果与结论:初次培养组、再次培养组织组、再次培养混合组、再次培养纯液组获取细胞的平均时间分别为(15.00±0.45)d,(7.0±0.3)d,(8.00±0.25)d,(8.00±0.25)d。每个T75培养瓶可获取的第1代细胞数分别为(4.0±0.5)×105、(9.0±0.55)×105、(15.0±0.2)×105、(7.0±0.33)×105个。倒置显微镜下观察4组细胞为形态相对均一的梭形贴壁细胞,呈平行排列生长或漩涡状生长。4组细胞的生长曲线、增殖活性、表面标记物检测均无明显差异。结果表明对脐带间充质干细胞的原代培养体系进行再次培养,可在短时间内扩增出大量原代细胞。 展开更多

关键词 脐带 间质干细胞 细胞 培养的 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 细胞培养 华通胶 国家自然科学基金

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脐带间充质干细胞移植治疗子宫切口瘢痕缺陷大鼠的疗效观察 被引量：4

6

作者 罗惠娟 王宁 +4 位作者 周娟 汤小湄 陈宇毅 罗文斌 肖小敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2079-2084,共6页

目的:将脐带华通胶间充质干细胞(WJMSCs)移植到子宫切口瘢痕缺陷(PCSD)模型大鼠体内,探讨其治疗效果。方法:取雌性SD大鼠50只、将其随机分为3组:正常手术组(N-O组)10只、模型对照组(M-C组)20只和模型治疗组(M-T组)20只。孕第19天N-O组... 目的:将脐带华通胶间充质干细胞(WJMSCs)移植到子宫切口瘢痕缺陷(PCSD)模型大鼠体内,探讨其治疗效果。方法:取雌性SD大鼠50只、将其随机分为3组:正常手术组(N-O组)10只、模型对照组(M-C组)20只和模型治疗组(M-T组)20只。孕第19天N-O组剖宫取胎后连续缝合子宫切口;M-C组与M-T组剖宫产术后子宫肌壁注射脂多糖(LPS)联合电凝(功率为10 W)子宫切缘,间断缝合切口。M-T组分A、B亚组(各10只),A组静脉注射0.5 m L+阴道灌注0.5 m L(1×10~9/L)WJMSCs,B组阴道灌注1 m L同浓度WJMSCs,每周1次,共3次;M-C亦分A、B亚组(各10只),与M-T组同样方法处理,仅将生理盐水替代WJMSCs。各组治疗后第1和4周,分别处死6和4只,留双侧子宫进行HE染色、Masson染色、肌动蛋白(actin)和细胞角蛋白免疫组化染色,通过体视学分析,检测子宫肌层和内膜的修复情况。结果:WJMSCs治疗后第1和4周,M-C组子宫肌层厚度和actin体积密度(Vv)均显著低于N-O组,肌层胶原纤维Vv和内膜缺陷率高于N-O组(P<0.05);WJMSCs治疗后第1和4周,M-T的A和B组的肌层厚度和actin Vv均显著高于M-C组,肌层胶原纤维Vv低于M-C组;M-C组内膜缺陷率高于其它组(P<0.05)。结论:WJMSCs可促进PCSD大鼠子宫肌层结构和功能的修复。静脉+局部联合治疗和单纯阴道治疗效果无明显差别。 展开更多

关键词 华通胶 间充质干细胞 子宫切口瘢痕缺陷 肌动蛋白 细胞角蛋白

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基于静电纺丝人脐带华通胶构建组织工程软骨的实验研究 被引量：2

7

作者 李豪 徐勇 +3 位作者 夏会堂 周广东 姜格宁 李承德 《组织工程与重建外科杂志》 2019年第6期393-397,共5页

目的探索人脐带华通胶静电纺丝纳米纤维膜的制备及其作为软骨组织工程支架的可行性。方法人脐带华通胶经脱细胞处理后,与聚己内酯(PCL)共混制备成静电纺丝纳米纤维膜。取兔耳软骨细胞接种于该纤维膜支架,体外培养验证其细胞相容性;随后... 目的探索人脐带华通胶静电纺丝纳米纤维膜的制备及其作为软骨组织工程支架的可行性。方法人脐带华通胶经脱细胞处理后,与聚己内酯(PCL)共混制备成静电纺丝纳米纤维膜。取兔耳软骨细胞接种于该纤维膜支架,体外培养验证其细胞相容性;随后植入裸鼠体内培养,6周后行组织学检测,验证其体内成软骨的可行性。结果华通胶经脱细胞处理后去除了细胞成分,且保留了绝大部分胶原。华通胶/PCL混合后成功制备出多孔结构的纳米纤维膜。活死细胞染色和CCK-8细胞增殖曲线证实,该纤维膜具有良好的细胞相容性。体内培养6周后取材,组织学证实该纤维膜复合软骨细胞可再生成熟的软骨组织。结论人脐带华通胶可通过静电纺丝技术,制备成适用于软骨组织工程的支架材料。 展开更多

关键词 华通胶 支架 静电纺丝 软骨再生

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基于低温沉积打印技术构建分级多孔脱细胞华通胶支架 被引量：1

8

作者 殷瀚 吴江 +7 位作者 严子能 田广招 张铁元 马阳 王越 眭翔 刘舒云 郭全义 《中国医药生物技术》 2022年第6期488-496,共9页

目的 制备分级多孔的脱细胞华通胶支架,评价其生物相容性。方法 从临床上获得人脐带,并分离出华通胶组织,通过组织学染色观察其生物学成分。采用Na OH溶液对华通胶进行脱细胞处理,采用苏木精-伊红(HE)及DAPI染色观察脱细胞效果,扫描电... 目的 制备分级多孔的脱细胞华通胶支架,评价其生物相容性。方法 从临床上获得人脐带,并分离出华通胶组织,通过组织学染色观察其生物学成分。采用Na OH溶液对华通胶进行脱细胞处理,采用苏木精-伊红(HE)及DAPI染色观察脱细胞效果,扫描电镜评估脱细胞前后胶原保留情况。通过低温沉积3D打印技术制备分级多孔脱细胞华通胶支架,采用扫描电镜观察其内部微观结构。采用CCK-8实验检测分级多孔支架的细胞毒性。将第三代大鼠骨髓间充质干细胞接种于支架上,培养7 d后分别进行活/死染色和细胞鬼笔环肽微丝骨架染色观察。将第三代大鼠骨髓间充质干细胞接种于支架上,加入成软骨诱导培养基培养14d后,通过q RT-PCR法检测成软骨分化相关基因(SOX9、ACAN、COLII、COLI)的表达水平。结果 (1)人脐带呈条索状,由外层的羊膜、华通胶、两条脐动脉和一条脐静脉组成,分离出的华通胶为乳白色,呈胶状;(2)HE染色显示,华通胶富含细胞外基质;番红-O染色显示,华通胶富含糖胺多糖成分;天狼猩红染色显示,华通胶富含胶原成分;甲苯胺蓝染色显示,华通胶富含糖胺多糖成分;(3)经脱细胞处理好,华通胶色泽变得透明。HE及DAPI染色显示,脱细胞华通胶无细胞核结构;扫描电镜显示,脱细胞后,华通胶保留了很好的胶原成分;(4)通过低温沉积3D打印的支架,扫描电镜显示,支架内部呈现分级多孔的微观结构;(5)CCK-8细胞毒性实验显示,打印的支架无明显的细胞毒性;(6)活/死细胞染色显示,骨髓间充质干细胞能够在分级多孔的支架上保持很高的活性(96.0±3.3)%;(7)鬼笔环肽微丝骨架染色显示,骨髓间充质干细胞能够很好地在分级多孔的支架铺展开;(8)qRT-PCR结果显示,相比于普通的平板培养,支架能够促进骨髓间充质干细胞成软骨分化相关的基因表达。结论 脱细胞华通胶富含胶原、糖胺多糖等成分,低� 展开更多

关键词 华通胶 低温沉积3D打印 分级多孔 脱细胞支架 骨髓间充质干细胞 组织工程

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人脐带间充质干细胞分离培养及表面标志检测 被引量：2

9

作者 冯凯 肖漓 +2 位作者 马锡慧 高钰 孔祥瑞 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2013年第6期354-356,共3页

目的探讨体外分离培养人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）的方法，并检测hUCMSC的表面标志。方法分离脐带华通胶（Wharton’sjeuy），将其剪碎后利用组织块贴壁法培养获得hUCMSC，生长至一定密度后进行传代，采用流式细胞术检测第3代hUCMS... 目的探讨体外分离培养人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）的方法，并检测hUCMSC的表面标志。方法分离脐带华通胶（Wharton’sjeuy），将其剪碎后利用组织块贴壁法培养获得hUCMSC，生长至一定密度后进行传代，采用流式细胞术检测第3代hUCMSC表面标志。结果由人脐带华通胶可方便、有效地获得hUCMSC，其体外生长形态类似成纤维细胞，并可稳定增殖和传代。hUCMSC表面标志CD29、CD44、CD105高表达，而表面标志CD45、CD34、HLA-DR、HLA-G、CD80、CD86不表达。结论利用人脐带华通胶组织块培养可有效获得hUCMSC，为组织工程提供丰富的细胞来源。 展开更多

关键词 胎血 间质干细胞 细胞培养技术 抗原 表面 华通胶

原文传递

脐血管及华通胶面积与胎儿生长受限相关性研究

10

作者 杨子凌 吕文杰 +1 位作者 尹宗智 杨媛媛 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2022年第11期825-828,共4页

目的:探讨脐血管及华通胶横截面积与胎儿生长受限(FGR)的相关性,为FGR的发病机制及临床诊疗提供依据。方法:收集2020年8月至2021年12月于安徽医科大学第一附属医院分娩的孕妇新生儿脐带105条,其中FGR 35例,正常对照组70例,取最细段脐带... 目的:探讨脐血管及华通胶横截面积与胎儿生长受限(FGR)的相关性,为FGR的发病机制及临床诊疗提供依据。方法:收集2020年8月至2021年12月于安徽医科大学第一附属医院分娩的孕妇新生儿脐带105条,其中FGR 35例,正常对照组70例,取最细段脐带组织进行Masson染色,采用数码显微镜进行显微摄像并分析比较脐带各组成部分变化与FGR的相关性。结果:FGR组的脐带横截面积、华通胶面积、脐静脉横截面积均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组的脐动脉横截面积、脐静脉壁厚、脐动脉壁厚比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,华通胶面积(aOR=0.368,P=0.001)及脐静脉横截面积(aOR=0.250,P<0.001)与FGR发病独立负相关。结论:脐静脉及华通胶面积减少与FGR显著相关,这可能是FGR的发病机制之一。 展开更多

关键词 胎儿生长受限 脐血管 华通胶 脐带

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人脐带华通胶细胞外基质源性软骨组织工程支架的制备及相关研究

11

作者 刘舒云 侯克东 +5 位作者 鹿亮 黄靖香 袁玫 许文静 卢世璧 郭全义 《中国医药生物技术》 2016年第3期200-205,共6页

目的采用人脐带华通胶细胞外基质为材料制备软骨组织工程支架,并对其性能进行相关检测。方法人脐带去除外膜及动、静脉,通过机械粉碎、差速离心去细胞、冷冻干燥、紫外及化学交联等方法将华通胶组织制备成三维多孔的软骨组织工程支架,... 目的采用人脐带华通胶细胞外基质为材料制备软骨组织工程支架,并对其性能进行相关检测。方法人脐带去除外膜及动、静脉,通过机械粉碎、差速离心去细胞、冷冻干燥、紫外及化学交联等方法将华通胶组织制备成三维多孔的软骨组织工程支架,并通过组织化学和免疫组织化学方法检测其成分保留情况;将人骨髓间充质干细胞复合至支架,光镜及电镜下观察细胞在支架上的生长状况及基质分泌情况,初步了解其生物相容性;将人脐带去细胞华通胶支架植入兔背部皮下,通过组织化学及CD4^+/CD8^+T淋巴细胞免疫荧光染色,了解其炎症情况及免疫原性。结果制备得到的人脐带华通胶细胞外基质源性支架为三维多孔支架,保留了华通胶中糖胺多糖和Ⅱ型胶原等成分,糖胺多糖含量为7.05%,总胶原含量为22.5%;接种于支架上的细胞黏附于支架孔壁上,生长状态良好,并有基质分泌;在体试验未见明显免疫反应。结论人脐带华通胶细胞外基质的成分与软骨细胞外基质类似,有利于细胞黏附和生长,无明显免疫原性,是一种较有前景的软骨组织工程支架材料。 展开更多

关键词 华通胶 细胞外基质 组织工程 支架(骨科)

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脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化的研究

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作者 陈海英 高连如 +2 位作者 张宁坤 杨明 王志国 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第4期645-648,共4页

目的:诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化。方法:胶原酶法分离培养脐带华通胶间充质干细胞,第3代细胞以含2-巯基乙醇的分化培养基培养,应用RT-PCR和流式细胞仪从mRNA和蛋白水平检测Flk1阳性细胞分化水平。结果:脐带华通胶间... 目的:诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化。方法:胶原酶法分离培养脐带华通胶间充质干细胞,第3代细胞以含2-巯基乙醇的分化培养基培养,应用RT-PCR和流式细胞仪从mRNA和蛋白水平检测Flk1阳性细胞分化水平。结果:脐带华通胶间充质干细胞Flk1mRNA及蛋白表达极低,分化培养基培养后表达上调,48h达高峰(P<0.05),之后表达降低。结论:2-巯基乙醇可诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化,为从中分选Flk1阳性细胞进行进一步研究提供了依据。 展开更多

关键词 脐带 华通胶 间充质干细胞 FLK1 心血管前体细胞 2-巯基乙醇

原文传递

可注射型华通胶光交联水凝胶用于组织工程软骨再生的实验研究

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作者 徐松山 赵少华 +3 位作者 菅炎鹏 刘伟杰 王一公 张伟 《组织工程与重建外科杂志》 2020年第5期345-350,共6页

目的探索可注射型华通胶光交联水凝胶用于构建组织工程软骨的可行性。方法制备可注射型华通胶光交联水凝胶载体材料,检测其流变特性及溶胀率;随后取兔耳软骨细胞与该水凝胶均匀混合后体外培养,验证其细胞相容性;最后将软骨细胞-华通胶... 目的探索可注射型华通胶光交联水凝胶用于构建组织工程软骨的可行性。方法制备可注射型华通胶光交联水凝胶载体材料,检测其流变特性及溶胀率;随后取兔耳软骨细胞与该水凝胶均匀混合后体外培养,验证其细胞相容性;最后将软骨细胞-华通胶光交联水凝胶复合物植入裸鼠皮下培养2周和6周,行大体和组织学观察、生物力学及生物化学定量检测。结果华通胶光交联水凝胶具有适宜的流变特性及良好的细胞相容性,最高溶胀率约为1.2。体内培养2~6周,逐渐形成富有弹性的瓷白色成熟软骨样组织,组织学(HE,Safranin-O及Ⅱ型胶原免疫组化染色)显示可逐渐形成典型的软骨特征,包括丰富的陷窝和均匀的软骨特异性基质沉积。生物力学和生物化学检测显示,随着体内培养时间由2周延长至6周,新生软骨组织逐渐成熟至与正常软骨组织相似。结论可注射型华通胶光交联水凝胶适合用于构建组织工程软骨。 展开更多

关键词 华通胶 组织工程 软骨再生 光交联 水凝胶

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华通胶间充质干细胞低温保存后生物学特性研究

14

作者 沈建良 宫立众 +6 位作者 岑坚 刘毅 王立新 尹文杰 赵德峰 马巍娜 黄友章 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期181-187,共7页

本研究旨在探讨低温保存对华通胶间充质干细胞(WJ-MSC)生物学特性的影响,为低温保存后WJ-MSC的临床应用及建立WJ-MSC库提供实验依据。通过脐带组织块培养制备WJ-MSC,将第5代WJ-MSC加入低温保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存。细胞复温后行... 本研究旨在探讨低温保存对华通胶间充质干细胞(WJ-MSC)生物学特性的影响,为低温保存后WJ-MSC的临床应用及建立WJ-MSC库提供实验依据。通过脐带组织块培养制备WJ-MSC,将第5代WJ-MSC加入低温保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存。细胞复温后行培养和传代,低温保存组第1代(PP1)传代获得PP2-PP15。非低温保存组第6代为对照组第1代(CP1),传代获得CP2-CP15。比较对照组与低温保存组WJ-MSC的有核细胞回收率、台盼蓝拒染率、CCK-8活性、凋亡率、贴壁率、增殖指数、细胞表面抗原、细胞周期和向脂肪细胞、成骨细胞及神经元细胞诱导分化能力。结果表明,WJ-MSC经低温保存,有核细胞回收率为98.2%,台盼蓝拒染率为94.3%,CCK-8活性为91.4%,凋亡率为3.9%,贴壁率为92.6%;PP1较CP1增殖指数明显降低(P<0.05),PP2-PP15与相应对照组增殖指数的差异均无统计学显著性;WJ-MSC高表达CD29、CD90、CD44、CD71、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC,低表达CD34、CD45和HLA-DR,两组之间差异均无统计学显著性;增殖潜伏期和对数增殖期两组之间差异也无统计学意义;向脂肪细胞、成骨细胞和神经元细胞诱导分化后分别进行油红O、碱性磷酸酶(ALP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色,两组间阳性强度肉眼观察无明显差异;细胞内甘油三酯、ALP和NSE含量两组间也无显著差异。结论:WJ-MSC低温保存后少量细胞(<10%)受到损伤,传代培养表明其生物学特性基本保持不变。 展开更多

关键词 华通胶 间充质干细胞 低温保存 生物学特性

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接触式细胞共培养诱导人脐带华通胶间充质干细胞向类髓核细胞分化 被引量：6

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作者 张燕 阮狄克 +6 位作者 张超 王德利 李海峰 吴剑宏 刘玥 王超峰 何勍 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期936-942,共7页

目的:观察接触式细胞共培养条件下,人髓核细胞对脐带华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)的诱导分化效应,为椎间盘退变性疾病的治疗寻找种子细胞来源。方法:取足月产健康新生儿脐带约30cm,分... 目的:观察接触式细胞共培养条件下,人髓核细胞对脐带华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)的诱导分化效应,为椎间盘退变性疾病的治疗寻找种子细胞来源。方法:取足月产健康新生儿脐带约30cm,分离、纯化、培养WJMSCs;取人椎间盘髓核组织,酶消化法分离培养髓核细胞。取第三代稳定增殖的WJMSCs,利用流式细胞方法检测细胞免疫表型CD73/CD90/CD105/CD34/CD45/HLA-ABC/HLA-DR。用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记WJMSCs,与髓核细胞以1∶1比例进行混合,在6孔板中进行接触式细胞共培养;以单独培养的WJMSCs为对照组。培养7d后利用高速流式细胞仪分选荧光标记阳性的WJMSCs,提取细胞总RNA,进行反转录获得cDNA,利用Real-Time PCR方法检测其Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅵ型胶原、蛋白多糖、SOX-9和多能聚糖基因的相对表达,管家基因GAPDH作为内参,单独培养的WJMSCs作为对照,利用2-ΔΔCt方法计算基因相对表达变化。结果:WJMSCs原代细胞接种24h可见部分细胞贴壁生长,形态为梭形和多角形,1周后形成集落,2周时细胞融合达到90%。流式细胞检测结果显示CD73/CD90/CD105/和HLA-ABC(+),CD34/CD45和HLA-DR(-)。与髓核细胞共培养7d后WJMSCs的Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9基因相对表达较对照组显著性增加(P<0.01),Ⅰ型胶原、Ⅵ型胶原和多能聚糖基因相对表达未见显著性变化(P>0.05)。结论:通过接触式细胞共培养人脐带WJMSCs能够被髓核细胞诱导分化为类髓核细胞,可为组织工程技术和细胞治疗修复退变椎间盘提供种子细胞来源。 展开更多

关键词 华通胶间充质干细胞 共培养 诱导分化 髓核细胞

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不同消化方式对脐带华通胶间充质干细胞提取的影响 被引量：5

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作者 张宁坤 陈宇 +6 位作者 高连如 王丽华 庄恒成 李俊凤 刘丽娟 王志国 杨晔 《临床军医杂志》 CAS 2011年第2期342-345,404,共4页

目的探讨使用不同酶浓度、消化不同时间及不同浓度胎牛血清的培养基稀释对消化脐带华通胶后提取培养间充质干细胞的影响。方法无菌条件下取出正常剖腹产胎儿脐带,剔除动脉、静脉及外膜,取其之间的胶状物,剪成1 mm3及更小的块状,分别加入... 目的探讨使用不同酶浓度、消化不同时间及不同浓度胎牛血清的培养基稀释对消化脐带华通胶后提取培养间充质干细胞的影响。方法无菌条件下取出正常剖腹产胎儿脐带,剔除动脉、静脉及外膜,取其之间的胶状物,剪成1 mm3及更小的块状,分别加入0.1%和0.2%的Ⅱ型胶原酶,分为A、B两组,37℃水浴消化。每一组消化时间分别为4、81、2、16、202、4、28、323、6、40 h共10个消化时间点,每一个消化时间点又分为两组,分别为A1、A2组和B1、B2组。消化后的黏稠细胞悬液用完全DMEM稀释,并加入特级胎牛血清至浓度为10%(A1、B1)和20%(A2、B2),充分混匀。悬液移至75 cm2培养瓶,15 ml/瓶,37℃、5%CO2、饱和湿度培养,3 d换液。通过细胞计数观察原代细胞贴壁生长的最早时间和80%细胞铺满瓶底的时间和生长活力。结果 0.2%的Ⅱ型胶原酶消化脐带华通胶在消化时间为20h,且稀释血清浓度为20%时,获得的细胞悬液在培养36 h即有细胞贴壁,培养6 d细胞贴壁达到80%,其余各组细胞生长情况各不相等,均弱于此组。其中消化时间在8 h以内和32 h以上时不论使用多少的酶浓度和稀释时使用多少的血清浓度,细胞均不生长。结论在使用胶原酶消化脐带华通胶提取间充质干细胞的过程中,使用0.2%Ⅱ型胶原酶、消化16～24 h、稀释培养时加入至20%的血清对干细胞的提取效果最佳。 展开更多

关键词 胶原酶 脐带华通胶 间充质干细胞 提取

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脐带华通胶间充质干细胞移植对退变椎间盘影响的实验研究 被引量：4

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作者 张燕 陶晖 +5 位作者 顾韬 李欢迎 李海峰 吴剑宏 何勍 阮狄克 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期750-756,共7页

目的:探讨人华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)移植对犬退变椎间盘的影响。方法:从新生儿脐带中提取WJMSCs,取增殖良好的第3代细胞,用含有绿色荧光蛋白的腺相关病毒(r AAV2-EGFP)感染标记细... 目的:探讨人华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)移植对犬退变椎间盘的影响。方法:从新生儿脐带中提取WJMSCs,取增殖良好的第3代细胞,用含有绿色荧光蛋白的腺相关病毒(r AAV2-EGFP)感染标记细胞。选择20只健康成年比格犬作为实验动物,使用穿刺抽吸髓核组织法建立椎间盘退变模型(L4/5、L5/6、L6/7)。4周后将犬各节段椎间盘进行分组:L3/4为对照组(A组);L4/5为退变组(B组);L5/6为注射组(C组),注射生理盐水;L6/7为移植组(D组),移植绿色荧光蛋白标记的WJMSCs细胞悬液。造模术前、术后4、8、12、24周行腰椎X线及MRI检查。24周后处死动物取材进行冰冻切片荧光、HE染色及番红O染色等组织学检测,提取髓核组织总RNA,反转录后行Real Time PCR检测,观察蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX-9及Ⅰ型胶原基因表达变化。结果:分离培养的WJMSCs贴壁生长,呈梭形形态,r AAV2-EGFP病毒感染后第3天表达绿色荧光。影像学检查结果显示各组椎间盘高度指数及相对灰度指数在造模术前、术后第4周无统计学差异,术后8、12、24周,D组椎间盘相对高度指数及相对灰度指数较B、C组高(P<0.05),比A组低(P<0.05)。术后24周,D组髓核组织冰冻切片内能够检测到GFP阳性的WJMSC细胞,HE染色显示D组髓核组织退变比B组和C组轻,番红O染色结果显示D组染色较B组和C组深,基因表达检测结果显示D组Ⅱ型胶原、蛋白多糖及SOX-9基因表达比B、C组高(P<0.05),但比A组低(P<0.05)。结论:人WJMSCs移植入犬退变椎间盘内能够存活,促进椎间盘细胞外基质Ⅱ型胶原及蛋白多糖合成,维持椎间盘高度及髓核含水量,能够有效延缓椎间盘退变进展。 展开更多

关键词 华通胶间充质干细胞 细胞移植 椎间盘退变 动物实验

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人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展 被引量：3

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作者 何蓓 杨晓清 张玉泉 《国际妇产科学杂志》 CAS 2016年第1期94-98,共5页

人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell,h WJMSC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的成体干细胞。由于其取自分娩过程中的废弃物——脐带,因此来源广泛、取材方便、不受任何... 人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell,h WJMSC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的成体干细胞。由于其取自分娩过程中的废弃物——脐带,因此来源广泛、取材方便、不受任何伦理学限制,同时相对其他来源的成体干细胞例如骨髓间充质干细胞,h WJ-MSC免疫原性更弱、增殖能力更强、干细胞性能更加原始,使其成为一种新型的细胞来源,广泛应用于各种疾病模型的细胞移植以及基因治疗。综述新近研究的h WJ-MSC的生物学性状、增殖分化潜能、免疫性能以及其在各类疾病中的应用进展。 展开更多

关键词 干细胞 间质干细胞 脐带 治疗 人脐带华通胶间充质干细胞

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人脐带华通胶间充质干细胞的分离培养及标记方法研究 被引量：2

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作者 韩华 李洁 +1 位作者 薛改 张俊勤 《医疗卫生装备》 CAS 2016年第12期28-31,共4页

目的 :探讨从人脐带华通胶中分离培养间充质干细胞的方法,并对细胞进行标记,为细胞移植奠定基础。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带华通胶间充质干细胞并进行传代,观察细胞的形态学特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞免... 目的 :探讨从人脐带华通胶中分离培养间充质干细胞的方法,并对细胞进行标记,为细胞移植奠定基础。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带华通胶间充质干细胞并进行传代,观察细胞的形态学特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞免疫表型;用荧光染料PKH26对获取的细胞进行体外标记,观察标记细胞形态并记录其生长曲线。结果:组织块贴壁法可以成功地从人脐带华通胶中培养出间充质干细胞,并且在连续增殖传代过程中细胞形态未发生明显变化,细胞生长曲线相似;细胞能够高表达基质细胞抗原(CD29、CD90、CD44、CD105),而低表达造血干细胞抗原(CD34、CD45)和白细胞相关抗原(HLA-DR);PKH26可以标记脐带间充质干细胞,显示红色荧光,且标记细胞形态良好,与未标记细胞的生长曲线相似。结论:组织块贴壁法是一种简便有效的分离脐带间充质干细胞的方法;应用PKH26体外标记细胞成功率高、技术稳定。 展开更多

关键词 脐带华通胶 间充质干细胞 细胞培养 细胞标记 细胞移植

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电穿孔法转染脐带华通胶间充质干细胞的最佳条件 被引量：1

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作者 王泽 李春花 +2 位作者 张宁坤 高连如 陈宇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第17期2717-2721,共5页

背景:脐带华通胶间充质干细胞是目前较为原始的干细胞,为当前干细胞的研究热点之一,是基因治疗的理想载体。然而,目前尚未有对脐带华通胶间充质干细胞电转染条件的研究,因此探索脐带华通胶间充质干细胞的电转染最佳条件占据重要地位。目... 背景:脐带华通胶间充质干细胞是目前较为原始的干细胞,为当前干细胞的研究热点之一,是基因治疗的理想载体。然而,目前尚未有对脐带华通胶间充质干细胞电转染条件的研究,因此探索脐带华通胶间充质干细胞的电转染最佳条件占据重要地位。目的:探讨不同电穿孔条件对脐带华通胶间充质干细胞转染率的影响,以确定最佳电转染条件。方法:通过控制电压、脉冲时长及细胞状态等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒EEV-EGFP转入脐带华通胶间充质干细胞,流式细胞仪检测转染率。结果与结论:(1)电压自125 V至150 V,转染率呈现递增趋势,150 V时获得最大转染率,但将电压进一步调高至170 V,转染率开始显著降低;(2)脉冲时长为5.0 ms时获得最大转染率;脉冲时长为2.5 ms和7.5 ms时转染效率均有所降低;(3)与低氧培养比较,正常培养的细胞转染率更高;(4)结果表明,正常培养的脐带华通胶间充质干细胞在电压150 V、脉冲时长5.0 ms、脉冲间隔时间50 ms、脉冲数2次时可达到较高的电转染率。 展开更多

关键词 脐带 间质干细胞 转染 组织工程 电穿孔 电转染 华通胶间充质干细胞 华通胶 低氧培养 干细胞 国家自然科学基金

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