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基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫方法研究 被引量：1
1
作者 梁家瑞 徐斌 +3 位作者 胡薇 李梦茹 杨硕 郑彬 《中国热带医学》 CAS 2023年第7期681-685,共5页
目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法,并评价其效能,为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑。方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及... 目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法,并评价其效能,为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑。方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及探针并进行筛选,建立荧光RPA检测方法。将美洲钩虫卵基因组DNA稀释至100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL、0.1 fg/μL等7个浓度梯度以测定荧光RPA法的最低检出值,利用荧光RPA法检测日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫DNA样本进行交叉反应实验。采集44例人粪样并进行DNA提取,运用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz)、半巢式PCR法、荧光RPA法同时检测,评价荧光RPA法的灵敏度和特异度。结果 建立的荧光RPA法可在20 min内特异性扩增出美洲钩虫cox1基因长度为194 bp的片段,最低检出值为10 fg/μL,与日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫均无交叉反应。通过对44份人粪便样本进行检测,Kato-Katz法和半巢式PCR法均检出26例阳性样本,荧光RPA法检出27例阳性样本,其中1号样本荧光曲线在反应后期略高于阴性对照,但未出现与阳性对照相似反应趋势,因此判定为疑似阴性样本。荧光RPA法与Kato-Katz法和半巢式PCR法相比,其灵敏度均为100.00%,特异度均为94.44%,检测结果一致性较好(Kappa=0.953>0.75)。结论 荧光RPA法可在短时间内实现对美洲钩虫高效、敏感、特异的检测,有望应用于美洲钩虫感染的监测及预警。 展开更多
关键词 美洲钩虫 重组酶聚合酶扩增技术 cox1基因 改良加藤厚涂片法 半巢式pcr法
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外套细胞淋巴瘤bcl-1基因重排的分析 被引量：2
2
作者 孙文佶 林茂芳 Reza Parwaresch 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期200-202,共3页
关键词 外套细胞淋巴瘤 bcl-1基因 基因重排 主要易位簇 半巢式pcr法
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