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题名半夏凝集素基因的克隆及转基因烟草对蚜虫的抑制作用
被引量：8
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作者
张正英
令利军
王红梅
李淑洁
李静雯
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机构
甘肃省农业科学院科研处
甘肃省农业科学院生物技术研究所
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出处
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期21-25,共5页
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基金
甘肃省科学事业费项目(QS031-C31-15)
甘肃省科技攻关项目(GS035-A41-001-03)
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文摘
采用同源序列克隆方法，通过设计特异性引物从甘肃西和半夏叶片基因组DNA中克隆到1条1069bp的半夏凝集素基因pta，与以同科内植物的mRNA为模板扩增得到的凝集素基因序列的同源性很高，达到98％以上，功能区完整，具有1条信号肽和3个甘露糖结合区，GenBank登录号AY725425。用该基因替换pBI121载体的GUS基因，正向插入35S启动子之下，构建了植物表达载体pBI—pta。通过农杆菌介导法转化烟草，从20株Kan抗性植株中得到PCR检测阳性植株14株，证明pta已整合到烟草基因组中。对随机挑取的7株PCR阳性植株进行了抗蚜虫（Myzus persicae）筛选试验，结果表明：不同株系蚜口密度抑制率在22．5％～89．4％，平均蚜口密度抑制率56．2％。
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关键词
同源克隆
半夏凝集素基因(pta)
表达载体构建
蚜虫抗性
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Keywords
homology-based cloning
Pinellia ternata agglutinin gene （pta）
expression vector
resistance to aphid
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分类号
S435.72
[农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名含双边界序列植物双价表达载体的构建
被引量：2
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作者
孔维文
邓仲香
王倩
唐克轩
张健
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机构
复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室
上海交通大学农业与生物学院植物生物技术研究中心
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出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2005年第6期801-806,共6页
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基金
国家十五863计划项目(2005AA212101)资助。
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文摘
转基因植物的安全性是基因工程改良作物的一个重要问题。构建含双边界序列(双T-DNA区)载体,将选择标记基因和目标外源基因分开在不同的T-DNA区,通过转基因植株有性杂交及后代分离,可在转基因后代中获得无选择标记的转基因安全植株。将2个外源基因置于同一载体上,可以提高其共转化的效率。本研究构建了1个中间载体pAHC17-PTA和1个含双边界序列的植物双价表达载体pDB13PS。pAHC17-PTA含有由Ubiquitin启动子引导的具有抗虫效果的半夏凝集素基因(PTA)。pDB13PS含2个独立的T-DNA区,在其中一个T-DNA区,含两个目的基因的完整的表达盒,一个是由Ubiquitin启动子引导的半夏凝集素基因(PTA),另一个是由水稻胚乳特异表达启动子(Glutelin-B1promoter)驱动的马铃薯高赖氨酸蛋白基因的cDNA(SB401)。pDB13PS的成功构建,为提高PTA和SB401的共转化效率和获得无选择标记的转基因后代植株奠定了基础。
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关键词
共转化
无选择标记
半夏凝集素基因(pta)
马铃薯高赖氨酸蛋白基因(SB401)
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Keywords
Co-transformation, Marker-free, Pinellia temata agglutinin gene （pta）, POTA TO LYSINE-RICHgene （SB401）
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分类号
Q943.2
[生物学—植物学]
Q782
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