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题名热敏型核酸酶在毕赤酵母中的分泌表达及催化特性
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作者
陈芳霞
陈鹏
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机构
西北农林科技大学生命科学学院
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期991-995,共5页
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基金
国家自然科学基金(Nos.30400282
31171606)
西北农林科技大学基本科研业务费(No.2452015214)资助~~
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文摘
核酸酶在生物工程领域有着重要的应用价值。本研究在优化北极虾核酸酶(Shrimp nuclease,SNU)基因序列的基础上,构建SNU的毕赤酵母分泌表达载体SNU-p PICZαA并转化酵母,以高拷贝整合转化子为基础,优化酶表达的条件,并对该酶的催化特性进行分析,结果显示SNU可在毕赤酵母SMD1168H中高效分泌表达,最佳诱导表达条件为:培养基BMMY p H 6.0,甲醇浓度为1%,诱导时间为72 h,诱导后粗酶液比活力为1.4×10~5 U/m L。经过DEAE Sephadex阴离子交换层析可纯化获得高纯度的目标蛋白,每升菌液可纯化15 mg目标蛋白,比活力达到6.291×10~6 U/mg,该酶表观分子量为50 k Da,PNGase F酶切证实该酶存在糖基化现象。二价金属离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)及还原剂DTT、β-ME能显著地提高其水解活性,但Zn^(2+)、Cu^(2+)、SDS、高浓度Na Cl抑制该酶的活性,SNU为Ca^(2+)/Mg^(2+)依赖型核酸酶。70℃处理10 min可使该酶不可逆的失活。
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关键词
北极虾ca2+/mg2+依赖型核酸酶
毕赤酵母
分泌表达优化
催化特性
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Keywords
Northern Shrimp mg2＋/ca2＋-independent nuclease
Pichia pastoris
secretory expression optimization
catalytic characteristics
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分类号
Q55
[生物学—生物化学]
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