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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究 被引量：5
1
作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期921-931,共11页
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较... 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。 展开更多
关键词 猪 化学辅助去核 脱羰秋水酰碱 手工体细胞核移植
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卵母细胞去核方法在动物体细胞核移植中的应用研究 被引量：3
2
作者 沙伟 刘赫 刘娣 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第1期58-63,共6页
受体卵母细胞去核是核移植过程中至关重要的一步,几种去核方法已在核移植技术中得到应用。为了达到完全去核的目的,荧光染料和紫外光被应用在去核方法中,但同时也带给母源胞质负面影响。末期和化学辅助去核也得到应用,但不同的方法对受... 受体卵母细胞去核是核移植过程中至关重要的一步,几种去核方法已在核移植技术中得到应用。为了达到完全去核的目的,荧光染料和紫外光被应用在去核方法中,但同时也带给母源胞质负面影响。末期和化学辅助去核也得到应用,但不同的方法对受体卵母细胞的影响不同,导致不同的后期胚胎发育结果和不同的克隆效率。作者综述了不同的卵母细胞去核方法在动物克隆中的效率及它们各自的优势和缺陷。 展开更多
关键词 化学辅助去核 盲吸法 Hoechst染色
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化学辅助去核法对绵羊卵母细胞去核率和重构胚发育率的影响 被引量：3
3
作者 潘晓燕 王正朝 +4 位作者 李质馨 金玉姬 窦肇华 郭志勤 王锋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期503-508,共6页
为提高绵羊体细胞核移植的效率,本研究采用一种新的去核方法—化学辅助去核法,对绵羊体外成熟的卵母细胞进行去核,研究了化学诱导剂秋水仙素的处理浓度、作用时间、卵母细胞的成熟时间对去核效果及重构胚发育的影响。结果表明:1)卵母细... 为提高绵羊体细胞核移植的效率,本研究采用一种新的去核方法—化学辅助去核法,对绵羊体外成熟的卵母细胞进行去核,研究了化学诱导剂秋水仙素的处理浓度、作用时间、卵母细胞的成熟时间对去核效果及重构胚发育的影响。结果表明:1)卵母细胞在0.4μg/mL的秋水仙素溶液中分别孵育0.5h和1h,胞质突起率和去核率没有显著的差异,突起率可高达85.4%,去核率达到100%;2)0.2μg/mL或0.4μg/mL秋水仙素溶液将卵母细胞处理0.5h,对去核效果没有显著影响;3)对于体外成熟18～23h的卵母细胞,随着成熟时间的延长,盲吸法的去核率降低,但没有影响秋水仙素诱导胞质突起的比率和去核率;4)两种去核方法对重构胚的发育没有产生显著影响,但成熟21～23h卵母细胞重构胚囊胚的发育率显著高于成熟18～20h卵母细胞重构胚囊胚的发育率。综上所述,本试验优化了绵羊卵母细胞化学辅助的去核程序,利用化学辅助去核法对高卵龄的绵羊卵母细胞进行去核,提高了去核率和重构胚的体外发育率。 展开更多
关键词 秋水仙素 卵母细胞 化学辅助去核 重构胚
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化学辅助去核法对延边黄牛卵母细胞去核率及其重构胚发育率的影响 被引量：1
4
作者 王玉涵 朱玉霞 +2 位作者 尹多 李钟淑 方南洙 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期340-344,共5页
为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法——化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demecolcine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况。试验研究了Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵... 为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法——化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demecolcine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况。试验研究了Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响。结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法。化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率。 展开更多
关键词 延边黄牛 核移植 脱羰秋水仙碱 化学辅助去核
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不同受体胞质对延边黄牛体细胞核移植效率的影响 被引量：1
5
作者 朱玉霞 王玉涵 +1 位作者 李钟淑 方南洙 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期286-288,共3页
为确定延边黄牛体细胞核移植过程中卵母细胞的最佳去核时期,本试验选取体外成熟22 h的中期(MⅡ期)卵母细胞与体外成熟28 h的末期(TⅡ期)卵母细胞进行化学辅助去核操作,并将去核的卵母细胞作为受体构建重构胚,后期观察发育情况。结果显... 为确定延边黄牛体细胞核移植过程中卵母细胞的最佳去核时期,本试验选取体外成熟22 h的中期(MⅡ期)卵母细胞与体外成熟28 h的末期(TⅡ期)卵母细胞进行化学辅助去核操作,并将去核的卵母细胞作为受体构建重构胚,后期观察发育情况。结果显示,M期卵母细胞的显核率与TⅡ期卵母细胞的显核率无显著差异;但是TⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率均显著高于MⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率。综上所述,卵母细胞体外成熟28 h后的TⅡ期可作为延边黄牛核移植去核操作的理想时期,在TⅡ期卵母细胞中选择化学辅助去核法去核能够提高延边黄牛体细胞克隆的效率。 展开更多
关键词 体外成熟 MⅡ期 TⅡ期 化学辅助去核 延边黄牛
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秋水仙胺诱导牛卵母细胞显核的研究
6
作者 王士勇 杨月春 +3 位作者 郑军军 刘宗岳 方大雨 杨福合 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第11期228-230,共3页
为了观察秋水仙胺（demecolcine，DEME）诱导牛卵母细胞的显核效果，从吉林省长春市某屠宰场收集牛卵巢后采用抽吸法获取卵泡液，在体视显微镜下选择卵丘完整、胞质均匀的卵丘－卵母细胞复合体（COCs），微滴法体外成熟（in vitro matur... 为了观察秋水仙胺（demecolcine，DEME）诱导牛卵母细胞的显核效果，从吉林省长春市某屠宰场收集牛卵巢后采用抽吸法获取卵泡液，在体视显微镜下选择卵丘完整、胞质均匀的卵丘－卵母细胞复合体（COCs），微滴法体外成熟（in vitro mature，IVM）培养19～22 h，在0．3％透明质酸酶中旋涡振荡去除卵母细胞周围的卵丘细胞，挑选排出第一极体的卵母细胞随机分组，分别进行DEME浓度和作用时间诱导牛卵母细胞显核的研究。结果表明，DEME处理60、90、120 min组间显核率差异不显著（P＞0．05），但是60、120 min组的显核率显著高于DEME处理30 min 组（P＜0．05）。当DEME浓度为0．5μg／mL 时，显核率最高，为78．9％，显著高于0．3、0．4μg／mL 组（P＜0．05），但是与0．6μg／mL 组差异不显著（P＞0．05）。牛的COCs经IVM培养19、20、21、22 h，结果发现培养22 h组显核率最高，显著高于培养19 h组（P＜0．05），但是与培养20、21 h组差异不显著（P＞0.05）。可见牛卵母细胞经IVM培养20～22 h后，用0．5μg／mL DEME处理60 min可以有效诱导其显核。 展开更多
关键词 地美可辛 牛 卵母细胞 体外成熟 化学辅助去核
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Demecolcine化学辅助去核技术在牛体细胞核移植中的初步研究
7
作者 沙伟 郭振华 +5 位作者 刘赫 殷志明 马红 李仲秋 吴赛辉 刘娣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-91,共5页
研究demecolcine辅助去核后的牛卵母细胞能否支持牛的核移植胚胎的发育。通过化学药物demecolcine处理牛MII期卵母细胞后,借助显微操作去除牛卵母细胞核,并将去核的卵母细胞作为受体,构建重构胚后观察发育情况。实验结果显示,demecolcin... 研究demecolcine辅助去核后的牛卵母细胞能否支持牛的核移植胚胎的发育。通过化学药物demecolcine处理牛MII期卵母细胞后,借助显微操作去除牛卵母细胞核,并将去核的卵母细胞作为受体,构建重构胚后观察发育情况。实验结果显示,demecolcine处理后牛卵母细胞质膜有明显一个或二个突起,且突起内含有卵母细胞染色体,demecolcine辅助牛卵母细胞去核效果较好(57.89%～73.3%),处理时间以1h为宜,去核率可达73.3%。对demecolcine辅助去核后获得的核移植胚胎发育情况显示,囊胚发育率较盲吸法去核核移植胚胎较好(12.5%vs 10.2%),但二者差异不显著(p>0.05)。Demecolcine辅助处理去核技术能有效去除牛卵母细胞核,且去核后的卵母细胞能够支持核移植胚胎的发育。 展开更多
关键词 秋水仙素 化学辅助去核 整细胞注入 体细胞核移植
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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究
8
作者 王士勇 郑军军 +3 位作者 杨月春 刘宗岳 于淼 杨福合 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1381-1386,共6页
本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和... 本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline microin—jection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break—membrane-cell intracytoplasmic microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-cell intracytoplasmic microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,3种去核方法的去核率差异显著(P<0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0%和94.8%,注核时间分别为31.0和35.1 s,显著低于BMCIM法(P<0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P>0.05)。结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。 展开更多
关键词 异种体细胞核移植 盲吸法 挤压法 Demecolcine化学辅助去核 带下注核 胞质内注射
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