CoCl2化学模拟肝癌体外缺氧模型的建立及对HIF-1α、VEGF基因的影响 被引量：8

1

作者 翁苓苓 高玲 张闽光 《肝脏》 2019年第9期1049-1052,共4页

目的观察不同浓度的氯化钴(CoCl 2)对人肝癌细胞生长及及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法通过不同浓度(0~800μmol/L)CoCl 2处理不同肝癌细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)24 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞... 目的观察不同浓度的氯化钴(CoCl 2)对人肝癌细胞生长及及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法通过不同浓度(0~800μmol/L)CoCl 2处理不同肝癌细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)24 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;选取100、200、300、400μmol/L CoCl 2作用不同肝癌细胞系0、12、24、48、72 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;确定最佳诱导浓度200μmol/L后,分别于0、6、8、12、24 h应用Real-time PCR检测VEGF mRNA的转录;确定好最佳诱导时间,采用Western-blot方法检测评估100、200、300、400μmol/L CoCl 2作用不同肝癌细胞系24 h后表达HIF-1α蛋白情况。结果CoCl 2浓度在200μmol/L以内对人肝癌细胞株的生长无明显的抑制作用,当浓度大于200μmol/L、诱导时间大于24 h后明显抑制细胞生长,且抑制作用随着浓度的增加而增强(P<0.05)。200μmol/L CoCl 2刺激四种肝癌细胞0、6、8、12、24 h时VEGF mRNA转录递增。200μmol/L CoCl 2刺激细胞24 h时,能诱导并稳定维持四种肝癌细胞HIF-1α蛋白表达。结论CoCl 2诱导肝癌细胞化学性缺氧的最佳浓度为200μmol/L,此时最佳时间为24 h。 展开更多

关键词 氯化钴 化学缺氧 缺氧诱导因子-1α 肝癌

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氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制 被引量：8

2

作者 王国红 毕凌云 +3 位作者 李超堃 侯软玲 尹雅玲 李东亮 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期557-562,共6页

目的研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制。方法不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测... 目的研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制。方法不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化。结果 CoCl2(50～1 000μmol.L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化。MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P<0.05)。Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P<0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多。细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期。结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关。 展开更多

关键词 氯化钴 诱导 化学缺氧 N9小胶质细胞 细胞损伤 模型

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姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应 被引量：5

3

作者 胡晨 汪玉馨 孟长虹 《药物评价研究》 CAS 2018年第11期1989-1993,共5页

目的研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法100μmol/L CoCl_2处理U87细胞不同时间(1、3、6、12、24 h),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白... 目的研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法100μmol/L CoCl_2处理U87细胞不同时间(1、3、6、12、24 h),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达变化。100μmol/L CoCl_2处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10μmol/L姜黄素处理,对照组(不添加CoCl_2)和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果CoCl_2上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10μmol/L浓度组差异显著(P<0.05);显著下调p65的磷酸化水平(P<0.05);导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加(P<0.05)。结论姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。 展开更多

关键词 姜黄素 CoCl2 化学缺氧 星形胶质细胞 炎症细胞因子 NF-ΚB

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缺氧对脐静脉内皮细胞损伤及可溶性血管内皮生长因子受体-1 mRNA表达的影响 被引量：5

4

作者 蔡海瑞 刘海意 +2 位作者 乔福元 龚洵 周琼 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2009年第11期1559-1561,共3页

目的:探讨二氯化钴(CoCl2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells)损伤和血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1)mRNA表达的影响。方法:采用MTT检测... 目的:探讨二氯化钴(CoCl2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells)损伤和血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1)mRNA表达的影响。方法:采用MTT检测缺氧时人脐静脉内皮细胞的增殖情况,检测上清中LDH量反映脐静脉内皮细胞损伤程度,RT-PCR检测sFlt-1 mRNA表达水平,观察缺氧时间与三者之间的相关关系。结果:CoCl2可诱导脐静脉细胞中sFlt-1 mRNA的表达,导致细胞损伤,降低细胞活性,三者与缺氧时间呈依赖性。结论:缺氧损伤的脐静脉内皮细胞,细胞增殖能力下降,sFlt-1 mRNA表达增加,可能促进妊娠期高血压疾病的发病。 展开更多

关键词 二氯化钴 化学缺氧 可溶性血管内皮生长因子受体-1 人脐静脉内皮细胞 妊娠期高血压疾病

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神经细胞化学缺氧预处理模型的建立 被引量：1

5

作者 孙胜 高文祥 +1 位作者 廖卫公 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第21期2100-2101,共2页

目的建立体外培养神经细胞的化学缺氧预处理实验模型。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧组、化学缺氧预处理组。用MTT法筛选合适的化学缺氧预处理和化学缺氧浓度。然后,分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧组(250μmol... 目的建立体外培养神经细胞的化学缺氧预处理实验模型。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧组、化学缺氧预处理组。用MTT法筛选合适的化学缺氧预处理和化学缺氧浓度。然后,分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧组(250μmol/LCoCl2,24h)、化学缺氧预处理组(75μmol/LCoCl2,1.5h,常氧3h后,250μmol/LCoCl2,24h)。实验终点测乳酸脱氢酶释放率,并用MTT法检测细胞活力,以此来评价化学预缺氧对神经细胞化学缺氧的保护作用。结果化学缺氧预处理组细胞较化学缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少,说明用CoCl2化学预缺氧可保护神经细胞对化学缺氧产生耐受。结论建立了简单易行、重复性好,可进一步应用于阐明缺氧预处理保护机制的神经细胞化学缺氧预处理实验模型。 展开更多

关键词 缺氧预处理 化学缺氧 实验模型 人神经母细胞瘤

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缺氧对hBMSCs和胎盘来源MSCs增殖的影响 被引量：3

6

作者 王佳 陈晓禾 +3 位作者 黄永灿 李秀群 张珏 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-139,共4页

目的比较hBMSCs和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental decidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据。方法采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs与hPDB-MSCs,流式细胞仪检测细胞表... 目的比较hBMSCs和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental decidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据。方法采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs与hPDB-MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物;CoCl2建立化学缺氧模型,MTT法检测两种细胞在不同CoC12浓度(0、50、75、100、125、150、175、200μmol/L)和不同时间(6、12、24、48、72和96 h)的增殖情况。结果流式细胞仪检测显示hPDB-MSCs与hBMSCs均表达CD9、CD29、CD44、CD105、CD106、人类白细胞抗原ABC(human leucocyte antigen ABC,HLA-ABC),不表达CD34、CD40L和HLA-DR;但与hBMSCs相比,hPDB-MSCs阶段特异表达的胚胎抗原1(stage-specifi c embryonic antigen 1,SSEA-1)、SSEA-3、SSEA-4、肿瘤排斥抗原(tumor rejection autigen,TRA)-1-60、TRA-1-81表达更高。化学缺氧12 h内,hBMSCs与hPDB-MSCs增殖均被抑制,12 h后均能促进增殖;与对照组比较,hBMSCs经150μmol/L CoCl2作用24 h出现显著增殖(P<0.05),hPDB-MSCs在75μmol/L CoCl2作用12 h后出现显著增殖(P<0.05)。结论与hBMSCs相比,hPDB-MSCs表达更高的胚胎干细胞特有表面抗原,同时对化学缺氧所致的增殖影响更为敏感,可能成为一种新的组织工程种子细胞来源。 展开更多

关键词 组织工程 种子细胞hBMSCs 胎盘来源MSCs 化学缺氧 细胞增殖

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氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究 被引量：1

7

作者 魏甲园 邾倩 +1 位作者 杨亚星 申明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2982-2992,共11页

旨在探究氯化钴(CoCl_(2))诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料,使用化学性低氧模型诱导剂CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl_(2)最适处理浓度,用200μmol&#... 旨在探究氯化钴(CoCl_(2))诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料,使用化学性低氧模型诱导剂CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl_(2)最适处理浓度,用200μmol·L^(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞12 h,将培养出的传代细胞分成4组处理,分别为:对照组、CoCl_(2)诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl_(2)联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h,CoCl_(2)诱导缺氧处理组给予终浓度200μmol·L^(-1) CoCl_(2)的培养基培养12 h,单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L^(-1)的GSH处理12 h,GSH+CoCl_(2)联合处理组加入200μmol·L^(-1) CoCl_(2)和2 mmol·L^(-1)的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性;采用双氯荧光素(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测ROS水平;Western blot检测γH2AX蛋白活性水平,采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl_(2)诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系,本试验在CoCl_(2)处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比,200μmol·L^(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞后,细胞增殖活力极显著降低(P<0.0001),缺氧组ROS水平极显著升高(P<0.0001),γH2AX蛋白表达极显著升高(P<0.0001),Oxo-8-G水平极显著升高(P<0.0001)。与缺氧组相比,在CoCl_(2)处理基础上添加GSH后,ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低(P<0.0001),并伴随细胞增殖活性的显著恢复(P<0.0001)。CoCl_(2)可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性,机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。 展开更多

关键词 氯化钴 化学缺氧 猪卵泡颗粒细胞 细胞增殖 DNA氧化损伤

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α-倒捻子素耐缺氧作用的初步研究 被引量：2

8

作者 王碧琼 《海峡药学》 2012年第1期30-32,共3页

目的研究α-倒捻子素对缺氧小鼠的作用。方法小鼠给予α-倒捻子素一定时间后,采用亚硝酸盐建立缺氧模型,考察小鼠的生存时间。结果α-倒捻子素高剂量条件下可以显著延长小鼠的生存时间。结论α-倒捻子素具有一定的耐化学缺氧作用,可以... 目的研究α-倒捻子素对缺氧小鼠的作用。方法小鼠给予α-倒捻子素一定时间后,采用亚硝酸盐建立缺氧模型,考察小鼠的生存时间。结果α-倒捻子素高剂量条件下可以显著延长小鼠的生存时间。结论α-倒捻子素具有一定的耐化学缺氧作用,可以用于缺氧、缺血性损伤的保护,具体作用机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 α-倒捻子素 亚硝酸盐 化学缺氧

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缺氧诱导因子1相关肽对化学缺氧引起的PC12细胞损伤的保护作用

9

作者 严虹 黄艳 +2 位作者 李华 潘金顺 王斌 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期429-432,共4页

目的:研究氯化钴模拟化学缺氧条件下,缺氧诱导因子1相关肽(BW8)对PC12细胞损伤的影响。方法:氯化钴模拟缺氧后,给予不同浓度BW8,观察细胞生存率的变化,并测定细胞内谷胱苷肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:BW8可以抑制氯化钴诱导... 目的:研究氯化钴模拟化学缺氧条件下,缺氧诱导因子1相关肽(BW8)对PC12细胞损伤的影响。方法:氯化钴模拟缺氧后,给予不同浓度BW8,观察细胞生存率的变化,并测定细胞内谷胱苷肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:BW8可以抑制氯化钴诱导的PC12细胞存活率下降,且作用呈浓度依赖性;用尼莫地平预处理的PC12细胞存活率也显著提高,BW8的作用程度与尼莫地平接近;用终浓度为125μmol·L^(-1)的氯化钴处理细胞,可以显著降低细胞内GSH含量及SOD活力,而BW8可以浓度依赖性升高SOD活力,明显提高GSH含量。结论:多肽BW8对于化学缺氧引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。 展开更多

关键词 相关肽 缺氧诱导因子1 化学缺氧 损伤 超氧化物歧化酶 谷胱苷肽 自由基

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低氧诱导因子l在PCI2细胞化学缺氧复氧损伤中的作用

10

作者 倪永兵 肖继皋 +7 位作者 张爱霞 王鹃 朱焰 王敏伟 刘铮 吴静生 邹颖 王斌 《中国药理通讯》 2003年第2期69-70,共2页

关键词 低氧诱导因子1 神经细胞 化学缺氧 复氧 乳酸脱氢酶 细胞超微结构

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PC12细胞化学缺氧复氧损伤与缺氧诱导因子1表达的关系(英文) 被引量：5

11

作者 王斌 倪永兵 +4 位作者 王娟 李华 严虹 戈应滨 肖继皋 《中国神经科学杂志》 CSCD 2004年第2期99-104,共6页

目的　研究缺氧诱导因子 1(HIF1)在PC12细胞化学缺氧复氧损伤中的作用。方法在培养液中加入和去除氯化钴模拟化学缺氧和复氧 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)漏出和细胞超微结构改变作为细胞损伤指标 ,观察化学缺氧和复氧后不同时间细胞损伤和HIF1... 目的　研究缺氧诱导因子 1(HIF1)在PC12细胞化学缺氧复氧损伤中的作用。方法在培养液中加入和去除氯化钴模拟化学缺氧和复氧 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)漏出和细胞超微结构改变作为细胞损伤指标 ,观察化学缺氧和复氧后不同时间细胞损伤和HIF1α蛋白变化。结果　 在氯化钴模拟化学缺氧实验中 ,LDH漏出明显增加 ,8h达高峰 ,随后逐渐下降 ,电镜结果与LDH改变相一致 ,HIF1α蛋白表达在化学缺氧后 2 ,4 ,8和 12h均明显增加 ,8h达高峰 ,提示化学缺氧 8h后细胞损伤逐渐减轻可能与HIF1α蛋白水平升高有关。在模拟复氧实验中 ,LDH和细胞形态学改变都显示化学复氧 8h细胞损伤最为严重 ,而HIF1α蛋白表达在化学复氧 4和 8h均明显下降 ,提示细胞化学复氧损伤可能与HIF1α蛋白水平下降有关。 结论　HIF1对神经细胞化学缺氧复氧损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 PC12细胞 化学缺氧复氧损伤 缺氧诱导因子1 表达

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氯化钴预处理在培养分化的人神经母细胞瘤细胞株缺氧损伤中的保护作用 被引量：4

12

作者 孙胜 高文祥 +1 位作者 蒋春华 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1010-1012,共3页

目的探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50μmol/LCoCl2... 目的探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50μmol/LCoCl2预处理3h,换液后常氧培养1h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同化学缺氧预处理组)。用Westernblotting法测细胞HIF-1α、HIF-2α和VEGF的蛋白表达,通过乳酸脱氢酶释放率测定、MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度。结果化学缺氧预处理组细胞HIF-2α和VEGF的蛋白表达显著高于缺氧组(P<0.01),HIF-1α蛋白表达在两组之间没有显著性差异(P>0.05),化学缺氧预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少(P<0.01)。结论CoCl2化学预缺氧可保护分化的SH-SY5Y细胞对缺氧产生耐受,缺氧预处理可能通过HIF-2促进VEGF的表达而产生保护作用。 展开更多

关键词 化学缺氧预处理 缺氧诱导因子1 缺氧诱导因子2 血管内皮生长因子 人神经母细胞瘤

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VEGF参与CoCl_2预处理对神经细胞缺氧损伤的保护作用 被引量：1

13

作者 孙胜 高文祥 +1 位作者 刘福玉 高钰琪 《西南国防医药》 CAS 2007年第3期257-259,共3页

目的:探讨CoCl2对体外培养分化SH-SY5Y细胞的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导基因产物VEGF在其中的作用。方法:分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧预处理组(预处理组,细胞先用50μM CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低... 目的:探讨CoCl2对体外培养分化SH-SY5Y细胞的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导基因产物VEGF在其中的作用。方法:分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧预处理组(预处理组,细胞先用50μM CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同预处理组)。用Western Blotting法测细胞VEGF的蛋白表达,RT-PCR测VEGF的mRNA表达,通过乳酸脱氢酶释放率和MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度。然后,进一步通过添加VEGF单克隆抗体、重组人VEGF,验证VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用。结果:化学缺氧预处理组细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达都显著高于缺氧组(P<0.01),预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高,乳酸脱氢酶释放率减少(P<0.01)。MTT细胞活力测定显示,40μg/ml VEGF单克隆抗体可抑制预处理的保护作用,而100 ng/ml重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用。结论:CoCl2化学预缺氧可保护神经型细胞对缺氧产生耐受,VEGF可能在其中发挥重要的保护作用。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 化学缺氧预处理 人神经母细胞瘤 神经保护

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缺氧调节基因/产物参与CoCl_2预处理对分化SH-SY5Y细胞缺氧损伤的保护

14

作者 孙胜 高文祥 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1168-1170,共3页

目的探讨缺氧调节基因/产物在CoCl2化学缺氧预处理抵抗神经型细胞缺氧损伤中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞先用50μmol/LCoCl2预处理3h,换液后常氧培养1h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28h)、缺氧组(2%... 目的探讨缺氧调节基因/产物在CoCl2化学缺氧预处理抵抗神经型细胞缺氧损伤中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞先用50μmol/LCoCl2预处理3h,换液后常氧培养1h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28h)、缺氧组(2%的低氧孵箱内缺氧28h)。RT-PCR测VEGF、GLUT-1、EPO、LDH-A的mRNA表达。通过应用重组人VEGF纯品,进一步确定VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用。结果化学缺氧预处理组细胞GLUT-1、EPO mRNA表达显著高于缺氧组(P<0·05),VEGF mRNA表达显著高于缺氧组(P<0·01),LDH-A mRNA表达在两组之间没有显著性差异(P>0·05)。MTT细胞活力测定显示,重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用。结论CoCl化学缺氧预处理很可能通过促进VEGF、GLUT-1、EPO等缺氧调节基因/产物表达,发挥其神经保护作用。 展开更多

关键词 缺氧调节基因 化学缺氧预处理 缺氧诱导因子 人神经母细胞瘤 神经保护

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硫化氢对抗化学性缺氧引起的心肌细胞损伤及其机制 被引量：32

15

作者 廖新学 杨春涛 +6 位作者 杨战利 李建平 王礼春 黄雪 郭瑞鲜 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1012-1017,共6页

目的观察H2S对氯化钴（CoCl2）诱导的H9C2心肌细胞缺氧性损伤的影响,探讨其作用机制。方法用CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。NaHS（H2S的供体）在CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预... 目的观察H2S对氯化钴（CoCl2）诱导的H9C2心肌细胞缺氧性损伤的影响,探讨其作用机制。方法用CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。NaHS（H2S的供体）在CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cleaved Caspase-3的表达;GSSG试剂盒检测GSSG/（GSSG＋GSH）的比值;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧（ROS）;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位（MMP）。结果在400~800μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地降低细胞存活率。在600μmol.L-1CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min,应用400μmol.L-1NaHS可明显地抑制CoCl2对细胞的损伤作用,使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率及CleavedCaspase-3表达降低;并使H9C2心肌细胞内GSSG/（GSH＋GSSG）比值及ROS水平明显降低,同时明显地改善MMP。结论H2S能明显地对抗化学性缺氧诱导的心肌细胞损伤,此保护作用与其降低GSSG/（GSH＋GSSG）比值和ROS水平,改善MMP,抑制Caspase-3活化等机制有关。 展开更多

关键词 硫化氢 心肌保护 化学性缺氧 凋亡 氯化钴 活性氧 线粒体膜电位

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热休克蛋白90在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用 被引量：17

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作者 孟金兰 兰爱平 +6 位作者 杨春涛 杨战利 王立伟 陈丽新 朱琳燕 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期103-107,共5页

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 3325... 目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡PC12细胞的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测Hsp90的表达。结果H2S的供体400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS)可上调PC12细胞Hsp90的表达,NaHS作用3h,Hsp90表达达最高峰,作用24h时表达恢复到基础水平;NaHS也能明显地增加CoCl2引起的Hsp90的表达上调。NaHS预处理能对抗CoCl2引起的PC12细胞损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率。Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)可拮抗NaHS预处理对Hsp90表达的上调作用,并明显地减弱H2S诱导的适应性细胞保护作用。结论H2S能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的低氧损伤作用,诱导Hsp90表达上调可能是其细胞保护机制之一。 展开更多

关键词 硫化氢 氯化钴 化学性缺氧 热休克蛋白 细胞保护 凋亡 PC12细胞

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PI3K/Akt信号通路在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的作用 被引量：10

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作者 孟金兰 陈雅嘉 +5 位作者 陈红 董艳芬 邢德刚 梁燕玲 兰爱平 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期257-261,共5页

目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检... 目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50～400μmol.L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用。NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600μmol.L-1CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低。而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用。结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤。 展开更多

关键词 硫化氢 化学性缺氧 PI3K/AKT信号通路 神经保护 细胞信号 PC12细胞

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氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究 被引量：9

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作者 石朔 王利华 +4 位作者 郭睿 张敏 苗莹 张淼 李彪 《诊断学理论与实践》 2013年第5期532-536,共5页

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞，建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型，分别于12、18、24、3... 目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞，建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型，分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率；确定最佳诱导浓度600μmol／L后，分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达；确定最佳诱导时间后，用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内，CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。 展开更多

关键词 氯化钴 化学性缺氧 缺氧诱导因子1Α H9C2心肌细胞

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当归挥发油对化学性缺氧小鼠脑损伤的保护作用研究 被引量：7

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作者 罗慧英 杨焕 +2 位作者 刘渊 李思 邱瑞玉 《甘肃中医学院学报》 2011年第6期5-8,共4页

目的初步探讨当归挥发油对化学性缺氧小鼠脑损伤的保护作用。方法将40只昆明种小鼠随机分为4组(空白组、模型组及当归挥发油高、低剂量组),灌胃给药7 d后,于最后1次给药2 h后腹腔注射亚硝酸钠800 mg/kg,记录各组小鼠的存活时间,检测脑... 目的初步探讨当归挥发油对化学性缺氧小鼠脑损伤的保护作用。方法将40只昆明种小鼠随机分为4组(空白组、模型组及当归挥发油高、低剂量组),灌胃给药7 d后,于最后1次给药2 h后腹腔注射亚硝酸钠800 mg/kg,记录各组小鼠的存活时间,检测脑组织中Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性和乳酸(LD)含量,并测定脑组织中兴奋性氨基酸(EAA)谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GA-BA)及甘氨酸(Asp)的含量。结果当归挥发油可显著延长化学性缺氧小鼠的存活时间,增强Na+-K+-AT-Pase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性,降低LD,Glu,GABA以及Gly含量,且作用呈剂量依赖性,对Asp无明显影响。结论当归挥发油能明显降低缺氧小鼠脑组织中EAA含量,并改善能量代谢,从而发挥对化学性缺氧脑损伤的保护作用。 展开更多

关键词 当归挥发油 化学性缺氧 脑损伤 能量代谢 兴奋性氨基酸

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环氧化酶2介导化学性缺氧诱导的人角质形成细胞的炎症损伤作用 被引量：7

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作者 杨春涛 杨战利 +8 位作者 莫利球 曾凡钦 张美芬 张辉 韩艳芳 胡芬 兰爱平 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期69-73,共5页

目的探讨环氧化酶2(COX-2)在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)毒性及炎症反应中的作用。方法用CoCl2处理HaCaT细胞,建立化学性缺氧诱导人皮肤角质形成细胞损伤的实验模型。CCK-8比色法检测细胞存活率,... 目的探讨环氧化酶2(COX-2)在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)毒性及炎症反应中的作用。方法用CoCl2处理HaCaT细胞,建立化学性缺氧诱导人皮肤角质形成细胞损伤的实验模型。CCK-8比色法检测细胞存活率,ELISA试剂盒检测细胞培养基中白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的水平,Western blot法检测COX-2蛋白的表达。结果 2 000μmol.L-1 CoCl2处理HaCaT细胞0～3 h,可上调COX-2的表达,1 h COX-2表达开始升高,2 h表达达到高峰。用0、500、1 000和2 000μmol.L-1 CoCl2处理HaCaT细胞2 h可剂量依赖性地上调COX-2的表达。2 000μmol.L-1 CoCl2处理HaCaT细胞0～8 h可时间依赖性地降低HaCaT细胞存活率,半数致死时间(LT50)在6 h左右。2 000μmol.L-1 CoCl2处理HaCaT细胞6 h可促进HaCaT细胞释放IL-6和IL-8。选择性COX-2抑制剂(NS-398)可明显对抗2 000μmol.L-1 CoCl2处理引起的细胞毒性及CoCl2诱导的IL-6和IL-8的释放增加。结论 COX-2介导化学性缺氧诱导的HaCaT细胞毒性及炎症损伤作用。 展开更多

关键词 化学性缺氧 人皮肤角质形成细胞 炎症反应 环氧化酶-2 白细胞介素-6 白细胞介素-8

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