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副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定 被引量：188
1
作者 蔡旭旺 刘正飞 +3 位作者 陈焕春 吴斌 金梅林 Pat Blackall 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期55-58,共4页
　从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到 32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌 16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增, 将 822bp扩增片段连入T 载体后测序, 再与GenBank(M7506... 　从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到 32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌 16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增, 将 822bp扩增片段连入T 载体后测序, 再与GenBank(M75065 )中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株 16SrRNA序列的同源性为 97%以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis, Hps)。将其中的 15株按Kieletein Rapp Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清 5型 3株、血清 4型 4株、血清 13型2株、血清 12型 2株,另外有 4株不能进行分型。该结果表明副猪嗜血杆菌在我国广泛存在。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 PCR 血清型
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副猪嗜血杆菌的分离与鉴定 被引量：79
2
作者 尹秀凤 姜平 +1 位作者 邓雨修 汤景元 《畜牧与兽医》 北大核心 2004年第7期6-8,共3页
在通过对上海一发病猪群临床流行病学研究和病理学观察的基础上 ,从发病仔猪肺脏、气管和脾脏检出并分离到 1株革兰氏阴性细小杆菌 ,兼性厌氧。生化试验为 :接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,鸟氨酸脱羧酶、吲哚和脲酶阴性 ;生长需要NAD ,发酵... 在通过对上海一发病猪群临床流行病学研究和病理学观察的基础上 ,从发病仔猪肺脏、气管和脾脏检出并分离到 1株革兰氏阴性细小杆菌 ,兼性厌氧。生化试验为 :接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,鸟氨酸脱羧酶、吲哚和脲酶阴性 ;生长需要NAD ,发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和蔗糖 ;不分解D 甘露醇、D 山梨醇和海藻糖。用副猪嗜血杆菌的 1 6S小亚单位rRNA和tbpA基因的特异性PCR引物 ,通过PCR技术分别从该分离菌株扩增出 82 2bp及 1 9kb的特异基因片段 。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定
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副猪嗜血杆菌研究进展 被引量：69
3
作者 刘正飞 蔡旭旺 +2 位作者 陈焕春 吴斌 何启盖 《动物医学进展》 CSCD 2003年第5期17-19,共3页
近年来 ,国内外许多猪场出现了一种以多发性浆膜炎和关节炎及高死亡率为特征 ,严重危害仔猪和青年猪的传染病。经细菌分离培养、生化鉴定和分子生物学试验证明 ,该传染病主要是由副猪嗜血杆菌所引起。为了更加全面地认识该病原体 ,文章... 近年来 ,国内外许多猪场出现了一种以多发性浆膜炎和关节炎及高死亡率为特征 ,严重危害仔猪和青年猪的传染病。经细菌分离培养、生化鉴定和分子生物学试验证明 ,该传染病主要是由副猪嗜血杆菌所引起。为了更加全面地认识该病原体 ,文章对其流性病学、理化特性、分子生物学、诊断及防制作了较为全面的概述。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 多发性浆膜炎 关节炎 病原体 疫苗 分子生物学
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副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：45
4
作者 王艳 夏万田 +2 位作者 柏坤桃 尹秀凤 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第3期5-7,共3页
采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该... 采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 ELISA 抗体
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副猪嗜血杆菌抗体间接血凝检测方法的建立及应用 被引量：37
5
作者 魏子贡 蔡旭旺 +3 位作者 金梅林 胡军勇 葛君 陈焕春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期713-718,共6页
将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清型4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化红细胞,建立了检测HPS抗体的间接血凝试验方法。最适反应条件为绵羊红细胞30℃醛化5 h,4、5型菌株浓缩抗原以1∶8稀释致敏红细胞。免疫... 将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清型4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化红细胞,建立了检测HPS抗体的间接血凝试验方法。最适反应条件为绵羊红细胞30℃醛化5 h,4、5型菌株浓缩抗原以1∶8稀释致敏红细胞。免疫猪2周后检出率达89%。对15种HPS血清型阳性血清进行检测,结果均为阳性;对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪链球菌、猪肺疫巴氏杆菌、Ⅰ相支气管败血波氏杆菌及胸膜肺炎放线杆菌阳性血清进行检测,结果均为阴性。敏感性为琼脂扩散试验的16倍。对1 665份猪血清进行检测,阳性率为47.1%。结果表明,该方法敏感性较高,特异性强,重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及副猪嗜血杆菌的流行病学调查。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 间接血凝试验 抗体检测
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副猪嗜血杆菌病研究进展 被引量：34
6
作者 华升 梅书棋 +2 位作者 曾德芳 徐涤平 李勇 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期7-10,共4页
副猪嗜血杆菌为革兰氏阴性的条件性致病菌,常引起断奶前后仔猪以多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热等临床特征的传染性疾病,给养猪业带来重大经济损失。文章综述了近年来副猪嗜血杆菌病的病原学,流行病学,致病机理,临床症状与病理变... 副猪嗜血杆菌为革兰氏阴性的条件性致病菌,常引起断奶前后仔猪以多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热等临床特征的传染性疾病,给养猪业带来重大经济损失。文章综述了近年来副猪嗜血杆菌病的病原学,流行病学,致病机理,临床症状与病理变化,临床诊断和防治等方面的研究进展。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 病原学 流行病学 诊断 防治
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副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：36
7
作者 石碧 崔耀文 +6 位作者 贾凡 金卉 万云 蔡旭旺 方刚 陈焕春 周锐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期964-968,共5页
为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和... 为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖 间接血凝试验 间接ELISA
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副猪嗜血杆菌的研究进展 被引量：32
8
作者 母安雄 应小飞 +1 位作者 陶益 杨宗照 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第11期48-50,共3页
副猪嗜血杆菌为革兰氏阴性、条件性致病菌,常引起断奶前后仔猪多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热等临床特征的传染性疾病,给养猪业带来重大经济损失。作者综述了近年来有关副猪嗜血杆菌的病原学、流行病学和可能的致病机理方面的研... 副猪嗜血杆菌为革兰氏阴性、条件性致病菌,常引起断奶前后仔猪多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热等临床特征的传染性疾病,给养猪业带来重大经济损失。作者综述了近年来有关副猪嗜血杆菌的病原学、流行病学和可能的致病机理方面的研究结果,并就G lasse's病的临床诊断和疫苗免疫预防进行简要阐述。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 流行病学 致病机理
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猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的鉴别诊断及血清型鉴定 被引量：27
9
作者 张培君 孙惠玲 +2 位作者 苗得园 龚玉梅 Pat Blackall 《中国兽药杂志》 2002年第10期18-20,28,共4页
利用PCR技术、琼脂扩散试验、糖发酵试验和间接血凝试验(IHA)对野外分离到的可疑猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌进行了诊断和血清型鉴定。PCR鉴定分离物HS1580为副猪嗜血杆菌,分离物HS1582为猪胸膜肺炎放线杆菌; 生化试验表明分离物H... 利用PCR技术、琼脂扩散试验、糖发酵试验和间接血凝试验(IHA)对野外分离到的可疑猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌进行了诊断和血清型鉴定。PCR鉴定分离物HS1580为副猪嗜血杆菌,分离物HS1582为猪胸膜肺炎放线杆菌; 生化试验表明分离物HS1581和HS1582为猪胸膜肺炎放线杆菌; 血清型鉴定分离物HS1580不属于被检的14个血清型之列,HS1581为App血清15型,HS1582为App血清7型。试验结果表明,综合使用PCR等技术可快速、准确地对这两种传染性细菌进行鉴别诊断和血清型鉴定。 展开更多
关键词 猪 胸膜肺炎放线杆菌 副猪嗜血杆菌 鉴别诊断 血清型鉴定
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猪流感病毒与繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、圆环病毒、伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌混合感染的情况调查 被引量：29
10
作者 覃绍敏 梁安莉 +5 位作者 王仰杰 向晖 黄红梅 陈凤莲 马玲 吴健敏 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期77-80,共4页
应用套式PCR方法对采自广西境内13个市122个不同规模猪场及农村散养户的126份病料,进行了SIV的检测,并对鉴定为SIV阳性的15份病料,再分别进行PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS的检测,以调查广西猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS混... 应用套式PCR方法对采自广西境内13个市122个不同规模猪场及农村散养户的126份病料,进行了SIV的检测,并对鉴定为SIV阳性的15份病料,再分别进行PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS的检测,以调查广西猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS混合感染的情况。结果发现:猪群中SIV感染率为11.9%(15/126),而在所检测的15份阳性病料中,SIV混合感染十分严重,感染率为73.3%(11/15)。混合感染病毒种类最多达四重感染(SIV+PRRSV+CSFV+PCV-2),占6.67%(1/15);三重感染(SIV+PRRSV+PCV-2、SIV+PRRSV+CSFV)占40%(6/15);二重感染(SIV+PRRSV,SIV+PCV-2)占26.6%(4/15)。调查结果表明广西发病猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2混合感染普遍存在。 展开更多
关键词 猪 流感病毒 繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 圆环病毒 伪狂犬病病毒 副猪嗜血杆菌 混合感染
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副猪嗜血杆菌病流行病学及致病因子的研究进展 被引量：24
11
作者 薛国聪 任涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期168-171,共4页
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪上呼吸道的一种常在菌,常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎,由该菌引起的病又称格拉泽氏病。随着世界养猪业的发展,该病已成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病。为了更全面... 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪上呼吸道的一种常在菌,常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎,由该菌引起的病又称格拉泽氏病。随着世界养猪业的发展,该病已成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病。为了更全面的了解副猪嗜血杆菌病的研究现状,笔者对该病的病原学、流行病学、致病因子的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 病原学 流行病学 致病因子
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副猪嗜血杆菌分离鉴定与PCR检测方法的建立及应用 被引量：23
12
作者 林雪玲 黄耿森 +2 位作者 冼琼珍 黄良宗 顾万军 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期321-324,共4页
从养猪场送检的猪肺病料中分离到3株疑似副猪嗜血杆菌(HPS)可疑菌株。经形态镜检、染色特性、生化和部分生物学特性试验,初步鉴定为HPS。在细菌学鉴定基础上,设计合成3对引物,分别以3株分离菌株的DNA为模板进行PCR扩增,结果均扩增出822 ... 从养猪场送检的猪肺病料中分离到3株疑似副猪嗜血杆菌(HPS)可疑菌株。经形态镜检、染色特性、生化和部分生物学特性试验,初步鉴定为HPS。在细菌学鉴定基础上,设计合成3对引物,分别以3株分离菌株的DNA为模板进行PCR扩增,结果均扩增出822 bp8、24 bp和1.9 kb的预期特异性条带。以HPS GD株作为参考阳性菌株,以P1、P2为引物,设计优化PCR反应程序,建立HPS PCR检测方法,并应用于临床病料检测。结果表明,所建立的HPS PCR检测方法特异与敏感性高、适用性强,可应用于HPS感染的诊断和检测。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离鉴定 PCR
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华东地区副猪嗜血杆菌的分离、血清型鉴定与药敏分析 被引量：27
13
作者 周斌 储岳峰 +6 位作者 李超 吴龙成 黄小国 邵国清 鲁岩 张露露 陈溥言 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第11期84-86,共3页
2008年1～6月从华东地区养猪场送检的病猪中分离到13株细菌，经细菌形态、染色镜检、培养特性和生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌，同时对所分离的细菌进行了血清型的鉴定和药敏试验。结果显示，13株副猪嗜血杆菌分属6个血清型，其中血清1型... 2008年1～6月从华东地区养猪场送检的病猪中分离到13株细菌，经细菌形态、染色镜检、培养特性和生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌，同时对所分离的细菌进行了血清型的鉴定和药敏试验。结果显示，13株副猪嗜血杆菌分属6个血清型，其中血清1型2株，4型4株，5型2株，12型3株，10型和13型各1株。13株分离细菌对头孢类药物、沙星类药物和阿莫西林等敏感。本研究为华东地区规模化猪场的副猪嗜血杆菌病防治提供了临床指导依据。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离 血清型 药敏试验
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6株副猪嗜血杆菌基因组DNA的PCR指纹图谱研究 被引量：23
14
作者 朱必凤 杨旭夫 +2 位作者 刘主 彭凌 邓小亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期177-179,184,共4页
根据肠道菌基因间重复一致序列,设计了一对特异性引物,采用ERIC-PCR和RAPD技术,研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明,6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型;6个分离株的R... 根据肠道菌基因间重复一致序列,设计了一对特异性引物,采用ERIC-PCR和RAPD技术,研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明,6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型;6个分离株的RAPD研究结果均表现出多态性。有意义的是,6个菌株的多态性DNA片段也能明显将其分为4种类型的副猪嗜血杆菌,与特异性引物PCR结果相一致。该研究可作为流行病学调查和该菌的分子分型快速诊断方法的基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 ERIC—PCR RAPD 指纹图谱 分子分型
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我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查 被引量：22
15
作者 尹秀凤 王艳 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第6期11-13,共3页
采用细菌分离鉴定、结合PCR方法,对江苏、上海、安徽、广西、浙江、江西、山东、河南、湖北等省市2003年11月～2005年4月送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌检测,结果阳性猪场为76个,阳性率48%,临床症状主要为呼吸困难和体... 采用细菌分离鉴定、结合PCR方法,对江苏、上海、安徽、广西、浙江、江西、山东、河南、湖北等省市2003年11月～2005年4月送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌检测,结果阳性猪场为76个,阳性率48%,临床症状主要为呼吸困难和体温升高;病理变化主要有肺炎病变和淋巴结肿大或出血。通过数据统计分析,发现该病已在我国不同地区广泛流行,且多发于秋、冬季节。该研究为副猪嗜血杆菌的流行病学研究奠定了基础,也为该病的临床预防提供了理论依据。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 流行病学 细菌分离 PCR
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副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用 被引量：23
16
作者 尹秀凤 王艳 +2 位作者 姜平 李玉峰 蒋文明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期180-183,共4页
通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检... 通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA,结果为阳性;检测肝脏、脾脏、脑组织样品抽提的DNA,结果为阴性。用该法检测人工感染发病仔猪及自然感染仔猪肺组织,并结合细菌分离培养,证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离菌体,可有效地用于HPs的诊断。检测110份来自发病猪场的患病仔猪肺脏病料,其中有53份为阳性,表明HPs所致发的Glasser′s病已在我国部分地区发生和流行。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 检测 PCR
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规模化猪场主要细菌性疫病的流行病学调查 被引量：23
17
作者 王洪光 汤德元 +5 位作者 曾智勇 罗险峰 李春燕 郝飞 刘建 李达 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第9期98-101,共4页
为掌握现代规模化猪场主要细菌性疫病的流行状况,本研究运用临床诊断和实验室方法对贵州省10家规模化猪场的220份样本进行了检测及细菌鉴定,以实现对副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、猪丹毒杆菌等常见病原菌的调查。结果表明... 为掌握现代规模化猪场主要细菌性疫病的流行状况,本研究运用临床诊断和实验室方法对贵州省10家规模化猪场的220份样本进行了检测及细菌鉴定,以实现对副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、猪丹毒杆菌等常见病原菌的调查。结果表明:10家规模化猪场中副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌及猪丹毒杆菌的阳性率分别为25.5%、17.5%、31.5%、9.5%,说明这些规模化猪场存在的细菌性疫病主要由副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和猪链球菌感染引起,且发病率高,死亡率上升,严重影响着规模化养殖业的发展,因此做好这些疫病的预防工作十分必要。 展开更多
关键词 规模化猪场 流行病学 副猪嗜血杆菌 胸膜肺炎放线杆菌 猪链球菌 猪丹毒杆菌
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猪高热病副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验 被引量：23
18
作者 徐引弟 郭成留 +1 位作者 王治方 张玉杨 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第10期99-102,共4页
从2006-2007年河南省发生猪高热病的65家猪场196份病料中分离到6株革兰氏阴性细小杆菌,通过培养特性试验和生化试验初步怀疑为副猪嗜血杆菌,将其进行PCR鉴定,结果表明,分离菌为副猪嗜血杆菌。对6株分离株进行小鼠毒力试验和药物敏感试验... 从2006-2007年河南省发生猪高热病的65家猪场196份病料中分离到6株革兰氏阴性细小杆菌,通过培养特性试验和生化试验初步怀疑为副猪嗜血杆菌,将其进行PCR鉴定,结果表明,分离菌为副猪嗜血杆菌。对6株分离株进行小鼠毒力试验和药物敏感试验,结果表明,6株分离菌能致死小鼠,对头孢他啶、头孢噻呋、头孢唑啉、头孢哌酮、多西环素、痢特灵敏感。 展开更多
关键词 猪高热病 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 药敏试验
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猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 被引量：18
19
作者 米丰泉 陈小玲 +2 位作者 王翠敏 赵玉军 王凤强 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期85-88,共4页
在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的45... 在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457 bp 和HPS 的821 bp 的特异性片段。该复合PCR 能同时检测到100 个每种细菌或50 pg 的APP 或HPS 的DNA和500 pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR 一致。该方法的建立对临床上进行这3 种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 猪多杀性巴氏杆菌 副猪嗜血杆菌 复合PCR
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副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：22
20
作者 陈善真 李春玲 +1 位作者 贾爱卿 王贵平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期3036-3044,共9页
【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接... 【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P5 克隆 表达 间接ELISA
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