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乙型肝炎病毒相关性原发性肝癌患者前-X基因的分子流行病学意义 被引量：1
1
作者 薛红安 王媛 杨倩 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第10期935-937,共3页
目的了解前-X基因在HBV相关HCC患者中的流行病学分布、前-X基因和HBV基因型与HCC的临床关系.方法患有乙肝的肝细胞肝癌患者(HCC)35例,采用型特异性引物巢式聚合酶链反应进行基因分型.同时对明确基因分型的肝癌患者,扩增前-X区,TA克隆到P... 目的了解前-X基因在HBV相关HCC患者中的流行病学分布、前-X基因和HBV基因型与HCC的临床关系.方法患有乙肝的肝细胞肝癌患者(HCC)35例,采用型特异性引物巢式聚合酶链反应进行基因分型.同时对明确基因分型的肝癌患者,扩增前-X区,TA克隆到PMD18-T载体后进行单克隆测序,分析前-X区在肝癌患者的表达情况,对前-X区和基因型及相关病情进行研究.结果HCC患者35例中B基因型1例,C基因型24例,B/C混合基因型8例,未定型者2例.明确基因型的患者33例,进一步扩增前-X区,并经TA克隆获得93个单克隆株中,经测序表明,有65个单克隆株编码前-X多肽,占69.9%.HCC患者33例中有29例编码前-X多肽,编码率为87.9%,高于慢性乙型肝炎患者58.8%的编码率.C基因型前-X多肽编码率为91.6%,B/C混合型编码率为87.5%(P>0.05),B基因型无编码.前-X区的表达与年龄,性别,家族史,AFP,HBVDNA,ALT水平间无关(P>0.05).结论HCC患者中C基因型、B/C混合基因型较为多见.前-X多肽在HCC患者中有较高的编码率,前-X区多肽可能和HCC之间有一定相关性. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因型 前-x基因 癌 肝细胞
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应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-X蛋白反式激活基因 被引量：1
2
作者 杨倩 张黎颖 +5 位作者 成军 洪源 刘妍 王琳 董菁 张树林 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第13期1609-1611,共3页
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆前-X反式激活相关基因,了解该段基因的可能生物学功能. 方法:构建表达质粒pcDNA3.1(-)-前-X,转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1... 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆前-X反式激活相关基因,了解该段基因的可能生物学功能. 方法:构建表达质粒pcDNA3.1(-)-前-X,转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;提取转染后细胞的mRNA,反转录为cDNA.cDNA经RsaI 酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库.文库扩增后得到45个白色克隆,进行茵落PCR 分析,均得到200-1000 bp插入片段.挑取含有插入片段的30个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得13种已知功能基因序列. 结论:应用SSH技术成功构建了前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为阐明该基因生物学功能提供理论依据. 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 反式激活基因 克隆 CDNA消减文库 乙型肝炎病毒(HBV) HepG2细胞 x蛋白 基因差异表达 反式激活相关基因 前-x基因 生物信息学分析 生物学功能 pcDNA3 多聚酶链反应 文库扩增 插入片段 同源性分析 PCR扩增
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乙型肝炎病毒前-X基因的研究进展 被引量：1
3
作者 张延峰 成军 《实用肝脏病杂志》 CAS 2008年第6期418-421,共4页
目前公认乙型肝炎病毒基因组含有4个部分重叠的开放读码框(ORF),即前-S/S区、前-C/C区、P区和X区。近年来,研究还发现在某些病毒株的X区前存在一个前-X区,引起了许多研究者的兴趣。本文对前-X区的发现及研究进展进行简要的综述。
关键词 乙型肝炎病毒 前-x基因 临床研究 治疗方法
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乙型肝炎病毒前-X在大肠杆菌中的表达和纯化
4
作者 王春花 成军 +3 位作者 郎振为 李蕴茹 闫杰 张黎颖 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第13期1612-1614,共3页
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白, 并进行纯化和鉴定. 方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因,将前-X克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考... 目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白, 并进行纯化和鉴定. 方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因,将前-X克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot. 结果:成功扩增获得HBV的前-X编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG 的诱导,裂解,SDS-PAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr27 000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别. 结论:成功表达HBV的前-X蛋白,对于研究HBV的前- X蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 大肠杆菌 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 纯化 聚合酶链式反应(PcR) 乙型肝炎病毒(HBV) SDS-PAGE WESTERN WESTERN blot 表达载体 前-x基因 单克隆抗体 特异性免疫 生物学特性 x蛋白 重组质粒 原核表达 诱导表达 表达产物 基因片断
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乙型肝炎病毒基因组中前-X-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定 被引量：19
5
作者 杨倩 董菁 +5 位作者 成军 刘妍 洪源 王建军 王琳 张树林 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期763-765,共3页
利用长距离精确聚合酶链反应 (LA PCR)扩增慢性乙型肝炎患者血清来源的 5个全长的HBV基因组DNA ,在分析不同克隆之间的序列变异程度时 ,发现所获得的 5个克隆在X区之前可能还存在一个开放读码框架 (ORF) ,长度 16 8bp ,编码 5 6个氨基... 利用长距离精确聚合酶链反应 (LA PCR)扩增慢性乙型肝炎患者血清来源的 5个全长的HBV基因组DNA ,在分析不同克隆之间的序列变异程度时 ,发现所获得的 5个克隆在X区之前可能还存在一个开放读码框架 (ORF) ,长度 16 8bp ,编码 5 6个氨基酸残基(aa) ,并将其暂时命名为前 X(pre X)。为了解前 X编码区上游DNA序列是否具有启动子活性 ,选取翻译起始密码子ATG上游 2 2 5bp的基因片段 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 X promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用ELISA法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒 pCAT3 前 X promoter能够指导CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3的 3 5倍 ,提示pCAT3 前 X promoter中插入的DNA序列具有启动子活性 ,说明这一段基因序列中存在新的启动子区 ,为研究、界定前 X的ORF的存在提供了直接的依据。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 前-x编码基因 启动子
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乙肝病毒基因组新编码基因被破译
6
《发明与创新（大科技）》 2003年第11期23-23,共1页
关键词 乙型肝炎病毒 基因组 编码基因 前-x基因
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HBV pre-X转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选 被引量：2
7
作者 柴艳云 张锦前 +2 位作者 赵龙凤 王琪 成军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第33期3724-3728,共5页
目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-... 目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X和pcDNA3.1-myc-his载体分别转染HepG2细胞后,提取mRNA后逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因.结果:构建的真核表达载体经ApaⅠ、BstⅪ双酶切鉴定,转染HepG2细胞后HBV pre-X表达经蛋白免疫印迹证实;经基因表达谱芯片分析发现,其中基因表达水平显著上调和下调的分别是200个和62个.结论:筛选HBV pre-X转染HepG2细胞后的代谢相关差异表达基因,从而为乙型肝炎病毒合并糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的分子生物学机制的研究提供了重要依据. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒前x基因 HEPG2细胞 基因芯片 差异表达基因
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