鸡滑液囊支原体卵黄抗体的制备与鉴定 被引量：8

1

作者 姜肖军 郭亚男 +3 位作者 陈秀红 司朵朵 刘凡 何生虎 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1018-1022,共5页

为了制备高效价特异性的鸡滑液囊支原体卵黄抗体,为鸡滑液囊支原体病防治的研究探索新的方法和途径,用鸡滑液囊支原体灭活疫苗免疫健康产蛋母鸡,获取含有大量卵黄抗体的卵黄,利用水稀释法和盐析法对卵黄进行粗提,再利用超滤及透析方法... 为了制备高效价特异性的鸡滑液囊支原体卵黄抗体,为鸡滑液囊支原体病防治的研究探索新的方法和途径,用鸡滑液囊支原体灭活疫苗免疫健康产蛋母鸡,获取含有大量卵黄抗体的卵黄,利用水稀释法和盐析法对卵黄进行粗提,再利用超滤及透析方法进行提纯。ELISA检测免疫后不同时期血清抗体和提纯后卵黄抗体的效价,结果显示,卵黄抗体的变化趋势与血清抗体基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,SDS-PAGE分析结果显示,在约25 ku和65 ku处出现清晰的两条带,Western-blot结果显示,纯化后的卵黄抗体能与牛支原体抗原悬液发生特异性结合,具有良好的免疫反应性,提纯后的卵黄抗体浓度达7.2 mg/mL,最高效价达到了1∶10~4以上。结果表明,本试验制备的鸡滑液囊支原体卵黄抗体具有较强的特异性,从而为鸡滑液囊支原体的制备和卵黄抗体在鸡滑液囊支原体病上的应用奠定了一定基础。 展开更多

关键词 鸡滑液囊支原体 卵黄抗体 制备与鉴定

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人脐带间充质干细胞来源工程化纳米囊泡的制备与鉴定

2

作者 李磊 杜飞跃 杨文杰 《生物化工》 CAS 2023年第5期143-146,151,共5页

目的:探索来源于人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的工程化纳米囊泡(Nanovesicle,NVs)的制备与鉴定方法,为深入了解工程化NVs的生物学功能提供数据基础。方法:采用物理方式破碎hUC-MSCs以获取NVs,并采用改良的超速离心法进行分离和纯化;通... 目的:探索来源于人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的工程化纳米囊泡(Nanovesicle,NVs)的制备与鉴定方法,为深入了解工程化NVs的生物学功能提供数据基础。方法:采用物理方式破碎hUC-MSCs以获取NVs,并采用改良的超速离心法进行分离和纯化;通过纳米颗粒跟踪分析(NTA)、透射电镜(TEM)观察、蛋白质免疫印迹(WB)及生物学活性分析方法鉴定NVs的特性。结果:建立的方法成功分离出NVs,TEM下观察到NVs呈中间凹陷的茶杯样结构;NTA结果显示NVs直径在100 nm左右;Western Blot实验证实NVs几乎不表达外泌体特异性蛋白TSG101;生物学活性实验表明NVs不能促进人皮肤成纤维(HSF)细胞增殖。结论:本研究建立的hUC-MSCs来源的NVs提取及鉴定方法可行,为NVs在未来的临床研究提供了数据基础。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 外泌体 纳米囊泡 制备与鉴定

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1株抗欧洲型和美洲型PRRSV核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

3

作者 王晓丰 李玉峰 +2 位作者 王先炜 王海燕 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第12期30-34,共5页

利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子... 利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku。用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体。经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1 B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:640,腹水的效价为1:256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 欧洲型 美洲型 PRRSV 核衣壳蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定 NUCLEOCAPSID protein monoclonal antibody 杂交瘤细胞株 间接免疫荧光试验 呼吸综合 猪繁殖 重组表达质粒 原核表达载体 免疫印迹试验 杂交瘤技术 特异性单抗 RT-PCR方法 Balb/c小鼠 pGEX-6p-1

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抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

4

作者 孙厚良 魏大鹏 +2 位作者 张小洪 刘彦君 章崇杰 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期721-724,共4页

目的制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blo... 目的制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的细胞株4C1C8,亚类鉴定单抗为IgG1。ELISA法测定饱和硫酸铵盐析抗体效价为1∶409600,抗体相对亲和力为7.65×106L/mol;Western blot显示抗体能特异识别免疫原;细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别正常细胞株HL7702表达的hMOF。结论成功制备抗hMOF单克隆抗体,为进一步研究hMOF功能及机制奠定了基础。 展开更多

关键词 hMOF 单克隆抗体 制备与鉴定

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抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

5

作者 左伟勇 洪伟鸣 +2 位作者 吴双 王安平 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第1期43-45,共3页

利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验... 利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验证明其具有良好的特异性和敏感性,利用Protein-G Sepharose亲和层析系统纯化单克隆抗体5D7,单克隆抗体5D7对CL的IC50约为4.6 ng/mL。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 单克隆抗体 制备与鉴定 间接竞争ELISA

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Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

6

作者 王卓 卢玉婷 +3 位作者 魏雪 张海斌 柯玉花 苗丽娟 《饲料博览》 2011年第6期52-54,共3页

利用制备好的PCV2Cap蛋白,将其与弗氏佐剂乳化,免疫Balb/c鼠,制备多克隆抗体并对其抗体效价进行鉴定和分析抗体产生规律。结果表明,制备的多克隆抗体效价达到1:12800,该规律的发现为单克隆抗体制备免疫程序的制定奠定了试验基础。

关键词 PCV2Cap蛋白 多克隆抗体 制备与鉴定

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PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1

7

作者 王振达 方丽 +1 位作者 魏大鹏 章崇杰 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期504-508,共5页

目的通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法... 目的通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定。结果获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1。间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1∶102400为和1∶25600。Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原。结论成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具。 展开更多

关键词 血小板衍生因子受体 单克隆抗体 制备与鉴定

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“trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物的制备及其光谱鉴定”实验教学实施结果与探讨——培养学生批判性思维的典型案例之一

8

作者 欧阳小清 张春艳 +8 位作者 潘蕊 阮婵姿 吕银云 翁玉华 董志强 彭淑女 李华敏 许振玲 任艳平 《大学化学》 CAS 2021年第3期79-86,共8页

主要介绍厦门大学专门为"化学拔尖计划"学生个性化培养"量身定制"的"trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物的制备及其光谱鉴定"实验教学实施结果及探讨。以"trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物... 主要介绍厦门大学专门为"化学拔尖计划"学生个性化培养"量身定制"的"trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物的制备及其光谱鉴定"实验教学实施结果及探讨。以"trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物的制备及其光谱鉴定"实验为载体,围绕着合成两大目标"质"和"量",也就是以如何才能得到又"好"又"多"的trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物等问题为导向,以所展示的详细直观的制备流程和紫外-可见吸收光谱图为基础,以实验结果为依据,以设问、探讨的方式对合成过程、条件等进行仔细分析和深刻反思、判断,以展示实验教学过程中如何有效地培养学生的批判性思维。 展开更多

关键词 trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl 制备与鉴定 实验结果分析与探讨 翻转课堂 批判性思维

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trans/cis-[Co(en)_(2)Cl_(2)]Cl配合物的制备及其水解反应动力学常数测定——面向大一学生的基础型综合化学实验

9

作者 欧阳小清 张春艳 +6 位作者 许振玲 潘蕊 吕银云 阮婵姿 翁玉华 董志强 任艳平 《大学化学》 CAS 2021年第4期173-179,共7页

为大一学生推荐一个基础型综合化学实验,即厦门大学为"化学拔尖计划"一年级学生个性化培养"量身定制"并经10年教学实践而逐步改进完善的实验项目——trans/cis-[Co(en)2Cl2]Cl配合物的制备及其水解反应动力学常数... 为大一学生推荐一个基础型综合化学实验,即厦门大学为"化学拔尖计划"一年级学生个性化培养"量身定制"并经10年教学实践而逐步改进完善的实验项目——trans/cis-[Co(en)2Cl2]Cl配合物的制备及其水解反应动力学常数测定。该实验项目涵盖了配合物顺-反异构体、晶体场分裂能、配合物的水解反应动力学等基础理论知识,以及顺-反异构体配合物的制备、光谱鉴定及不同介质中水解反应动力学研究等实验操作技能。通过系统的实验,使学生深入了解顺-反异构体配合物的制备、分离和鉴定方法以及配合物水解反应动力学研究的思路和方法等,有助于学生对结构决定性质的直观认识和深刻理解,有助于加强学生对理论与实验的深度融合以及对学生的分析、判断和批判性思维能力的培养。 展开更多

关键词 基础型综合实验 Co(Ⅲ)配合物 顺-反异构体 制备与鉴定 水解反应动力学

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肝再生增强因子单克隆抗体的制备与初步鉴定

10

作者 刘瑞 雷鸣 +4 位作者 杨华 楚元奎 杨洋 田盼 廖国玲 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第4期63-65,279,共4页

为了制备重组人肝再生增强因子（rh ALR）单克隆抗体（Mc Ab）,并鉴定其特异性,从而研发一种特异性较好的检测试剂,试验以纯化的rh ALR为抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合建立能稳定分泌抗rh ALR单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗... 为了制备重组人肝再生增强因子（rh ALR）单克隆抗体（Mc Ab）,并鉴定其特异性,从而研发一种特异性较好的检测试剂,试验以纯化的rh ALR为抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合建立能稳定分泌抗rh ALR单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,用免疫荧光法对自行制备的单克隆抗体与购买的商品化多克隆抗体进行比较。结果表明：筛选出的5株稳定分泌抗rh ALR的单克隆抗体酶联免疫吸附方法（ELISA）鉴定其培养上清液和腹水中效价分别为1×10~3、1×10~3、1×10~3、2×10~3、2×10~3和1×10~4、1×10~5、1×10~3、1×10~4、5×10~5。说明与商品化多克隆抗体相比,自行制备的单克隆抗体具有较好的敏感性。 展开更多

关键词 肝再生增强因子(ALR) 单克隆抗体(McAbs) 特异性 敏感性 制备与鉴定

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SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

11

作者 徐洪涛 杨慧 +6 位作者 常立文 李文斌 赵玲霞 袁文浩 刘伟 蔡保欢 王席娟 《华南国防医学杂志》 CAS 2013年第7期447-450,463,共5页

目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(... 目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性。结果免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好。结论成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础。 展开更多

关键词 多克隆抗体 表面活性物质蛋白B 中间产物 制备与鉴定

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新疆出血热病毒灭活疫苗的试制与检定

12

作者 冯崇慧 《地方病通报》 2004年第S1期-,共3页

关键词 新疆出血热 灭活疫苗 乳鼠脑 制备与鉴定

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抗黄曲霉毒素合成中关键蛋白AFLP(OmtA)的单克隆抗体制备与鉴定

13

作者 王婷 李培武 +2 位作者 张奇 张文 张兆威 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期551-555,共5页

AFLP(Omt A)蛋白是黄曲霉毒素合成晚期的关键酶。用大肠杆菌表达的重组SUMO-AFLP融合蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,选取小鼠阳性血清的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选,筛选出可以稳... AFLP(Omt A)蛋白是黄曲霉毒素合成晚期的关键酶。用大肠杆菌表达的重组SUMO-AFLP融合蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,选取小鼠阳性血清的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选,筛选出可以稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。再用阳性细胞株制备腹水抗体,经辛酸-硫酸铵纯化抗体后,用间接ELISA、Western杂交等方法对抗体的特性进行鉴定。筛选出1株能稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的细胞株3B4 3B10,亚类鉴定单抗为Ig G2a。间接ELISA法测定该细胞腹水抗体的效价为1∶256 000,Western杂交结果显示抗AFLP单克隆抗体能特异性识别AFLP重组蛋白及黄曲霉菌内的天然AFLP蛋白。用1μg·m L^(-1)单克隆抗体检测AFLP蛋白,其线性检测范围为1.259~57.335ng·m L^(-1),检测限为0.851ng·m L^(-1),R~=0.998 3。本文成功制备抗黄曲霉毒素合成中天然AFLP蛋白的单克隆抗体,特异性和灵敏度均较高,为进一步研究AFLP的表达及功能机制奠定了基础。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素 AFLP 单克隆抗体 制备与鉴定

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人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

14

作者 李有强 尹一兵 +3 位作者 胥文春 张云燕 张雪梅 尹楠林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期2001-2004,共4页

目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Wes... 目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Westernblot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定。结果获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2。间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×105。Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原。结论成功制备ALT1单克隆抗体。 展开更多

关键词 Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶 单克隆抗体 制备与鉴定

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重金属铅免疫复合物的制备与鉴定

15

作者 李晓丽 马新华 +3 位作者 陈翔 欧国荣 高志贤 刘楠 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第18期3481-3483,共3页

目的制备Pb-DTPA-BSA复合物,作为完全抗原,用以免疫动物制备铅抗体。方法首先用金属螯合剂二乙基三胺五乙酸(Diethylene triamine pentacetate,DTPA)与铅离子(Pb2+)结合,再分别用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-(3-Dimethylaminop... 目的制备Pb-DTPA-BSA复合物,作为完全抗原,用以免疫动物制备铅抗体。方法首先用金属螯合剂二乙基三胺五乙酸(Diethylene triamine pentacetate,DTPA)与铅离子(Pb2+)结合,再分别用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC)、戊二醛、三乙胺作偶联剂将其与大分子载体蛋白-牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)偶联,制备Pb-DTPA-BSA复合物。将复合物做聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Time of Flight mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定并免疫小鼠,获得抗PbDTPA抗体。结果 SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS结果均验证合成了复合物Pb-DTPA-BSA,平均分子量76435;Pb-DTPA与BSA的偶联比为11∶1。免疫小鼠后,小鼠血清中产生了抗Pb-DTPA抗体,抗体最高效价达到1.0×105。结论经分析证明成功合成了免疫复合物Pb-DTPA-BSA,可用于重金属Pb抗体的制备。 展开更多

关键词 重金属 铅 免疫复合物 制备与鉴定

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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定 被引量：4

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作者 胡艺 胡志强 +4 位作者 马腾飞 韩丹 李倩 方瑶 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期941-945,共5页

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性... 目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布。方法以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位。结果从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×10~3的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1∶1 280 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应。亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质。结论重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质。 展开更多

关键词 类鼻疽杆菌 Ⅲ型分泌系统蛋白 抗体制备与鉴定

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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备

17

作者 吴利 黎礼达 +10 位作者 胡艺 黎元莉 陈海 朱雄 胡治强 马腾飞 韩丹 李倩 曹刘素 尹小毛 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期1663-1667,共5页

目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Weste... 目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA检测抗体的特异性,并分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位。结果成功扩增类鼻疽杆菌BPC006株基因组中的BPSS1617基因;酶切和测序验证重组表达质粒p ET-22b-BPSS1617构建成功;经IPTG诱导表达、包涵体洗涤、纯化以及变性复性,成功获得纯度>95%,分子量为25×103的目的蛋白;将纯化的BPSS1617重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗BPSS1617蛋白多克隆抗体,经实验验证其特异性良好;同时BPSS1617蛋白主要定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。结论成功构建、表达、纯化获得BPSS1617蛋白,并成功制备了其特异性多克隆抗体,并且该蛋白定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。 展开更多

关键词 类鼻疽杆菌 蛋白表达 抗体制备与鉴定

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