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题名手工克隆生产猪胚胎关键技术的改进研究
被引量：1
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作者
陶瑞鑫
贾超
武恩在
李娟
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机构
南京农业大学动物科技学院
淮安市南农大新农村发展研究有限公司
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出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2021年第7期13-19,共7页
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基金
南京农业大学-新疆农业大学联合基金项目(KYYJ201907)
江苏省自然科学基金面上项目(BK20171372)。
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文摘
手工克隆(handmade cloning,HMC)是在传统克隆技术的基础上发展出的一种体细胞核移植技术,作为纯手工操作技术,每一步骤的操作细节都影响着HMC的效率及重构胚胎发育能力。本试验针对HMC生产克隆猪胚胎的3个关键步骤:透明带消化、手工切割去核与无透明带重构胚的体外培养展开研究。结果显示,猪卵母细胞透明带以3.3 mg/mL链酶蛋白酶适度消化(10~15 s),在切割去核时卵母细胞死亡率显著低于透明带的过度(高于15 s)消化,死亡率分别为(3.22±1.08)%和(31.45±2.10)%;当透明带消化时间不足(少于10 s),不能被切割去核的猪卵母细胞显著升高,不可切割率分别为(18.25±4.22)%和(0.57±0.40)%。另外,"铡刀式"操作更适用于手工切割去核,其操作要点对成功获得无核半卵及其胞质含量非常重要。HMC无透明带重构胚体外培养时,孔深约250μm、孔径约300μm的微孔技术(well of wells,WOWs)有利于克隆胚胎发育。本研究优化了HMC操作的关键步骤,为提高生产克隆猪胚胎效率奠定了基础。
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关键词
体细胞核移植技术
手工克隆
透明带
切割去核
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Keywords
somatic cell nuclear transfer(SCNT)
handmade cloning technology(HMC)
zona pellucida
enucleation
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分类号
S828
[农业科学—畜牧学]
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