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TNFR1及其突变体重组质粒的构建及肿瘤生物学功能的研究
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作者 陈克清 于敏 +5 位作者 胡雪娜 冯玮 姜晓丹 尹丙姣 李卓娅 王晶 《中国肿瘤》 CAS 2011年第12期923-928,共6页
[目的]构建TNFR1及其突变体重组质粒,研究TNFR1胞浆段结构域与sTNF-α肿瘤生物学功能的关系。[方法]通过RT-PCR和重叠PCR,构建TNFR1-pEGFP-N1,Y236A-TNFR1-pEGFP-N1、ΔNSD-TNFR1-pEGFP-N1和ΔDD-TNFR1-pEGFP-N1。采用荧光显微镜观察TN... [目的]构建TNFR1及其突变体重组质粒,研究TNFR1胞浆段结构域与sTNF-α肿瘤生物学功能的关系。[方法]通过RT-PCR和重叠PCR,构建TNFR1-pEGFP-N1,Y236A-TNFR1-pEGFP-N1、ΔNSD-TNFR1-pEGFP-N1和ΔDD-TNFR1-pEGFP-N1。采用荧光显微镜观察TNFR1内吞、流式细胞术检测表达率、MTT比色法检测胞毒。[结果]获得了TNFR1全长基因及相关突变体的重组质粒,无任何其他点突变,移码及缺失突变。以这些质粒为工具进行生物学检测,提示野生型TNFR1可以介导sTNF-α内化,Y236A-TNFR1却不能,ΔNSD-TNFR1和ΔDD-TNFR1同样影响sTNF-α对靶细胞的胞毒作用。[结论]TNFR1内化结构域、NSD和DD功能域对sTNF-α杀伤肿瘤细胞的功能起着重要的作用。该研究有助于进一步认识sTNF-α介导的杀瘤效应与TNFR1的关系,并为深入研究tmTNF-α通过TNFR1介导的杀瘤机制提供重要的实验工具,从而为肿瘤基因治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体1(TNFR1) 分泌型肿瘤坏死因子(stnf-α) 内吞 胞毒 重组质粒
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