目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊...目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊毛乳头部位的表达情况。采用按基因组序列设计的引物,通过PCR克隆人SFRP1启动子片段,将之插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建不同截短片段的重组质粒并瞬时转染毛乳头细胞,测定质粒在毛乳头细胞中的启动子活性,找到核心启动子区域,运用生物信息学方法预测其潜在的转录因子结合位点。结果:免疫组化结果显示AGA患者毛乳头中SFRP1表达量显著高于非AGA患者。经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人SFRP1启动子及其截短片段重组质粒,并确定其启动子活性区域位于-100~+50bp区域内,且可能含有E2F3、HIF1A::ARNT、FOXC1、SP1等转录因子结合位点。结论:SFRP1在AGA患者毛乳头中表达呈阳性,人SFRP1启动子荧光素酶报告质粒构建成功,其转录因子结合位点初步确定,为进一步的研究奠定基础。展开更多
分泌性卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)是一种抗炎脂肪因子,它与糖尿病密切相关,具有抗糖尿病作用。将8周龄的C57BL/6J小鼠随机分为4组:普食-空载病毒组(SD+Ad-GFP组,n=10)、普食-SFRP5过表达病毒组(SD+Ad-SF...分泌性卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)是一种抗炎脂肪因子,它与糖尿病密切相关,具有抗糖尿病作用。将8周龄的C57BL/6J小鼠随机分为4组:普食-空载病毒组(SD+Ad-GFP组,n=10)、普食-SFRP5过表达病毒组(SD+Ad-SFRP5组,n=10)、高脂-空载病毒组(HFD+Ad-GFP组,n=10)、高脂-SFRP5过表达病毒组(HFD+Ad-SFRP5组,n=10),各组喂养13周后,利用定量PCR技术及Western-blot技术,分别检测小鼠肝脏糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)mRNA及蛋白质水平的变化情况,以及肝脏经典胰岛素信号通路的改变。结果显示:高脂喂养组中,SFRP5表达上调可使肝脏糖异生指标PEPCK和G6Pase的mRNA及蛋白质相对表达水平均降低(P<0.05),而且SFRP5过表达可使肝脏经典胰岛素信号通路指标胰岛素受体(InsR)及蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平增高(P<0.05)。以上结果说明,C57BL/6J小鼠体内过表达SFRP5可能通过降低肝脏糖异生,增强胰岛素信号通路,从而改善机体胰岛素抵抗状态。展开更多
目的:探讨口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p对口腔癌细胞的恶性表型的影响及作用机制。方法:收集口腔患者血清和细胞上清外泌体,透射电镜和纳米颗粒示踪分析观察和鉴定外泌体。RT-qPCR检测microRNA-582-3p(miR-582-3p)及分泌卷曲相关蛋白...目的:探讨口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p对口腔癌细胞的恶性表型的影响及作用机制。方法:收集口腔患者血清和细胞上清外泌体,透射电镜和纳米颗粒示踪分析观察和鉴定外泌体。RT-qPCR检测microRNA-582-3p(miR-582-3p)及分泌卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)的mRNA的表达。CCK-8、EdU实验、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞活性、增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-582-3p与SFRP1的相关性。Western blot检测外泌体相关标志物(HSP70、CD81、CD9、CD63、TSG101和Alix)及SFRP1蛋白表达。异种移植瘤实验验证口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p在口腔癌中的促进作用。结果:口腔癌患者组织、血清及血清和细胞外泌体中miR-193b-3p表达明显升高。口腔癌细胞外泌体miR-582-3p促进口腔癌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-582-3p可直接靶向SFRP1。过表达SFRP1减弱miR-582-3p对口腔癌细胞恶性表型的促进作用。体内实验证实外泌体miR-582-3p促进口腔癌肿瘤的生长。结论:口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p通过靶向SFRP1驱动口腔癌细胞的恶性表型。展开更多
文摘目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊毛乳头部位的表达情况。采用按基因组序列设计的引物,通过PCR克隆人SFRP1启动子片段,将之插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建不同截短片段的重组质粒并瞬时转染毛乳头细胞,测定质粒在毛乳头细胞中的启动子活性,找到核心启动子区域,运用生物信息学方法预测其潜在的转录因子结合位点。结果:免疫组化结果显示AGA患者毛乳头中SFRP1表达量显著高于非AGA患者。经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人SFRP1启动子及其截短片段重组质粒,并确定其启动子活性区域位于-100~+50bp区域内,且可能含有E2F3、HIF1A::ARNT、FOXC1、SP1等转录因子结合位点。结论:SFRP1在AGA患者毛乳头中表达呈阳性,人SFRP1启动子荧光素酶报告质粒构建成功,其转录因子结合位点初步确定,为进一步的研究奠定基础。
文摘分泌性卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)是一种抗炎脂肪因子,它与糖尿病密切相关,具有抗糖尿病作用。将8周龄的C57BL/6J小鼠随机分为4组:普食-空载病毒组(SD+Ad-GFP组,n=10)、普食-SFRP5过表达病毒组(SD+Ad-SFRP5组,n=10)、高脂-空载病毒组(HFD+Ad-GFP组,n=10)、高脂-SFRP5过表达病毒组(HFD+Ad-SFRP5组,n=10),各组喂养13周后,利用定量PCR技术及Western-blot技术,分别检测小鼠肝脏糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)mRNA及蛋白质水平的变化情况,以及肝脏经典胰岛素信号通路的改变。结果显示:高脂喂养组中,SFRP5表达上调可使肝脏糖异生指标PEPCK和G6Pase的mRNA及蛋白质相对表达水平均降低(P<0.05),而且SFRP5过表达可使肝脏经典胰岛素信号通路指标胰岛素受体(InsR)及蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平增高(P<0.05)。以上结果说明,C57BL/6J小鼠体内过表达SFRP5可能通过降低肝脏糖异生,增强胰岛素信号通路,从而改善机体胰岛素抵抗状态。
文摘目的:探讨口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p对口腔癌细胞的恶性表型的影响及作用机制。方法:收集口腔患者血清和细胞上清外泌体,透射电镜和纳米颗粒示踪分析观察和鉴定外泌体。RT-qPCR检测microRNA-582-3p(miR-582-3p)及分泌卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)的mRNA的表达。CCK-8、EdU实验、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞活性、增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-582-3p与SFRP1的相关性。Western blot检测外泌体相关标志物(HSP70、CD81、CD9、CD63、TSG101和Alix)及SFRP1蛋白表达。异种移植瘤实验验证口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p在口腔癌中的促进作用。结果:口腔癌患者组织、血清及血清和细胞外泌体中miR-193b-3p表达明显升高。口腔癌细胞外泌体miR-582-3p促进口腔癌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-582-3p可直接靶向SFRP1。过表达SFRP1减弱miR-582-3p对口腔癌细胞恶性表型的促进作用。体内实验证实外泌体miR-582-3p促进口腔癌肿瘤的生长。结论:口腔癌细胞来源外泌体miR-582-3p通过靶向SFRP1驱动口腔癌细胞的恶性表型。
