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羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析 被引量:21
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作者 张克山 何继军 +7 位作者 尚佑军 郭建宏 郑海学 田宏 靳野 刘永杰 王光祥 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1154-1157,共4页
为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV... 为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,自病料中扩增出特异性目的ORFVB2L基因片段(GenBank序列号GU320351)。结果表明该病例为黑山羊传染性脓疱病毒引起,序列遗传进化分析表明该病毒和2007年分离于中国台湾的毒株(DQ904351)遗传关系最近,和印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的ORFV同属于一个进化分支。本研究为ORFV分子流行病学研究积累了资料。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 鉴定 分子特征分析
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2017年国内大型鸡场分离的H9N2禽流感病毒的遗传进化和分子特征分析 被引量:13
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作者 孙王杨吉 朱睿 +1 位作者 张建军 石火英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1513-1525,共13页
H9N2禽流感病毒自1994年在广东首次报道暴发以来,已在国内广泛地流行,给养禽业带来了极大的损失,甚至威胁着人类的健康。为了解2017年国内H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化和分子特征变化,本研究从江苏、安徽、山东等地区的大型鸡场中分离... H9N2禽流感病毒自1994年在广东首次报道暴发以来,已在国内广泛地流行,给养禽业带来了极大的损失,甚至威胁着人类的健康。为了解2017年国内H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化和分子特征变化,本研究从江苏、安徽、山东等地区的大型鸡场中分离到了10株H9N2亚型禽流感病毒。对10株分离株的基因分析表明,所有分离株均属于在2013年后占主导地位的G57型,由BJ/94系的HA、NA和NS基因,DK1系的PB2基因,F/98系的PB1,PA和NP基因以及G1/97系的M基因的四重组病毒组成,并且分离株的EID50显著低于早期分离的H9N2禽流感病毒。10株分离株中有7株受体结合位点的198位发生了A到T,或者A到V的替换,并发生糖基化位点在218位的缺失,313位的增加。与近5年已经发表的流行株HA蛋白比较,所有分离株的抗原位点均发生了S127R、S183N、D216E、T220I、Q235M、S283R突变,NA基因在61~63位缺失NIT;表明分离株的抗原发生了变异。而分离株内部基因PB2上的K318R突变,PB1上的L13P突变,PA上的K356R突变、Q/T/S400P突变,NS上的E227K突变,NP上的D34S、K398Q突变,M1上的V15I突变以及M2上的I28V、L55F突变,使分离株更易感染哺乳动物,说明必需要继续加强H9N2禽流感病毒的监测,密切关注其对人类可能造成的影响。特别是10株分离株中首次出现的NA基因的E433D突变和PB2基因的E627V突变是否会给H9N2禽流感病毒增加新的生物学特性还有待进一步研究。 展开更多
关键词 H9N2亚型 禽流感病毒 遗传进化 分子特征分析
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儿童血管瘤样纤维组织细胞瘤临床病理学及分子特征分析
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作者 冯肖 陶菁 +3 位作者 王玉 龙安予 何乐健 张楠 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期483-485,共3页
目的探讨血管瘤样纤维组织细胞瘤的临床病理学及分子特征。方法收集河南省儿童医院病理科2018—2022年血管瘤样纤维组织细胞瘤5例,总结分析临床特点、组织学及免疫组织化学结果,荧光原位杂交(FISH)及荧光PCR-毛细管电泳测序法检测相应... 目的探讨血管瘤样纤维组织细胞瘤的临床病理学及分子特征。方法收集河南省儿童医院病理科2018—2022年血管瘤样纤维组织细胞瘤5例,总结分析临床特点、组织学及免疫组织化学结果,荧光原位杂交(FISH)及荧光PCR-毛细管电泳测序法检测相应基因改变并随访。结果5例患儿中,男患儿3例,女患儿2例,年龄3~10岁。发病部位1例位于腋窝淋巴结区域,余4例位于皮下软组织。临床表现为进展缓慢的无痛性肿块,超声显示低回声包块,均予手术完整切除送病理检查。肿瘤最大径1.0~3.5 cm,切面灰白、质中,实性或囊性。组织学肿瘤均有纤维性包膜及淋巴细胞增生、聚集。肿瘤细胞梭形或卵圆形,编织状或弥漫片状分布,4例中可见核分裂象。囊性区未见上皮衬覆,囊内可见大量红细胞或片状坏死。免疫组织化学染色显示5例均表达结蛋白,4例表达CD99及平滑肌肌动蛋白(SMA),1例表达间变性淋巴瘤激酶(ALK,D5F3),Ki-67阳性指数4例约5%,1例约40%。FISH检测结果提示5例均存在EWSR1基因断裂,其中4例同时伴有CREB1基因断裂,表达ALK(D5F3)蛋白的病例不存在ALK基因断裂及突变。3例获随访资料,随访6~60个月,均未复发。结论血管瘤样纤维组织细胞瘤属儿童罕见的中间型间叶源性肿瘤,常发生在头颈部、四肢躯干皮下软组织,病理形态多样,免疫表型常表达结蛋白、SMA及CD99,分子检测有助于明确诊断。偶见ALK蛋白表达。 展开更多
关键词 儿童血管瘤 纤维组织细胞瘤 ALK 临床病理学 分子特征分析
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江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征分析
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作者 孔筱筱 韩悦 +2 位作者 周璐 程晓庆 董晨 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期56-61,共6页
目的分析江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征,进而评估其潜在的致病性,为感染性腹泻的监测与防控提供依据。方法采用全基因组测序技术对江苏省某监测点分离的家畜来源的37株肠致病性大肠埃希菌(EPEC)菌株进行特征... 目的分析江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征,进而评估其潜在的致病性,为感染性腹泻的监测与防控提供依据。方法采用全基因组测序技术对江苏省某监测点分离的家畜来源的37株肠致病性大肠埃希菌(EPEC)菌株进行特征性分析。结果本地家畜来源的EPEC均为非典型EPEC(aEPEC),其血清型多样,携带多种与腹泻相关的毒力基因,有9种ST型且具有区域性流行特征,eae基因包含有5种亚型,β1为优势亚型,其在腹泻病人中也最为常见。结论aEPEC对公众健康构成潜在威胁,应在感染性腹泻的监测工作中,加强对家畜粪便及养殖环境的监测。 展开更多
关键词 肠致病性大肠埃希菌 感染性腹泻 分子特征分析
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马流产沙门氏菌新疆分离株FliC基因的克隆及分子特征分析 被引量:4
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作者 李阳 杨康 +1 位作者 张宝江 苏艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期20-24,共5页
为了解马流产沙门氏菌新疆分离株的分子特征及其鞭毛蛋白FliC基因的结构与功能,本试验运用PCR技术扩增了分离鉴定的2株马流产沙门氏菌新疆株FliC基因,克隆测序并对其进行了生物信息学分析。分析结果显示,成功获得了626bp的FliC基因(Gen... 为了解马流产沙门氏菌新疆分离株的分子特征及其鞭毛蛋白FliC基因的结构与功能,本试验运用PCR技术扩增了分离鉴定的2株马流产沙门氏菌新疆株FliC基因,克隆测序并对其进行了生物信息学分析。分析结果显示,成功获得了626bp的FliC基因(GenBank登录号:KJ486797、KJ486798)。对分离的2株马流产沙门氏菌FliC基因的核苷酸序列同源性分析结果显示,FliC基因新疆分离株与GenBank登录的其他沙门氏菌分离株的核苷酸序列同源性为49.6%~100.0%。该结果表明马流产沙门氏菌的FliC基因在该菌进化和流行的过程中是保守的,本研究将为分析该病的分子流行和进一步利用FliC基因防制该菌引起的感染提供试验基础。 展开更多
关键词 马流产沙门氏菌 FliC基因 克隆 分子特征分析
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5株野生鸟类Ⅸ型NDV分离株HN基因的分子特征分析 被引量:4
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作者 张鹏 马静 杨增岐 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第6期1-6,共6页
探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶基因(HN基因)的分子进化特点,为科学防控新城疫(Newcastle disease,ND)提供依据。【方法】对2008年从陕西省周至县楼观台及其周边地区分离的5个野生鸟类NDV毒株的H... 探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶基因(HN基因)的分子进化特点,为科学防控新城疫(Newcastle disease,ND)提供依据。【方法】对2008年从陕西省周至县楼观台及其周边地区分离的5个野生鸟类NDV毒株的HN基因进行扩增与测序,与8个国内外不同时期已发表的NDV毒株HN基因进行核苷酸和推导的氨基酸序列的遗传变异分析及分子特性研究。【结果】所有分离株与国内参考强毒株F48E9和国外参考强毒株Herts-33在HN基因C末端终止密码子的位置相同,符合强毒株的特征。从核苷酸和氨基酸同源性来看,分离株与F48E9的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.6%~99.8%和99.1%~99.7%,与LaSota、B1和clone-30的同源性分别为90.2%~91.8%和87.9%~88.5%,与ZJ1的同源性为84.8%~85.0%和89.3%~89.7%;从系谱进化分析来看,这5个毒株与F48E9关系较近,同属一支,与LaSota、ZJ1、Herts-33等疫苗株和参考毒株关系较远。【结论】该生态区NDV野生鸟类分离株与目前流行的基因Ⅶ型毒株和传统疫苗毒株的关系较远,且具有强毒株的分子特征,因此必须加强该地区野生鸟类新城疫病毒的监测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 分子特征分析
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低致病性与高致病性H7N9亚型禽流感病毒分子特征及受体结合能力分析 被引量:3
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作者 薛玉涵 任助 +9 位作者 商雨 唐国毅 贾妙妙 鲁岳峰 李琼琼 李慧敏 罗青平 温国元 潘兹书 赵宗正 《湖北农业科学》 2020年第7期212-216,F0003,共6页
对2017年从鸡病料中分离到的2株H7N9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)A/chicken/Hubei/093/2017(H7N9)和A/chicken/Hubei/207/2017(H7N9)(CK93和CK207)进行了全基因组测序。对血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuramini... 对2017年从鸡病料中分离到的2株H7N9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)A/chicken/Hubei/093/2017(H7N9)和A/chicken/Hubei/207/2017(H7N9)(CK93和CK207)进行了全基因组测序。对血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)序列保守性、HA糖基化位点、NA耐药位点和6个内部基因的关键氨基酸位点进行了分析,同时测定了2株毒株的受体结合能力。结果显示,CK93毒株HA裂解位点为PEIPKGR↓GLF,为低致病性AIV特征;而CK207毒株裂解位点为PKP⁃KRTAR↓GLF,为高致病性AIV特征。HA第226位氨基酸在CK93毒株为亮氨酸(226L),而在CK207毒株为谷氨酰胺(226Q)。但受体结合能力测定发现,CK93和CK207都具有结合α-2,3唾液酸受体和α-2,6唾液酸受体的特性,说明Q226L并非影响病毒受体结合特性的决定性因素。本研究结果提示应加强对H7N9亚型禽流感病毒变异监测预防其突变可能造成流行的风险。 展开更多
关键词 H7N9亚型禽流感病毒 分子特征分析 受体结合特性
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不同动物源脑心肌炎病毒的分离、鉴定和全基因组序列分析 被引量:3
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作者 常洪涛 刘慧敏 +5 位作者 陈陆 杨霞 赵军 王新卫 姚惠霞 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1442-1447,共6页
为研究脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)对不同动物宿主的感染情况。本试验应用改进的"细胞接种与RT-PCR方法相结合"技术,成功分离到国内首株地方土猪源EMCV、首株家养野猪源EMCV、1株鼠源EMCV和3株良种猪源EMCV,并... 为研究脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)对不同动物宿主的感染情况。本试验应用改进的"细胞接种与RT-PCR方法相结合"技术,成功分离到国内首株地方土猪源EMCV、首株家养野猪源EMCV、1株鼠源EMCV和3株良种猪源EMCV,并进行了全基因组序列测定和分析。结果显示,6株EMCV分离毒的基因组全长从7 724~7 735bp不等,ORF长度均为6 879bp,彼此间核苷酸同源性为99.3%~99.8%,与其他不同动物源EMCV参考毒株的同源性为79.9%~99.9%,与国内猪源、鼠源分离毒的同源性均在99.4%以上;各基因片段中,以VP1和2A变异幅度最大,VP2和3D最为保守;基于EMCV全基因组、ORF和VP1基因序列绘制的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G3 3个群,猪源EMCV主要分布在G1、G2群,鼠源EMCV在G1、G3群中均有分布;6株EMCV分离毒与其他国内参考毒株同属于G1群,但分布并不完全集中。结果表明,地方土猪和家养野猪可感染EMCV并引起发病,提醒在进行地方品种养殖和野生动物家养时要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;鼠在良种猪、家养野猪和地方土猪EMCV之间的交叉感染、传播与流行中起到重要媒介作用;不同EMCV地方流行株间存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在感染不同动物时可能会发生某些突变,以适应新的宿主。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 不同动物宿主 RT-PCR 全基因组 分子特征分析
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牛冠状病毒陕西流行株N和HE基因序列分析及编码蛋白分子特征预测 被引量:2
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作者 宋博利 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2020年第8期10-14,共5页
为了解牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)陕西流行株的N和HE基因的遗传变异情况及分子结构特征,便于以后制备检测抗原。利用GenBank收录的BCoV参考株的N和HE基因序列,设计合成特异性PCR引物,以陕西省某牛场BCoV阳性样本基因组为模板... 为了解牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)陕西流行株的N和HE基因的遗传变异情况及分子结构特征,便于以后制备检测抗原。利用GenBank收录的BCoV参考株的N和HE基因序列,设计合成特异性PCR引物,以陕西省某牛场BCoV阳性样本基因组为模板,分别对N和HE基因进行扩增、测序、序列分析及预测编码蛋白分子特征。结果表明,成功克隆了BCoV陕西流行株的N和HE全基因序列;核苷酸序列分析表明,陕西流行株N基因与国内外已报道的BCoV核苷酸同源性在98.38%~99.54%之间,HE基因核苷酸同源性在97.01%~98.09%之间。研究结果为BCoV陕西流行株分子生物学特性研究提供基础资料,为进一步研制BCoV抗体ELISA检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 N基因 HE基因 序列分析 分子特征分析
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绵羊肺腺瘤病毒SD株的鉴定及分子特征分析 被引量:2
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作者 韩云珍 肖雪梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第12期31-32,36,I0001,共4页
采用组织病理学和分子生物学方法对山东某地区疑似绵羊肺腺瘤病毒感染的肺组织进行观察,H.E.染色可见肺泡上皮细胞增生,呈乳头状突入肺泡腔,周围肺泡气肿,肺间质可见淋巴细胞浸润,符合绵羊肺腺瘤病毒感染的病理学特征;PCR检测及序列分... 采用组织病理学和分子生物学方法对山东某地区疑似绵羊肺腺瘤病毒感染的肺组织进行观察,H.E.染色可见肺泡上皮细胞增生,呈乳头状突入肺泡腔,周围肺泡气肿,肺间质可见淋巴细胞浸润,符合绵羊肺腺瘤病毒感染的病理学特征;PCR检测及序列分析表明,从该肺组织中扩增出了绵羊肺腺瘤特异性env基因,全长2 249bp,与内源性绵羊肺腺瘤病毒南非株enJS56A1(AF153615)的核苷酸同源性为98.9%,且处于同一个进化分支,而与外源性绵羊肺腺瘤病毒美国株JSRv21(AF105220)的核苷酸同源性仅为81%,提示SD株属于内源性肺腺瘤病毒。本次研究为绵羊肺腺瘤病毒的分子流行病学研究积累了资料,也为实验室确诊该病毒病提供了方法参考。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病毒 鉴定 分子特征分析
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蓖麻耐盐基因RcKUP 7克隆及分子特征分析 被引量:2
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作者 张继星 丛娇娇 +1 位作者 耿学军 刘海臣 《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》 2018年第4期311-318,共8页
本试验以蓖麻叶片为材料,克隆K+吸收蛋白基因Rc KUP 7,并对其进行生物信息学分析.结果显示,Rc KUP 7基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸,蛋白分子量为95.149k D,p I值5.15.通过氨基酸组分分析得到含量最... 本试验以蓖麻叶片为材料,克隆K+吸收蛋白基因Rc KUP 7,并对其进行生物信息学分析.结果显示,Rc KUP 7基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸,蛋白分子量为95.149k D,p I值5.15.通过氨基酸组分分析得到含量最高的是亮氨酸(Leu),占该蛋白总摩尔质量的11.74%和分子质量的11.96%;含量最低的氨基酸为色氨酸(Trp),其摩尔质量与分子质量分别占总蛋白的1.16%和1.84%.进行多重序列比对和系统发育树分析可得出与麻枫树、木薯、橡胶树亲缘性较近.通过保守区蛋白分析可以得出该蛋白为钾离子转运蛋白家族的一员.通过亲水疏水性分析,可知该蛋白为疏水性蛋白.跨膜结构分析显示该蛋白具有10个蛋白跨膜结构,是典型的跨膜蛋白,并预测了该蛋白的三级结构. 展开更多
关键词 蓖麻 钾离子转运蛋白 基因克隆 分子特征分析
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新城疫病毒SDWF2003株F基因的克隆与分子特征分析 被引量:2
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作者 肖跃强 沈志强 +4 位作者 刘吉山 管宇 韩玲 郭广君 王金良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期14-17,共4页
将新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)SDWF2003株经10日龄SPF鸡胚增殖后,提取病毒基因组RNA,并以此为模板,RT-PCR扩增获得与F基因预期大小一致的DNA片段,亚克隆到pMD18-T载体并酶切鉴定正确后进行测序。软件分析显示:基因全长1662... 将新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)SDWF2003株经10日龄SPF鸡胚增殖后,提取病毒基因组RNA,并以此为模板,RT-PCR扩增获得与F基因预期大小一致的DNA片段,亚克隆到pMD18-T载体并酶切鉴定正确后进行测序。软件分析显示:基因全长1662bp,编码553个氨基酸,裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株氨基酸序列结构;此分离毒株属于基因Ⅶ型,该型F蛋白第101位、第121位特征性氨基酸残基分别是K(赖氨酸)和V(缬氨酸),而本研究分离病毒F蛋白第101位、第121位分别是Q(谷氨酰胺)和V(缬氨酸);同源性比较,与LaSota、F48E9、Ch99核苷酸同源性分别为84.4%、87.1%、98.9%,氨基酸同源性分别为88.3%、91.7%、98.4%。 展开更多
关键词 NDV F基因 RT PCR 分子特征分析
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山羊流产嗜衣原体广东株的鉴定及分子特征分析 被引量:2
13
作者 王玲玲 刘永杰 +2 位作者 郑海学 张克山 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期17-20,共4页
目的确诊疑似羊衣原体感染的病例,分析羊衣原体分子特征。方法从广东某羊场采集疑似羊流产嗜衣原体病例的子宫内羊水,采用现场病理解剖观察、病料触片吉姆萨染色、显微镜观察、特异性目的基因ompA扩增和序列测定及遗传进化关系分析等方... 目的确诊疑似羊衣原体感染的病例,分析羊衣原体分子特征。方法从广东某羊场采集疑似羊流产嗜衣原体病例的子宫内羊水,采用现场病理解剖观察、病料触片吉姆萨染色、显微镜观察、特异性目的基因ompA扩增和序列测定及遗传进化关系分析等方法进行了该病例的确诊及病原分子特征分析。结果现场解剖发现和羊流产嗜衣原体感染症状极其吻合,吉姆萨染色后显微镜观察可见衣原体特有的特征,自病料中扩增出特异性目的基因片段,表明该病例为山羊感染流产嗜衣原体引起。基因序列遗传进化分析表明该流产嗜衣原体(GenBank登录号KP984478)与2013年公布的中国贵州分离株KF130872遗传关系最近(同源性为99.1%),属于同一进化分支,与2002年公布的德国分离株AJ004873遗传关系最远(同源性为98.2%)。结论本研究为山羊流产嗜衣原体的最新流行病学动态奠定了基础。 展开更多
关键词 流产嗜衣原体 鉴定 分子特征分析
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牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析 被引量:1
14
作者 张克山 刘永杰 +2 位作者 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期598-601,共4页
为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗... 为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性,建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊该病例为牛狂犬病,遗传进化分析表明本研究鉴定的狂犬病毒和2006年及2007年国内狗源狂犬病毒(DQ666306、DQ866121)、猪源狂犬病毒(DQ496219)及人源狂犬病毒(EF556197)的遗传关系较近。本文为研究牛狂犬病毒分子流行病学积累了资料。 展开更多
关键词 狂犬病毒 分离鉴定 分子特征分析
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家养野猪脑心肌炎病毒的分离、鉴定及全基因组序列分析 被引量:1
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作者 常洪涛 刘慧敏 +5 位作者 赵军 陈陆 杨霞 王新卫 姚惠霞 王川庆 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期793-796,共4页
目的:分离家养野猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus ,EMCV),作全基因组序列测定及与相关物种同源性比较。方法用改进的“细胞接种与RT-PCR方法相结合”技术,成功分离到国内首株家养野猪EMCV JZ1202株,并对其全基因组序... 目的:分离家养野猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus ,EMCV),作全基因组序列测定及与相关物种同源性比较。方法用改进的“细胞接种与RT-PCR方法相结合”技术,成功分离到国内首株家养野猪EMCV JZ1202株,并对其全基因组序列进行测定和分子特征分析。结果分离毒的基因组全长为7735 bp ,与国内外不同动物源EMCV参考毒株的核苷酸同源性为81.2%~99.9%,与国内猪源EMCV分离毒的同源性高达99.4%以上。基于EMCV全基因组、ORF和VP1基因序列绘制的系统发育进化树显示,EMCV可分为 G1、G2和G33个群,JZ1202株与其他国内参考毒株同属于G1群。结论结果证实,家养野猪可感染EMCV并引起发病,提醒作野生动物养殖要考虑EMCV的传播;EMCV存在较大的地域差异,在家养野猪和鼠之间可能存在着交叉感染;EMCV在感染家养野猪时可能发生个别氨基酸突变,以适应不同的猪种。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 家养野猪 全基因组 分子特征分析
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两株H3N2亚型猪流感病毒的遗传进化及分子特征分析 被引量:1
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作者 张勇 宋亚芬 +5 位作者 陈玲 张兵 张敏 王静文 杨承槐 蒋桃珍 《中国兽药杂志》 2020年第6期1-13,共13页
为了对2012年广州规模化养猪场疑似流感病料中分离鉴定的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/1519/2012(H3N2)(简称GD1519)和A/swine/Guangdong/1520/2012(H3N2)(简称GD1520)进行遗传进化及分子特征分析,对两株病毒进行了全基因组的测序分... 为了对2012年广州规模化养猪场疑似流感病料中分离鉴定的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/1519/2012(H3N2)(简称GD1519)和A/swine/Guangdong/1520/2012(H3N2)(简称GD1520)进行遗传进化及分子特征分析,对两株病毒进行了全基因组的测序分析。通过对其8个基因片段的基因来源进行分析,构建系统进化树,遗传进化分析结果显示GD1519 HA、PB2、PA和NP基因片段均来源于近期人源H3N2亚型Moscow/99-like亚分支;其NA和PB1基因片段来源于早期人源H3N2亚型Victoria/75-like亚分支;其M和NS基因片段来源于近期人源H3N2亚型New York/99-like亚分支。GD1520病毒的HA基因片段来源于近期人源H3N2亚型Moscow/99-like亚分支;其NA和PB1基因来源于近期人源H3N2亚型New York/99-like亚分支;其PB2、PA、NP、M和NS基因片段均来源于早期人源H3N2亚型Victoria/75-like亚分支。分析结果暗示2株病毒可能均由不同时期的类人源H3N2亚型流感病毒间基因重排而产生的新型H3N2亚型猪流感病毒。本研究结果进一步证明猪可能是不同来源流感病毒的基因“混合器”,因此开展猪流感病毒相关分子流行病学研究具有重要的公共卫生意义。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H3N2亚型 遗传进化分析 分子特征分析
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1株H7N9亚型禽流感病毒的遗传进化和分子特征分析
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作者 郭康康 崔欢 +4 位作者 张诚 张博 陈立功 刘聚祥 董世山 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期114-119,共6页
对1株H7N9亚型禽流感毒株A/environment/Hebei/621/2017(H7N9)简称EN621进行基因测序和序列分析,研究其遗传进化趋势和分子生物学特征。结果显示,该毒株血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)分别与人源流感毒株的HA... 对1株H7N9亚型禽流感毒株A/environment/Hebei/621/2017(H7N9)简称EN621进行基因测序和序列分析,研究其遗传进化趋势和分子生物学特征。结果显示,该毒株血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)分别与人源流感毒株的HA和NA属于同一进化支进化而来,EN621毒株HA蛋白的裂解位点存在多个连续碱性氨基酸,符合典型高致病性AIV特征;HA蛋白上有4个糖基化位点与人源流感毒株HA蛋白糖基化位点一致,且第226位氨基酸为Q,优先与禽类α-2,3唾液酸受体结合;NA蛋白上有6个潜在糖基化位点与人源流感毒株NA蛋白糖基化位点一致;NP蛋白第184氨基酸位点由A突变为K,对于AIV的复制和致病性有着密切联系。本研究提示EN621毒株存在感染人的潜在可能性,应加强H7N9亚型禽流感病毒的监测,建立相应的防范机制,保障公共安全。 展开更多
关键词 H7N9 AIV 分子特征分析 潜在糖基化位点 遗传进化分析
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不同猪源脑心肌炎病毒的分离、鉴定和全基因组序列分析
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作者 常洪涛 刘慧敏 +5 位作者 陈陆 杨霞 赵军 王新卫 姚惠霞 王川庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期967-973,共7页
为研究脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)对不同猪种的感染情况,本研究应用改进的'细胞接种与RT-PCR方法相结合'技术,成功分离到中国国内首株地方土猪源EMCV、首株家养野猪源EMCV和3株良种猪源EMCV,并进行了全基... 为研究脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)对不同猪种的感染情况,本研究应用改进的'细胞接种与RT-PCR方法相结合'技术,成功分离到中国国内首株地方土猪源EMCV、首株家养野猪源EMCV和3株良种猪源EMCV,并进行了全基因组序列测定和分析。结果显示,5株EMCV分离毒株的基因组全长7 724~7 735bp,彼此间核苷酸相似性为99.3%~99.8%,与其他不同动物源EMCV参考毒株的相似性为79.9%~99.9%,与国内猪源、鼠源毒株的相似性均在99.4%以上;各基因片段中,以VP1和2A变异幅度最大,VP2和3D最为保守;基于EMCV全基因组、ORF和VP1基因序列绘制的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G33个群,猪源EMCV主要分布在G1群和G2群,鼠源EMCV在G1群和G3群中均有分布;5株EMCV分离毒株与其他国内参考毒株同属于G1群。研究结果证实,地方土猪和家养野猪可感染EMCV并引起发病,提醒在进行地方品种养殖和野生动物家养时要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;鼠在不同猪种间交叉感染EMCV时,可能起到重要媒介作用;EMCV流行毒株存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在感染不同猪种时可能会发生某些氨基酸突变,以适应新的宿主。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 不同猪种 RT-PCR 全基因组 分子特征分析
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鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型磷酸二酯酶基因的发现及其分子特征分析
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作者 陈虹 程安春 +1 位作者 汪铭书 朱德康 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期436-440,共5页
以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对 RA 血清1型 CH-1株表达型 DNA 文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp 的插入 DNA 片段。运... 以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对 RA 血清1型 CH-1株表达型 DNA 文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp 的插入 DNA 片段。运用 NCBI 的 BLASTN、BLASTP、ORF Finder、Conserved Domains、EMBL 的 FASTA 等程序对该片段中的一个命名为 ORF1689的开放阅读框架进行了全面的生物信息学分析。结果显示ORF1689起始密码子上游存在核糖体结合位点,完整 ORF 含1689bp,编码562个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为59.5kD,等电点为5.82。ORF1689具有 phosphodiest 蛋白家族的保守区域,与丙杆菌属的 Caulobacter sp.K31、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)、Sphin-gopyxis alaskensis 和 Novosphingobium aromaticivorans 的Ⅰ型磷酸二酯酶基因的氨基酸序列同源性分别为49.283%、38.716%、38.693%和38.313%,表明该基因是一种新的Ⅰ型磷酸二酯酶基因。该研究结果对阐明Ⅰ型磷酸二酯酶的生物学功能和 RA 的生理特性与致病机理提供了理论基础和实验数据。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 Ⅰ型磷酸二酯酶 分子特征分析
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地方土猪脑心肌炎病毒的分离、鉴定及全基因组序列分析
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作者 常洪涛 刘慧敏 +6 位作者 贺秀媛 赵军 陈陆 王新卫 杨霞 姚惠霞 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期375-381,共7页
脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种自然疫源性人兽共患病病原,但有关地方土猪EMCV的分离、鉴定及全基因组研究等尚未见报道。本研究应用"细胞接种与RT-PCR方法相结合"技术,成功分离到国内首株淮南猪源EMCV,命名... 脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种自然疫源性人兽共患病病原,但有关地方土猪EMCV的分离、鉴定及全基因组研究等尚未见报道。本研究应用"细胞接种与RT-PCR方法相结合"技术,成功分离到国内首株淮南猪源EMCV,命名为HNXX13株,并对其进行了系统鉴定和全基因组序列测定分析。结果显示,该病毒粒子大小约为24~30nm,呈圆形,不耐酸和热,对胰蛋白酶敏感,对氯仿不敏感,二价阳离子没有保护作用,所感染BHK-21细胞的细胞浆内可见到特异的绿色荧光;基因组全长为7 725bp(GenBank登录号:KF771002),与不同动物源参考毒株的核苷酸同源性为81.0%~99.9%,与国内猪源参考毒株同源性为99.5%以上;基于全基因组序列和ORF的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G3 3个群,HNXX13株与国内其他参考毒株同属于G1群。研究结果表明,地方土猪可感染EMCV并引起发病,丰富了我国EMCV分子流行病学资料,并提醒在进行地方品种养殖中要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;EMCV存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在地方土猪和鼠之间可能存在着交叉感染与传播;EMCV在感染地方土猪时可能会发生个别氨基酸的突变,以适应不同的猪种。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 地方土猪 RT-PCR 全基因组 分子特征分析
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