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导入β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因可育油菜及其抗菌核病的研究 被引量：67
1
作者 蓝海燕 王长海 +4 位作者 张丽华 刘桂珍 王岚兰 陈正华 田颖川 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期142-146,共5页
利用农杆菌转化法,将组成型表达β1,3葡聚糖酶及几丁质酶基因的双价植物表达载体pBLGC转化优质甘蓝型油菜品种H165,并得到了抗卡那霉素(Kanamycin,Kan)的再生植株。我们对所得到的抗Kan的再生苗进行了初步分子生物学检测,结果表明,在K15... 利用农杆菌转化法,将组成型表达β1,3葡聚糖酶及几丁质酶基因的双价植物表达载体pBLGC转化优质甘蓝型油菜品种H165,并得到了抗卡那霉素(Kanamycin,Kan)的再生植株。我们对所得到的抗Kan的再生苗进行了初步分子生物学检测,结果表明,在K15(Kan15mg/L)培养基上的绿苗中有30%为PCR阳性植株,而在K25(Kan10mg/L)培养基上的绿苗有53%的阳性率。对部分PCR阳性的转基因植株进行了点杂交分析,结果均表现出较强的杂交信号,这初步说明外源基因已整合到油菜基因组中。转基因植株的活体接种油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorium)试验表明,部分转基因植株比对照显示较强抗病性。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 转基因油菜 抗菌核病 农杆菌介导
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向大豆导入几丁质酶基因的初步研究 被引量：44
2
作者 徐香玲 邹联沛 +1 位作者 刘伟华 李集临 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期101-107,共7页
以根癌农杆菌的Ｔｉ质粒为介导，将抗真菌病的几丁质酶基因，导入黑龙江省栽培大豆－东农３７号，吉林２８号等１４个品种。从子叶节和下胚轴诱导出丛生芽，并再生植株，经ＰＣＲ和ＤＮＡ分子杂交检测，确认为转化植株。用花粉管通道导... 以根癌农杆菌的Ｔｉ质粒为介导，将抗真菌病的几丁质酶基因，导入黑龙江省栽培大豆－东农３７号，吉林２８号等１４个品种。从子叶节和下胚轴诱导出丛生芽，并再生植株，经ＰＣＲ和ＤＮＡ分子杂交检测，确认为转化植株。用花粉管通道导入法，直接导入几丁质酶基因，共获２２３粒种子，经ＰＣＲ和ＤＮＡ分子杂交检测的１１３株大豆幼苗中，有７株呈阳性反应，证明几丁质酶基因已导入并整合到大豆的基因组中。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 转基因植株 大豆 基因
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获得抗稻瘟病和纹枯病的转多基因水稻 被引量：43
3
作者 冯道荣 许新萍 +3 位作者 范钦 李宝健 雷财林 凌忠专 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期293-300,共8页
将多个抗真菌病基因连同筛选基因 hpt一起导入一水稻品种中 ,共获得 4 9个独立的整合有 1～ 4个抗真菌病基因的转基因植株系。转基因植株中几丁质酶的酶活均高于非转化对照植株 ,且转多个几丁质酶基因或与 β- 1,3-葡聚糖酶基因一起的... 将多个抗真菌病基因连同筛选基因 hpt一起导入一水稻品种中 ,共获得 4 9个独立的整合有 1～ 4个抗真菌病基因的转基因植株系。转基因植株中几丁质酶的酶活均高于非转化对照植株 ,且转多个几丁质酶基因或与 β- 1,3-葡聚糖酶基因一起的转基因植株较转单个几丁质酶基因的植株有更高的酶活性。抗病试验表明 ,这些不同组合的 R2 代转基因植株对纹枯病和稻瘟病的抗性较非转化原种对照都有了提高。 展开更多
关键词 水稻 几丁质酶基因 Β-1 3-葡聚糖酶基因 稻瘟病 纹枯病 抗生 转基因植株
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几丁质酶-葡聚糖酶双价基因导入滇型杂交稻恢复系提高稻瘟病抗性的研究 被引量：34
4
作者 许明辉 唐祚舜 +5 位作者 谭亚玲 田颖川 李成云 张树华 陈正华 田文忠 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期330-334,共5页
将含有菜豆 (Phaseoluslimensis)几丁质酶基因和烟草 (Nicotianatabacum) β 1,3 葡聚糖酶基因的pBLGC(16 5kb)质粒用基因枪法导入滇型杂交稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)恢复系“南 2 9”中 ,总计获得 93个转化再生植株 ,以β 1,3... 将含有菜豆 (Phaseoluslimensis)几丁质酶基因和烟草 (Nicotianatabacum) β 1,3 葡聚糖酶基因的pBLGC(16 5kb)质粒用基因枪法导入滇型杂交稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)恢复系“南 2 9”中 ,总计获得 93个转化再生植株 ,以β 1,3 葡聚糖酶基因制备探针对T1 代株系进行Southern杂交分析 ,17个株系为杂交阳性 ,证实外源基因完整结构已整合到水稻基因组中 ;连续多代的PCR追踪检测证实外源基因已遗传至T4 代 ;对所获得的 6个PCR检测阳性T4代品系进行了稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)生理小种接种鉴定和稻瘟病大田诱发鉴定 ,结果表明 ,转基因品系对稻瘟病的抗性较受体对照大幅度提高 ,获得了稻瘟病新抗源 ,但不同品系稻瘟病抗性并不相同。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 葡聚糖酶基因 遗传转化 杂交稻 稻瘟病
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几丁质酶及其研究进展 被引量：22
5
作者 蓝海燕 陈正华 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第3期163-171,176,共10页
本文从几丁质酶的分布、分类、发育调节、可诱导性、分子生物学及抗病基因工程等方面近年来的进展进行了综合论述，并对其进一步的应用提出展望．
关键词 几丁质酶基因 防御反应 基因工程 几丁质酶 分布
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微生物几丁质酶的分子生物学研究 被引量：24
6
作者 冯俊丽 朱旭芬 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-108,共7页
几丁质酶对几丁质的生物降解具有重要作用.微生物产生的几丁质酶种类较多,彼此之间差异较大,但它们也具有一些相似的结构,如信号肽、催化区域,几丁质结合区域等.本文总结了微生物几丁质酶这些方面的特点,并对它的表达调控和应用前景进... 几丁质酶对几丁质的生物降解具有重要作用.微生物产生的几丁质酶种类较多,彼此之间差异较大,但它们也具有一些相似的结构,如信号肽、催化区域,几丁质结合区域等.本文总结了微生物几丁质酶这些方面的特点,并对它的表达调控和应用前景进行探讨. 展开更多
关键词 几丁质 几丁质酶基因 结构域 微生物
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植物几丁质酶及其在抗真菌基因工程中的应用 被引量：17
7
作者 周淼平 陆维忠 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1998年第3期183-187,共5页
几丁质酶是高等植物普遍存在的一种与抗真菌病害有关的酶。该文综合报道了国内外学者对这类酶的性质、分类、作用等的研究结果。提出只要考虑病原菌本身习性的影响，选用合适的几丁质酶基因，同时辅以一种或几种抗真菌蛋白基因协同作用... 几丁质酶是高等植物普遍存在的一种与抗真菌病害有关的酶。该文综合报道了国内外学者对这类酶的性质、分类、作用等的研究结果。提出只要考虑病原菌本身习性的影响，选用合适的几丁质酶基因，同时辅以一种或几种抗真菌蛋白基因协同作用，几丁质酶基因在植物基因工程中会有很好的抗真菌应用前景。 展开更多
关键词 几丁质酶 抗真菌 基因工程 几丁质酶基因
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抗菌核病转基因油菜植株的获得 被引量：13
8
作者 张丽华 党本元 +5 位作者 周奕华 毛勇 张铁汉 曾君祉 王兰岚 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第12期41-46,共6页
将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株... 将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株进行PCR 检测, 从6 株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的DNA 带型,Southern 杂交证实其中2 株呈现阳性结果, 表明外源基因已整合到油菜基因组中。对转化植株抗菌核病的接种试验及在菌核病高发区的种植试验表明, 含几丁质酶基因的转化体对菌核病具有抗性, 并已得到T3 展开更多
关键词 油菜 几丁质酶基因 抗菌核病植株 育种
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几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因导入甘蔗 被引量：30
9
作者 顾丽红 张树珍 +4 位作者 杨本鹏 蔡文伟 黄东杰 王文治 李娇 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第2期277-280,共4页
将含有经过修饰的烟草(Nicotiana tabacumL.)Ⅰ类几丁质酶基因和Ⅰ类β-1,3-葡聚糖酶基因的双价植物表达载体pCG-Ⅱ在农杆菌介导下转化甘蔗优良品种ROC10和ROC22,获得抗G418的转化植株52株,经PCR检测33株呈阳性;对部分经PCR检测呈阳性... 将含有经过修饰的烟草(Nicotiana tabacumL.)Ⅰ类几丁质酶基因和Ⅰ类β-1,3-葡聚糖酶基因的双价植物表达载体pCG-Ⅱ在农杆菌介导下转化甘蔗优良品种ROC10和ROC22,获得抗G418的转化植株52株,经PCR检测33株呈阳性;对部分经PCR检测呈阳性的转化植株进行Southern杂交和黑穗病抗病性的体外抑菌实验,结果显示这两个基因均已整合到部分甘蔗的基因组中,且它们对甘蔗黑穗病的抗性均有不同程度的提高。 展开更多
关键词 甘蔗 几丁质酶基因 β-1 3-葡聚糖酶基因 转基因
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几丁质酶基因导入西瓜植株及其抗病性鉴定研究 被引量：27
10
作者 王果萍 王景雪 +3 位作者 孙毅 崔贵梅 孟玉平 乔燕祥 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2003年第2期104-109,共6页
利用西瓜有性生殖过程 ,将携带有外源几丁质酶基因的质粒DNA涂抹在授粉后的柱头上 ,使其沿花粉管通道进入到生殖细胞 ,得到转化处理种子。转化T1代植株经除草剂Basta筛选和PCR扩增获得转化植株。对T3 代株系进行田间自然发病和人工接种... 利用西瓜有性生殖过程 ,将携带有外源几丁质酶基因的质粒DNA涂抹在授粉后的柱头上 ,使其沿花粉管通道进入到生殖细胞 ,得到转化处理种子。转化T1代植株经除草剂Basta筛选和PCR扩增获得转化植株。对T3 代株系进行田间自然发病和人工接种鉴定获得 3个抗枯萎病的株系。结果表明 :几丁质酶对镰刀菌引起的西瓜枯萎病有一定的抑制作用 ,利用花粉管通道法直接导入西瓜活体植株的技术是可行的。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 西瓜 抗病性 花粉管通道 基因转化
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转几丁质酶基因(RC24)水稻中大2号抗纹枯病特性研究 被引量：21
11
作者 袁红旭 许新萍 +2 位作者 张建中 郭建夫 李宝健 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期39-42,共4页
导入外源几丁质酶基因“RC2 4”的水稻中大 2号接种纹枯病菌的结果表明 ,接种病菌后病斑扩展速率和田间病情指数小 ,表现为对水稻纹枯病高抗。组织病理学研究表明纹枯病菌能侵入中大 2号 ,并引发纹枯病 ,入侵时间和症状出现的时间与非... 导入外源几丁质酶基因“RC2 4”的水稻中大 2号接种纹枯病菌的结果表明 ,接种病菌后病斑扩展速率和田间病情指数小 ,表现为对水稻纹枯病高抗。组织病理学研究表明纹枯病菌能侵入中大 2号 ,并引发纹枯病 ,入侵时间和症状出现的时间与非转基因感病对照没有显著差异 ,但病菌菌丝体消解现象出现早于对照 ,其抗病性主要表现为限制病菌扩展。以中大 2号与非转基因水稻材料配制的杂交组合的抗病性表明 ,杂交组合的抗病性均高于非转基因亲本 ,但其抗病性也会因母本的不同而有所变化。 展开更多
关键词 转基因水稻 几丁质酶基因 纹枯病 抗病性
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基因枪法向小麦导入几丁质酶基因的研究 被引量：14
12
作者 刘伟华 李文雄 +4 位作者 胡尚连 徐香玲 李集临 陈正华 胡赞民 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第1期54-59,共6页
利用基因枪法,以菜豆几丁质酶基因转化小麦幼胚愈伤组织。在轰击压力1300psi,轰击距离6cm、100μg金粉/枪和轰击距离9cm、150μg金粉/枪的2种处理条件下,获得4株春小麦东农7742转化植株,转化频率分别为0.36%和0.56%。经PCR和PCR-Souther... 利用基因枪法,以菜豆几丁质酶基因转化小麦幼胚愈伤组织。在轰击压力1300psi,轰击距离6cm、100μg金粉/枪和轰击距离9cm、150μg金粉/枪的2种处理条件下,获得4株春小麦东农7742转化植株,转化频率分别为0.36%和0.56%。经PCR和PCR-Southern杂交分析,证实菜豆几丁质酶基因已整合到T0和T1小麦基因组中。采用氨基葡萄糖法测定几丁质酶活力,结果表明,转基因小麦的几丁质酶活力明显高于对照株;转基因植株对白粉病症状减缓,并获得一株赤霉菌接种未扩展的转基因T1植株。 展开更多
关键词 基因枪法 小麦 几丁质酶基因 转化 抗真菌病
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几丁质酶基因转化甜菜的初步研究 被引量：10
13
作者 马龙彪 徐香玲 +2 位作者 张悦琴 傅宁 吴则东 《中国糖料》 2000年第3期18-20,共3页
本试验通过农杆菌(Agrobacterium)介导法将菜豆几丁质酶基因导入甜菜(BetavulgarisL.) ,再生植株经卡那霉素筛选后 ,进行PCR分析 ,结果表明 :再生植株的转化率为27.3 %。
关键词 几丁质酶基因 甜菜 真菌病 转基因抗病育种
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转几丁质酶基因黑杨的获得 被引量：18
14
作者 孟亮 李红双 +2 位作者 金德敏 崔德才 王斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第3期48-51,共4页
以G1黑杨幼叶为外植体建立了组织培养高频再生体系 ,对传统的农杆菌介导法进行了改进 ,用来自于菜豆的几丁质酶基因 (CH5B)进行转化 ,经PCR和PCR Southern杂交鉴定 ,证实CH5B基因已整合入G1黑杨核基因组中。
关键词 黑杨 根癌农杆菌 几丁质酶基因 转基因杨树 转化
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东亚飞蝗几丁质酶家族基因的表达特性与功能研究 被引量：23
15
作者 李大琪 杜建中 +6 位作者 张建琴 郝耀山 刘晓健 王亦学 马恩波 张建珍 孙毅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期485-492,共8页
【目的】研究东亚飞蝗几丁质酶家族基因的时空表达特性及其在蜕皮发育中的生物学功能,筛选在飞蝗发育过程中致死性的几丁质酶基因,为实现基于RNAi的飞蝗有效控制提供重要的基础数据。【方法】在东亚飞蝗EST数据库搜索几丁质酶基因片段,... 【目的】研究东亚飞蝗几丁质酶家族基因的时空表达特性及其在蜕皮发育中的生物学功能,筛选在飞蝗发育过程中致死性的几丁质酶基因,为实现基于RNAi的飞蝗有效控制提供重要的基础数据。【方法】在东亚飞蝗EST数据库搜索几丁质酶基因片段,用生物信息学方法分析所获得的基因片段序列;以飞蝗不同龄期第4天若虫和5龄东亚飞蝗不同组织部位为材料提取RNA并反转录为cDNA,应用RT-PCR方法研究时空表达特性;选取在表皮高表达的几丁质酶基因LmCht6,采用RNA干扰方法研究其生物学功能。【结果】基于东亚飞蝗EST库搜索和进一步的序列分析,共获得7条几丁质酶基因片段;不同组织部位与不同龄期RT-PCR结果表明这7条几丁质酶基因的时空表达特性存在明显差异,其中LmCht6主要在表皮表达;LmCht6的RNA干扰试验表明:2龄飞蝗注射dsLmCht6后,其几丁质酶基因LmCht6表达量明显降低;飞蝗从2龄到3龄的龄期转化过程中,表现为发育延迟,新表皮与旧表皮无法完全分离,导致死亡率达到72.2%。【结论】东亚飞蝗拥有多个几丁质酶基因,它们的时空表达特性存在差异;LmCht6在飞蝗蜕皮过程中具有十分重要的生物学功能,该基因被沉默后飞蝗无法完成蜕皮而导致死亡。 展开更多
关键词 东亚飞蝗 几丁质酶基因 RT-PCR RNA干扰
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双价抗真菌基因表达载体的构建及转基因西瓜的研究 被引量：15
16
作者 张志忠 吴菁华 +1 位作者 吕柳新 何承坤 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期369-374,共6页
构建了同时含有番茄几丁质酶基因(Chi3)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体,以西瓜(Citrulluslanatus)子叶块为外植体,采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法,将Chi3和Glu-Ac同时导入西瓜栽培种“中... 构建了同时含有番茄几丁质酶基因(Chi3)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体,以西瓜(Citrulluslanatus)子叶块为外植体,采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法,将Chi3和Glu-Ac同时导入西瓜栽培种“中育一号”,共获得46株抗性再生植株。经PCR、Southernblot和RT-PCR检测,表明外源基因已成功整合到西瓜基因组中,并在转录水平得到表达。利用尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusariumoxysporum)对转基因植株进行离体叶片抗病性检测,表明转基因植株对枯萎病的抗性均有不同程度的增强。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 Β-1 3-葡聚糖酶基因 西瓜 遗传转化 抗病性
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几丁质酶基因转入马铃薯品种东农303的研究 被引量：13
17
作者 卢翠华 李晶 +5 位作者 石瑛 陈伊里 王凤义 吕文河 秦昕 苏俊峰 《中国马铃薯》 2003年第5期277-279,共3页
以马铃薯极早熟品种东农 30 3的试管薯为外植体 ,通过农杆菌介导法成功地将几丁质酶(PBch)基因导入马铃薯中。薯块培养基MS +1mg LNAA +2mg LZT ,共培养 3d后 ,转到含卡那霉素 5 0mg L ,头孢噻肟钠 2 0 0mg L的相同的培养基 ,待抗性芽长... 以马铃薯极早熟品种东农 30 3的试管薯为外植体 ,通过农杆菌介导法成功地将几丁质酶(PBch)基因导入马铃薯中。薯块培养基MS +1mg LNAA +2mg LZT ,共培养 3d后 ,转到含卡那霉素 5 0mg L ,头孢噻肟钠 2 0 0mg L的相同的培养基 ,待抗性芽长到 1～ 2cm时 ,转入含卡那霉素75mg L的生根培养基进行生根筛选。对获得的 4株转基因植株进行PCR检测及PCR Southern杂交检测 ,有 3株呈阳性 ,转化率为 3 2 %。 展开更多
关键词 几丁质酶基因 马铃薯 东农303品种 转基因 农杆菌介导 培养基
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几丁质酶及其在植物遗传转化中的应用 被引量：11
18
作者 何迎春 贺思学 高必达 《生物学通报》 北大核心 2003年第7期9-13,共5页
介绍了几丁质酶的作用原理和主要性质 ,几丁质酶基因的主要来源和表达调控特点 。
关键词 几丁质酶 植物 遗传转化 作用原理 表达调控 几丁质酶基因
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利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究 被引量：8
19
作者 杨仲毅 王兰岚 +4 位作者 宋桂英 徐正平 张丽华 刘桂珍 陈正华 《激光生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期8-11,共4页
本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料，以子叶柄为外植体，研究了微束激光转化系统中的一些关键因素：如取材时间以播种后４—５天为宜；高渗液预处理２０—４０分钟者最佳；外源ＤＮＡ浓度以０．０５—０．１μｇ／μｌ... 本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料，以子叶柄为外植体，研究了微束激光转化系统中的一些关键因素：如取材时间以播种后４—５天为宜；高渗液预处理２０—４０分钟者最佳；外源ＤＮＡ浓度以０．０５—０．１μｇ／μｌ获得转基因植株最有利等等。已建立一种操作简便，重复性好，并能准确定位于靶体细胞的转化体系。并用这个转化体系成功地将菜豆几丁酶基因导入油菜，并获得转基因植株，经ＰＣＲ扩增检测为阳性，实验结果表明外源菜豆几丁酶基因确已整合到油菜基因组中。 展开更多
关键词 微束激光 油菜 几丁质酶基因
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几丁质酶基因在烟草栽培品种中的表达 被引量：14
20
作者 时焦 J.I.Cooper 《中国烟草科学》 CSCD 1997年第4期47-50,共4页
利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对来源于一种生物杀虫剂（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）的几丁质酶基因进行体外扩增，并插入载体质粒ｐＲＯＫ２中，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＸＬ１Ｂｌｕｅ。用重组质粒ｐＲＯＫ... 利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对来源于一种生物杀虫剂（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）的几丁质酶基因进行体外扩增，并插入载体质粒ｐＲＯＫ２中，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＸＬ１Ｂｌｕｅ。用重组质粒ｐＲＯＫ２ＤＮＡ转化植物转基因载体——土壤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株。借助于土壤农杆菌侵染烟草叶圆片，将目的基因导入。通过组织培养诱导生芽和生根，获得烟草再生植株。利用含卡那霉素的培养基对再生烟株进行初步筛选。进一步ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测结果表明：转基因烟草中有几丁质酶基因和蛋白的表达。初步检测结果表明：转基因烟草具有较高的几丁质酶活性。 展开更多
关键词 烟草 几丁质酶基因 表达
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