微生物酶拆分方法生产D-泛酸的手性中间体D-泛解酸内酯 被引量：20

1

作者 汤一新 孙志浩 +2 位作者 华蕾 过鑫富 汪军 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期1-5,共5页

筛选到一株产D -泛解酸内酯水解酶的串珠镰孢霉菌 (FusariummoniliformeSW -90 2 )。产酶条件研究表明 ,用甘油作碳源 ,蛋白胨作氮源 ,初始 pH8.0 ,温度 2 6℃ ,摇瓶培养 3d ,产酶量最高。在 6 0L和 10 0 0L发酵罐中通风发酵 4 5～ 4 7... 筛选到一株产D -泛解酸内酯水解酶的串珠镰孢霉菌 (FusariummoniliformeSW -90 2 )。产酶条件研究表明 ,用甘油作碳源 ,蛋白胨作氮源 ,初始 pH8.0 ,温度 2 6℃ ,摇瓶培养 3d ,产酶量最高。在 6 0L和 10 0 0L发酵罐中通风发酵 4 5～ 4 7h ,产酶量为 6～ 8g干菌体 /L ,D -泛解酸内酯水解酶酶活力达到 0 .87～ 0 .92IU/g干菌体。该酶的最适反应温度为 5 5℃ ,最适反应 pH为 7.0～ 7.5。在酶不对称水解泛解酸内酯过程中 ,对溶液加酶量 5 %～ 10 % ,底物浓度 10 %～ 2 0 % ,控制水解率 2 0 %～ 30 % 。 展开更多

关键词 D-内酯水解酶 串珠镰孢霉菌SW-902 D-泛酸 手性中间体 微生物酶 拆分 D-泛解酸内酯

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化学酶法合成D-泛解酸内酯的研究进展 被引量：10

2

作者 汪钊 黄美娟 +3 位作者 高亮 应向贤 赵嫚 孙杰 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第4期193-198,共6页

泛酸俗称维生素B5,是辅酶A合成的前体,而D-泛解酸内酯是D-泛酸合成的前体。D-泛解酸内酯的化学合成是以甲醛和异丁醛为起始原料,经醛缩合、腈化及内酯化等反应生成DL-泛解酸内酯,再经选择性拆分得到D-泛解酸内酯。化学法与酶法相结合有... 泛酸俗称维生素B5,是辅酶A合成的前体,而D-泛解酸内酯是D-泛酸合成的前体。D-泛解酸内酯的化学合成是以甲醛和异丁醛为起始原料,经醛缩合、腈化及内酯化等反应生成DL-泛解酸内酯,再经选择性拆分得到D-泛解酸内酯。化学法与酶法相结合有助于高效、绿色地合成高光学纯度的D-泛解酸内酯。内酯水解酶催化混旋泛解酸内酯的选择性拆分已经成功地实现了工业生产。对羰基还原酶、醇脱氢酶和羟基腈裂合酶等在化学酶法合成D-泛解酸内酯中的最新进展进行了综述。 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯 氧化还原酶 羟基腈裂合酶 内酯水解酶

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玉米赤霉烯酮水解酶耐热性的分子改造 被引量：6

3

作者 许中霞 刘桂智 +3 位作者 刘卫东 郭瑞庭 李华钟 郑迎迎 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期71-77,共7页

内酯水解酶ZHD101对玉米赤霉烯酮降解效果显著,是目前研究最广泛的玉米赤霉烯酮降解酶,但由于热稳定性较低,无法满足饲料生产制粒过程中的温度要求。作者利用理性设计和分子改造在其分子中引入二硫键,以提高ZHD101的热稳定性。通过在分... 内酯水解酶ZHD101对玉米赤霉烯酮降解效果显著,是目前研究最广泛的玉米赤霉烯酮降解酶,但由于热稳定性较低,无法满足饲料生产制粒过程中的温度要求。作者利用理性设计和分子改造在其分子中引入二硫键,以提高ZHD101的热稳定性。通过在分子引入七对半胱氨酸双突变(A110C/P196C、S136C/R189C、D143C/P181C、S147C/P181C、D199C/A202C、L200C/A231C、R204C/G205C)以形成潜在的二硫键,研究其对热稳定性的影响。结果表明,突变体S136C/R189C和D143C/P181C在50℃加热处理2 min后的残余活性高于野生型,其中突变体D143C/P181C的残余活性是野生型的2倍,且室温下活力损失小于10%。在此基础上设计四突变(S136C/D143C/P181C/R189C),热稳定性和活力并不优于双突变D143C/P181C。本研究结果为提高ZHD101在饲料工业上的应用潜力打下了基础。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 内酯水解酶 热稳定性 二硫键

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玉米赤霉烯酮内酯水解酶的鉴定、改造及应用 被引量：3

4

作者 张振霞 徐炜 +3 位作者 吴昊 张文立 光翠娥 沐万孟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期285-291,共7页

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是世界范围内污染最严重的一种真菌毒素,对人类生命和财产安全构成了极其严重的威胁。传统的物理和化学脱毒方式因存在脱毒不彻底、破坏食品质构以及导致营养成分流失等弊端而无法满足实际生产... 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是世界范围内污染最严重的一种真菌毒素,对人类生命和财产安全构成了极其严重的威胁。传统的物理和化学脱毒方式因存在脱毒不彻底、破坏食品质构以及导致营养成分流失等弊端而无法满足实际生产应用。近年来,生物酶法降解真菌毒素因微生物来源广泛、酶反应条件温和以及脱毒效率高等诸多优势而逐渐被研究和报道。特别地,玉米赤酶烯酮内酯水解酶(lactonase)因具有较高的ZEN降解活力、明确的脱毒机理、不可逆的脱毒过程和阐明的晶体结构等优点而被广泛研究。文章对微生物来源的内酯水解酶的基因挖掘、性质鉴定、分子改造以及应用探索方面进行了综述。旨在阐明目前内酯水解酶在玉米赤霉烯酮脱毒工业应用中存在的优势与挑战,并为其未来在玉米赤霉烯酮生物降解方面的研究提供参考。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 内酯水解酶 性质鉴定 分子改造 应用

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D-泛解酸内酯水解酶产生菌的筛选及产酶条件研究 被引量：12

5

作者 汤一新 孙志浩 +2 位作者 华蕾 过鑫富 汪军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期81-87,共7页

筛选到一株产D 泛解酸内酯水解酶的菌株 ,经鉴定为串珠镶孢霉菌 (Fusariummonili forme)SW 90 2。产酶条件研究表明 ,用甘油作碳源 ,蛋白胨作氮源 ,初始pH8 0 ,温度 2 6℃ ,摇瓶培养 3d ,产酶量最高。在 6 0L发酵罐中通风发酵 45h ,产... 筛选到一株产D 泛解酸内酯水解酶的菌株 ,经鉴定为串珠镶孢霉菌 (Fusariummonili forme)SW 90 2。产酶条件研究表明 ,用甘油作碳源 ,蛋白胨作氮源 ,初始pH8 0 ,温度 2 6℃ ,摇瓶培养 3d ,产酶量最高。在 6 0L发酵罐中通风发酵 45h ,产菌丝体生物量 7 1 8g干菌体 L ,D 泛解酸内酯水解酶酶活力达到 0 92IU 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯水解酶 串珠镰孢霉菌SW-902 D-泛酸 菌株筛选 产酶条件

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海藻酸钠复合载体固定化细胞拆分D,L-泛解酸内酯 被引量：10

6

作者 王雪梅 于明锐 谭天伟 《北京化工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期28-32,共5页

研究了海藻酸钠及其与聚丙烯酰胺(PAM)和聚乙烯醇(PVA)的复合载体对镰孢霉菌(Fusarium oxyspo-rumBU-11)细胞的固定,该固定化细胞被用于手性拆分D,L-泛解酸内酯的反应体系。实验表明,海藻酸钠固定化细胞具有较好的扩散性和强度,在水解... 研究了海藻酸钠及其与聚丙烯酰胺(PAM)和聚乙烯醇(PVA)的复合载体对镰孢霉菌(Fusarium oxyspo-rumBU-11)细胞的固定,该固定化细胞被用于手性拆分D,L-泛解酸内酯的反应体系。实验表明,海藻酸钠固定化细胞具有较好的扩散性和强度,在水解试验中与游离细胞相比,酶活收率可达到80%以上,而且具有较好的温度和批次反应稳定性,在底物质量浓度为200 g/L的3 L搅拌式反应器中6 h水解反应20批,水解率可以保持在初始的80%左右。PVA和PAM的加入可增强固定化细胞的强度,前者对酶活影响不大,后者使酶活略有增加。 展开更多

关键词 固定化细胞 海藻酸钠 D-泛解酸内酯水解酶 D L-泛解酸内酯 D-泛酸

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D-泛解酸内酯水解酶的定向进化 被引量：8

7

作者 柳志强 孙志浩 +2 位作者 郑璞 冷泳 钱嘉南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期773-781,共9页

易错PCR结合DNA改组方法向D泛解酸内酯水解酶基因中引入突变,并构建突变体库。利用酶的催化特点和产物特性建立了基于平板初筛和高效液相复筛的两步法D泛解酸内酯水解酶活性筛选系统。用该筛选系统以酶活力和pH稳定性为指标对突变体库... 易错PCR结合DNA改组方法向D泛解酸内酯水解酶基因中引入突变,并构建突变体库。利用酶的催化特点和产物特性建立了基于平板初筛和高效液相复筛的两步法D泛解酸内酯水解酶活性筛选系统。用该筛选系统以酶活力和pH稳定性为指标对突变体库进行筛选,最终获得一株酶活力高且在低pH条件下稳定性好的突变体MutE861。该突变体的酶活力是野生型酶的5.5倍。对突变体和野生型酶在pH6.0和pH5.0条件下的残余酶活进行对比,在这两种pH条件下,突变体酶的酶活残留分别为75%和50%,而野生型酶只能保持原来的40%和20%。通过软件对突变体MutE861酶基因和野生型酶基因进行分析对比,发现突变体MutE861酶基因发生了三处点突变,其中突变使两处氨基酸取代,另一处为沉默突变,未引起氨基酸的变化。 展开更多

关键词 串珠镰孢霉菌 D-泛解酸内酯水解酶 易错PCR DNA改组 筛选 定向进化

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固定化细胞拆分DL-泛解酸内酯的初步研究 被引量：4

8

作者 华蕾 汤一新 +2 位作者 孙志浩 过鑫富 汪军 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期5-8,共4页

用卡拉胶包埋串珠镰孢霉菌FusariummoniliformeSW - 90 2菌丝体 ,得到D -泛解酸内酯水解酶活力较高的固定化细胞。与游离细胞相比较 ,固定化细胞酶活随 pH变化的范围以及对温度适应的范围大致与游离细胞相仿。用固定化细胞进行反复分批... 用卡拉胶包埋串珠镰孢霉菌FusariummoniliformeSW - 90 2菌丝体 ,得到D -泛解酸内酯水解酶活力较高的固定化细胞。与游离细胞相比较 ,固定化细胞酶活随 pH变化的范围以及对温度适应的范围大致与游离细胞相仿。用固定化细胞进行反复分批酶水解 30批 ,每天一批 ,酶活稳定 ,平均水解率 2 8.0 %。固定化细胞冰箱 (4℃ )贮存 8周 ,酶活未见下降。 展开更多

关键词 串珠镰孢霉菌 固定化细胞 D-泛解酸内酯水解酶 拆分 D-泛解酸 酶水解

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细菌纤维素固定化酶的制备及其水解拆分性能

9

作者 元佳丽 周晓悦 +1 位作者 向忠润 王慧庆 《安徽化工》 CAS 2024年第3期49-53,共5页

经D-泛解酸内酯酶(D-Lacs)催化水解拆分是制备医药中间体D-泛解酸的绿色催化新技术,但游离酶存在价格昂贵、易失活、难分离等问题。利用椰果源细菌纤维素(BC)的三维纳米纤维网络为支架,以二乙烯三胺将其改性成BC-NH2,吸附纳米酶后,以戊... 经D-泛解酸内酯酶(D-Lacs)催化水解拆分是制备医药中间体D-泛解酸的绿色催化新技术,但游离酶存在价格昂贵、易失活、难分离等问题。利用椰果源细菌纤维素(BC)的三维纳米纤维网络为支架,以二乙烯三胺将其改性成BC-NH2,吸附纳米酶后,以戊二醛稳定D-泛解酸内酯水解酶固定于BC网络中。结果表明,氨基化修饰改性提高了BC固定化酶的活性,BC-NH2固定化D-Lacs的酶固载量高达372.5 mg/g,约4.5 h即可完成D,L-泛解酸内酯的水解拆分,均高于未改性BC。经过10次回收循环水解拆分实验,均可保证每批次2 h即可达到一半水解率,是一种有前景的全生物基酶固定化技术。 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯水解酶 细菌纤维素 酶固定化 水解

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重组表达D-泛解酸内酯水解酶乳酸克鲁维酵母的发酵工艺优化 被引量：2

10

作者 谢颂洋 顾正华 +4 位作者 郭自涛 朱慧霞 时祎 辛瑜 张梁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期38-45,共8页

以前期构建的重组表达D-泛解酸内酯水解酶的乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799为对象,在5 L发酵罐中,基于考察pH、搅拌转速、接种量3种单因素条件对产酶的影响结果,进一步优化补料策略,初步确定了促进重组D-泛解酸内酯水解酶... 以前期构建的重组表达D-泛解酸内酯水解酶的乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799为对象,在5 L发酵罐中,基于考察pH、搅拌转速、接种量3种单因素条件对产酶的影响结果,进一步优化补料策略,初步确定了促进重组D-泛解酸内酯水解酶高效表达的补料发酵方式。单因素条件研究结果表明,当pH 6.0、搅拌转速300 r/min、接种量2%时,可以获得最高表达水平,酶活力达5.12 U/mL,较摇瓶最佳结果提高了2倍。补料发酵研究表明,当通过补料维持发酵液恒糖质量浓度为5 g/L时,酶活力可达到8.20 U/mL,较分批发酵酶活力提高了60.1%;当分批发酵结束后,以恒速5 g/h进行补料,酶活力最高可达10.70 U/mL,较恒糖补料方式酶活力提高了30.5%,较分批发酵酶活力提高了98.6%。通过分批发酵和补料分批发酵的研究,显著提高了D-泛解酸内酯水解酶的酶活力,为进一步放大生产奠定了基础。 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯水解酶 搅拌转速 接种量 分批发酵 补料发酵

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串珠镰孢霉D-泛解酸内酯水解酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

11

作者 柳志强 孙志浩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期390-395,共6页

利用D_泛解酸内酯水解酶N末端序列,并根据NCBI中公布的D_泛解酸内酯水解酶cDNA序列设计了一个特异引物,该引物结合Oligo(dT) 1 5,以串珠镰孢霉(Fusariummoniliforme)CGMCC 0 5 36mRNA反转录得到的总cDNA为模板进行扩增,获得约1 5kb左右... 利用D_泛解酸内酯水解酶N末端序列,并根据NCBI中公布的D_泛解酸内酯水解酶cDNA序列设计了一个特异引物,该引物结合Oligo(dT) 1 5,以串珠镰孢霉(Fusariummoniliforme)CGMCC 0 5 36mRNA反转录得到的总cDNA为模板进行扩增,获得约1 5kb左右的片段,将其克隆到T载体上进行测序,对测得的序列进行分析,重新设计了一对引物,并在引物两端分别加上限制酶EcoRⅠ和SalⅠ的识别位点序列,利用热启动PCR成功地扩增出了D_泛解酸内酯水解酶基因,基因片段长度为114 6bp ,该序列同来源于尖镰孢霉菌(F .oxysporum)AKU 370 2菌株的编码D_泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因的同源性为90 0 6 %。将所得片段定向克隆到pTrc99a载体中,转化至JM10 9感受态细胞,筛选出了阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,进行SDS_PAGE电泳,检测出在约4 0kD处有一蛋白表达带。对两株重组基因工程菌的比活力进行测定,结果分别为37U和4 1U。 展开更多

关键词 串珠镰孢霉菌 D-泛解酸内酯水解酶基因 cDNA 克隆 原核表达

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一种来源于Phialophora attae的玉米赤霉烯酮内酯水解酶ZHD11F的酶学表征和结构特点 被引量：1

12

作者 林晓帆 张诺 +4 位作者 王辉 王美星 蒋思婧 贺妮莎 张桂敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4202-4212,共11页

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是一种雌激素类真菌毒素,可以与动物的雌激素受体竞争性结合,导致动物生殖系统内的激素紊乱。ZEN内酯水解酶(ZEN lactone hydrolase,ZHD)可以水解ZEN中的内酯键,进而使其转化为无雌激素毒性的产物。【目... 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是一种雌激素类真菌毒素,可以与动物的雌激素受体竞争性结合,导致动物生殖系统内的激素紊乱。ZEN内酯水解酶(ZEN lactone hydrolase,ZHD)可以水解ZEN中的内酯键,进而使其转化为无雌激素毒性的产物。【目的】利用生物信息学分析以及酶学性质探索,鉴定出一个具有新特性的ZEN内酯水解酶。【方法】构建pET28a-zhd11f表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达ZHD11F,利用Ni-NTA纯化得到ZHD11F,对其酶学性质进行分析,并通过结构模拟和分子动力学分析阐明ZHD11F低温活性的机制。【结果】ZHD11F以ZEN为底物,比酶活为40.04 U/mg,最适反应温度与pH值分别为35℃和8.0,在pH 6.0–9.5的范围内具有超过60%的酶活力,在35℃以下具有较好的热稳定性,能够耐受多种金属离子。ZHD11F在10℃和20℃时,其活性分别保持20%和40%。更多的loop区增加了结构的柔韧性是该酶稳定性较差、在低温活性比较高的主要原因。【结论】Phialophora attae是瓶霉属的一种真菌,目前此真菌来源的酶极少被鉴定。关于本研究将Phialophora attae来源的ZEN内酯水解酶ZHD11F,在大肠杆菌中成功可溶性表达并得到纯酶,表征分析显示该酶是目前报道的第一个低温ZEN内酯水解酶,为研究此类酶的耐冷机制、广温度范围提供了候选,同时拓展了Phialophora attae来源酶的功能研究。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 ZEN内酯水解酶 低温活性 异源表达 酶学性质

原文传递

球毛壳菌二烯醇内酯水解酶基因克隆及序列分析 被引量：1

13

作者 刘志华 杨谦 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期48-51,共4页

以球毛壳菌cDNA文库中获得的二烯醇内酯水解酶基因片段(GenBank Accn:BP099060)为基础,用RACE技术克隆出该基因的全长cDNA序列。序列长919bp,由450bp的3′RACE产物和608bp的5′RACE产物拼接而成。开放阅读框762bp,编码253个氨基酸组成... 以球毛壳菌cDNA文库中获得的二烯醇内酯水解酶基因片段(GenBank Accn:BP099060)为基础,用RACE技术克隆出该基因的全长cDNA序列。序列长919bp,由450bp的3′RACE产物和608bp的5′RACE产物拼接而成。开放阅读框762bp,编码253个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为27.5kD,理论等电点为5.98。利用cDNA两侧非编码区序列作引物克隆出该基因的DNA序列。序列分析表明,该基因由2个内含子和3个外显子组成,外显子与内含子剪连接区符合AG-GT规则。克隆的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY465528,AY555772,AAS66899)。 展开更多

关键词 球毛壳茵 二烯醇内酯水解酶 基因克隆 序列分析 RACE

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吸附-交联法固定D-泛解酸内酯水解酶的研究 被引量：1

14

作者 黎明 张建中 +4 位作者 别松涛 宋馨宇 刘萌 黄云雁 杜连祥 《工业微生物》 CAS CSCD 2012年第1期28-33,共6页

选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为:加酶量6... 选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为:加酶量6 U/g树脂、吸附pH 7.5、吸附时间4 h、吸附温度30℃、交联剂戊二醛终浓度0.1%、交联时间2 h。实验表明在此条件下制得的固定化酶有很好的稳定性:固定化酶在连续20次的底物水解反应后,剩余酶活达到71%。当温度达到80℃时游离酶几乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活为60%以上。游离酶的pH稳定性范围为pH 7～8,而固定化酶为pH 6.5～8.5。 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯水解酶 固定化 交联 稳定性

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D-泛解酸内酯水解酶的固定化及酶学性质 被引量：1

15

作者 王开放 张梁 +3 位作者 辛瑜 曾伟 丁重阳 石贵阳 《生物加工过程》 CAS 2019年第2期159-165,共7页

为有效提高D-泛解酸内酯水解酶的利用效率,笔者选择合适的载体对酶进行固定化,在优化固定化条件的同时研究固定化酶的最佳反应条件和酶学性质。结果表明,选择的最佳固定化载体为树脂D380,最佳固定化条件为:酶的吸附添加量为30 U(以1 g... 为有效提高D-泛解酸内酯水解酶的利用效率,笔者选择合适的载体对酶进行固定化,在优化固定化条件的同时研究固定化酶的最佳反应条件和酶学性质。结果表明,选择的最佳固定化载体为树脂D380,最佳固定化条件为:酶的吸附添加量为30 U(以1 g湿树脂计),吸附pH 7.0,吸附温度30℃,吸附时间5 h,戊二醛体积分数0.1%,交联时间1 h。在最优条件下得到的固定化酶的比酶活为(11.5±0.12) U/g。固定化酶的最适反应温度为37℃,最适反应pH为7.5。游离酶和固定化酶的动力学常数K_m分别为170.25和207.60 mmol/L。Ca^(2+)对酶促反应有激活作用,Mn^(2+)对该酶有较强的抑制作用。 展开更多

关键词 D-泛解酸内酯水解酶 固定化酶 动力学常数

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双烯内酯水解酶基因的克隆和序列分析

16

作者 钟文辉 孙明 +2 位作者 何国庆 冯孝善 喻子牛 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期79-84,共6页

从土壤中分离到一株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241-1,从中克隆出参与降解2,4-二氯酚的双烯内酯水解酶基因(dcpD)。该基因编码的双烯内酯水解酶可将顺式-2-氯双烯内酯水解成2-氯马来乙酸。采用的基因克隆策略是用Southern... 从土壤中分离到一株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241-1,从中克隆出参与降解2,4-二氯酚的双烯内酯水解酶基因(dcpD)。该基因编码的双烯内酯水解酶可将顺式-2-氯双烯内酯水解成2-氯马来乙酸。采用的基因克隆策略是用Southern杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组文库,再用斑点杂交筛选目的转化子。经序列测定得知dcpD基因编码区702bp。核苷酸和推测编码的氨基酸序列分析表明,dcpD与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异。 展开更多

关键词 假单胞菌 2 4-二氯酚 双烯内酯水解酶基因 基因克隆

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诱变选育D-泛解酸内酯水解酶高产菌及发酵条件优化

17

作者 沈治强 邢本 +3 位作者 丁振东 杨静文 胡雪芹 张洪斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第23期42-48,共7页

该文以实验室筛选得到的一株具有D-泛解酸内酯水解酶活力的镰孢霉菌(酶活力为1.42 U/mL)为出发菌株,先后利用常温室压等离子(atmospheric room temperature plasma,ARTP)和紫外-氯化锂(UV-LiCl)技术,对其进行了4轮递进诱变选育,以筛选... 该文以实验室筛选得到的一株具有D-泛解酸内酯水解酶活力的镰孢霉菌(酶活力为1.42 U/mL)为出发菌株,先后利用常温室压等离子(atmospheric room temperature plasma,ARTP)和紫外-氯化锂(UV-LiCl)技术,对其进行了4轮递进诱变选育,以筛选得到高活性D-泛解酸内酯水解酶菌株。实验得到ARTP诱变的最佳处理时间为80 s,UV-LiCl诱变的最佳处理时间为80 s(6 g/L LiCl)。通过变色圈大小初筛和摇瓶复筛,最终筛选得到一株酶活力达3.46 U/mL的菌株4-80-6,酶活力较出发菌株提高了143.66%,并且通过8次传代培养,该菌株遗传性较为稳定。以20%的底物浓度催化反应时,突变株4-80-6水解率由原始菌11.6%提高到17.1%,光学纯度由93.5%提高到98.3%。对突变株4-80-6菌株进行发酵条件优化,得到最佳产酶条件为:培养温度25℃,培养基初始pH 8.5,接种量10.5%,培养时间48 h,该条件下酶活力为4.33 U/mL,比优化前提高了25.14%。研究结果为DL-泛解酸内酯酶法拆分的工业应用提供了一种有效策略。 展开更多

关键词 镰孢霉菌 D-泛解酸内酯水解酶 常温室压等离子(ARTP)诱变 UV-LiCl诱变 发酵条件优化

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一种新的乙酰高丝氨酸内酯水解酶基因的克隆和表达

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作者 陈嗣新 尹隽 钟江 《微生物与感染》 2006年第3期153-156,共4页

目的获得新的降解革兰阴性细菌数量阈值感应信号分子乙酰高丝氨酸内酯类化合物(AHL)的水解酶基因。方法选择性富集和培养土壤中耐热细菌,抽取细菌总DNA作为模板,特异性聚合酶链反应扩增乙酰高丝氨酸内酯水解酶基因,进行克隆和DNA序列分... 目的获得新的降解革兰阴性细菌数量阈值感应信号分子乙酰高丝氨酸内酯类化合物(AHL)的水解酶基因。方法选择性富集和培养土壤中耐热细菌,抽取细菌总DNA作为模板,特异性聚合酶链反应扩增乙酰高丝氨酸内酯水解酶基因,进行克隆和DNA序列分析及原核表达。结果得到1个新的AHL水解酶基因,该基因与已知基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列同源性最高分别为87％和94％。该基因在原核表达系统中表达,得到了与预期相对分子质鲢(Mr)一致的蛋白质。结论证实乙酰高丝氨酸内酯水解酶广泛存在于环境微生物中。为进一步研究提供条件。 展开更多

关键词 乙酰高丝氨酸内酯水解酶 自体诱导分子 数量阈值感应

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绿色水产饲料添加剂的研究进展及发展方向(下)

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《科学养鱼》 北大核心 2006年第3期84-84,共1页

关键词 绿色水产饲料添加剂 D-泛解酸内酯水解酶 D-泛酸钙 环境污染问题 化学拆分法 诱导结晶法 微生物酶法 微生物菌株 生产量 拆分剂

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