绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转染骨髓间充质干细胞、乳鼠心肌细胞、Eahy926细胞表达特征的共聚焦分析 被引量：7

1

作者 张颖 辛毅 +3 位作者 汪劲松 许秀芳 罗毅 黄益民 《新乡医学院学报》 CAS 2011年第2期147-151,共5页

目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病... 目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病毒载体,将GFP、RFP以同时或先后方式共转染hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞,激光共聚焦显微镜观察2种报告基因在不同细胞中的共表达特点。结果 3种细胞均能被GFP、RFP共转染,其中hMSC和乳鼠Myo均有竞争加随机转染方式,Eahy926只有随机转染方式;3种细胞转染GFP、RFP的效率有所不同,共表达2种报告基因的细胞表现为以核为中心的表达区域重叠。结论 hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞均可共转染2种报告基因,但整合方式有所不同,这将对利用多个报告基因同时示踪细胞多种生命特征提供有力帮助。 展开更多

关键词 慢病毒载体 人骨髓间充质干细胞 心肌细胞 内皮细胞株 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白

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Ang(1-7)对AngⅡ诱导人脐静脉血管内皮细胞株细胞组织因子表达的影响 被引量：5

2

作者 张卉 文志斌 +1 位作者 何晓凡 贺石林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期557-559,共3页

关键词 AngⅡ 细胞组织因子 内皮细胞株 静脉血管 人脐 抑制细胞增殖 血管紧张素 氨基酸组成 活性产物

原文传递

实时定量PCR分析MT1-MMP/TIMP-2/MMP-2在不同来源人血管内皮细胞株中的表达 被引量：2

3

作者 蒋菊香 马珍妮 +2 位作者 胡晓慧 董宁征 阮长耿 《中国血液流变学杂志》 CAS 2007年第1期7-10,共4页

为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量PCR分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT... 为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量PCR分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT1-MMP在EAhy926中表达最高,TIMP-2在3株细胞中呈现相似的表达量,在ECV304中相对表达较高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的高表达。MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中的高表达可能与该类内皮细胞独特的来源、表型特点和功能有关。 展开更多

关键词 MT1-MMP 内皮细胞株 实时定量PCR

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膜型基质金属蛋白酶在人血管内皮细胞株中的表达 被引量：2

4

作者 蒋菊香 胡晓慧 +3 位作者 马珍妮 董宁征 白霞 阮长耿 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第2期172-175,202,共5页

目的 探讨膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases,MT-MMPs）在内皮细胞中的作用。方法 用Clustal W软件（http：//www.ebi.ac.uk/clustalw）比较6种MT-MMPs的蛋白序列同源性,并描绘出进化树,用半定量逆转录-聚... 目的 探讨膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases,MT-MMPs）在内皮细胞中的作用。方法 用Clustal W软件（http：//www.ebi.ac.uk/clustalw）比较6种MT-MMPs的蛋白序列同源性,并描绘出进化树,用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术检测HMEC-1、ECV304和EAhy926 3株内皮细胞株中MT-MMPs的mRNA表达差异。结果 蛋白质序列同源比较结果 提示,MT-MMPs各成员间氨基酸一致性为31%-65%,RT-PCR检测结果 发现6种MT-MMPs在3株不同细胞中呈现不同的表达谱。结论 MT-MMPs在不同血管内皮细胞株中的表达差异,可能与各内皮细胞不同的来源、表型特点和各自具有不同的功能有关。 展开更多

关键词 膜型基质金属蛋白酶 内皮细胞株 进化树 表达

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双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究 被引量：1

5

作者 李绚 阎蓉华 +3 位作者 罗照田 吴琦 贺荣华 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1652-1653,共2页

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量... 目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量. 展开更多

关键词 人脐静脉血管内皮细胞 双黄连注射液 NF-ΚB活性 活性抑制作用 信号通道 靶分子 定量分析法 ELISA法 内皮细胞株

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登革病毒感染原代人单核细胞、上皮细胞与内皮细胞株后IL-8分泌增加

6

作者 魏惠永 《国外医学（微生物学分册）》 2002年第5期45-46,共2页

登革出血热(DHF)为登革病毒(DV)感染后出现的严重临床症状,其特征为血浆渗出和血液循环衰竭。由于观察到临床表现较重的患者血浆中有IL-8水平升高,作者研究了DV体外感染对炎症性细胞因子分泌表达的影响。对照组加入不含登革病毒2型(DV2... 登革出血热(DHF)为登革病毒(DV)感染后出现的严重临床症状,其特征为血浆渗出和血液循环衰竭。由于观察到临床表现较重的患者血浆中有IL-8水平升高,作者研究了DV体外感染对炎症性细胞因子分泌表达的影响。对照组加入不含登革病毒2型(DV2)的昆虫细胞C6/36培养上清液后,ELISA测定其基线细胞因子水平。 展开更多

关键词 登革病毒感染 原代人单核细胞 上皮细胞 内皮细胞株 IL-8分泌

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膜型基质金属蛋白酶-1在不同内皮细胞株中的表达差异

7

作者 蒋菊香 马珍妮 +3 位作者 胡晓慧 董宁征 吴士良 阮长耿 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期916-920,共5页

为研究膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)在血管生物学中的作用机制,比较了3株常用的内皮细胞株:人微血管内皮细胞株HMEC-1、人脐静脉内皮细胞株ECV304和EAhy926中MT1-MMP及与其功能相关的MMP-2,... 为研究膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)在血管生物学中的作用机制,比较了3株常用的内皮细胞株:人微血管内皮细胞株HMEC-1、人脐静脉内皮细胞株ECV304和EAhy926中MT1-MMP及与其功能相关的MMP-2,TIMP-2的表达差异.实时PCR和流式细胞术检测HMEC-1、EAhy926和ECV304中MT1-MMP/MMP-2/TIMP-2的表达,明胶酶谱法分析各细胞株上清中MMP-2的酶活.实时PCR结果显示,3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,MT1-MMP在EAhy926中表达最高,TIMP-2在ECV304中表达最高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的表达.流式细胞术和酶谱的结果与PCR结果基本一致.MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中高表达可能与该细胞独特的来源、表型特点和功能有关. 展开更多

关键词 MT1-MMP 内皮细胞株 表达差异

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PTEN基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响 被引量：17

8

作者 成志勇 潘崚 +5 位作者 牛志云 梁文同 贾志强 颜晓燕 姚丽 杨敬慈 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期815-821,共7页

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor... 目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中PTEN、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测PTEN、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性。通过MTT实验及FCM法检测PTEN基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响。通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测PTEN基因对鸡胚血管生成的影响。结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-PTEN-GFP转染后K562细胞侵袭能力明显减弱。PTEN基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期。PTEN基因转染可明显抑制CAM血管生长。结论:肿瘤抑制基因PTEN能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生。 展开更多

关键词 PTEN基因 基因转染 人白血病细胞 VEGF 调控作用 endothelial growth factor gene transfection 肿瘤抑制基因 实验检测 腺病毒 人慢性粒细胞白血病 GFP 血管生长 血管内皮生长因子 细胞侵袭 脐静脉内皮细胞株 及其受体 表达水平 WESTERN印迹法 Transwell小室

原文传递

羟基红花黄色素A上调低氧状态下血管内皮细胞中缺氧诱导因子-1α的表达 被引量：14

9

作者 连泽勤 赵大龙 朱海波 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期484-489,共6页

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1%O2)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene,VH... 羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1%O2)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene,VHL),抑癌基因p53(tumor suppressor gene p53,p53)和降解缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)的作用。采用MTT法测定低氧状态下HSYA(100、10和1μmol.L-1)对Eahy926细胞增殖率的影响。免疫组织化学方法测定VHL与p53蛋白表达数量和定位。RT-PCR方法检测细胞中VHL、p53和HIF-1α的转录水平。Western blotting方法检测VHL、p53和HIF-1α的蛋白表达。与低氧模型对照组相比,HSYA(100μmol.L-1)促使细胞增殖率升高,HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强,呈时间依赖性。给药8 h后,VHL与p53的蛋白表达和转录水平均明显降低。HSYA诱导HIF-1α表达增加并提高低氧状态下细胞增殖率的作用,可能通过抑制VHL和p53两种HIF-1α的降解调节因子实现。 展开更多

关键词 羟基红花黄色素A 林希氏基因 抑癌基因P53 缺氧诱导因子-1Α 人脐静脉内皮细胞株

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高糖对人脐静脉内皮细胞GSH-PX活力、NOS及ICAM-1表达的影响 被引量：10

10

作者 曾玉 邓红 +2 位作者 王筠 苏宁 刘东风 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2005年第3期151-155,共5页

目的:探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV3 0 4,分为对照组和高糖组,用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活力,RT- PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM- 1)mRNA水平,免疫细胞化... 目的:探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV3 0 4,分为对照组和高糖组,用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活力,RT- PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM- 1)mRNA水平,免疫细胞化学法观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达。结果:高糖组GSH- PX活力明显下降,eNOS、iNOS蛋白表达明显增高,ICAM- 1mRNA水平也显著上升。结论:在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞GSH PX活力下降,ICAM -1mRNA、eNOS和iNOS蛋白表达增高,对糖尿病血管病变早期进展起一定的作用。 展开更多

关键词 GSH-PX活力 人脐静脉内皮细胞 ICAM-1表达 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) 诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 内皮细胞株ECV304 血管内皮细胞 MRNA水平 分光光度比色法 细胞间粘附分子 免疫细胞化学法 糖尿病血管病变 体外培养条件

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加味小陷胸汤对氧化低密度脂蛋白致血管内皮细胞增殖和凋亡的影响 被引量：12

11

作者 喻秀兰 梅国强 +2 位作者 张德玲 刘永明 欧阳静萍 《湖北中医学院学报》 2005年第2期6-7,共2页

目的:探讨加味小陷胸汤拮抗氧化低密度脂蛋白(OXLDL)对血管内皮细胞(ECV304)增殖和凋亡的影响。方法:采用100μg/ml的OXLDL刺激培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,诱导细胞凋亡;观察不同浓度小陷胸汤对抗细胞凋亡的作用。结果:100μg/ml的... 目的:探讨加味小陷胸汤拮抗氧化低密度脂蛋白(OXLDL)对血管内皮细胞(ECV304)增殖和凋亡的影响。方法:采用100μg/ml的OXLDL刺激培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,诱导细胞凋亡;观察不同浓度小陷胸汤对抗细胞凋亡的作用。结果:100μg/ml的OXLDL在作用一定时间后可明显抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡,加味小陷胸汤含药血清对该细胞毒性有明显拮抗作用,并显示了效果与药物浓度有关。结论:加味小陷胸汤可通过提高内皮细胞生长活性并抑制其凋亡、保护血管内皮细胞。 展开更多

关键词 小陷胸汤 血管内皮细胞增殖 氧化低密度脂蛋白(OX-LDL) 加味 内皮细胞株ECV304 诱导细胞凋亡 细胞生长活性 抗细胞凋亡 人脐静脉 不同浓度 拮抗作用 细胞毒性 含药血清 药物浓度 ml 抑制

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氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及促血管平滑肌细胞增殖的机制 被引量：13

12

作者 何玉萍 匡忠生 +1 位作者 何玉珊 许翌嘉 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期837-839,共3页

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响。方法采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含... 目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响。方法采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含量、增殖指数。结果 ox-LDL致ECV304细胞活力降低,细胞内Ca2+浓度升高,MMP下降,细胞凋亡率明显增高;损伤条件培养基有明显促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著差异(P<0.01,P<0.001)。结论 ox-LDL导致血管内皮细胞损伤,引起ECV304细胞内Ca2+超载,致线粒体功能障碍,促进细胞凋亡;促进VSMC增殖。 展开更多

关键词 氧化低密度脂蛋白 人脐静脉血管内皮细胞株 血管平滑肌细胞

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左旋氨氯地平对血管内皮细胞氧化应激损伤的影响 被引量：13

13

作者 张园 海荣 陆欣 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期159-162,共4页

目的研究左旋氨氯地平对过氧化氢(H_2O_2)诱导人血管内皮细胞株EA.hy926氧化应激损伤的影响。方法实验随机分为5组,正常组,模型组(300μmol·L^(-1)H_2O_2)及左旋氨氯地平低、中、高剂量组(0.5,1,2μmol·L^(-1))。噻唑蓝法检... 目的研究左旋氨氯地平对过氧化氢(H_2O_2)诱导人血管内皮细胞株EA.hy926氧化应激损伤的影响。方法实验随机分为5组,正常组,模型组(300μmol·L^(-1)H_2O_2)及左旋氨氯地平低、中、高剂量组(0.5,1,2μmol·L^(-1))。噻唑蓝法检测各组细胞活力;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测各组细胞内活性氧水平;分光光度法检测各组丙二醛及超氧化物歧化酶含量;Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡率;分光光度法检测各组天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)活性;免疫印迹技术分析核因子-κB(NF-κB)通路的激活状况。结果与正常组比较,模型组中EA.hy926细胞活力下降(P<0.01),活性氧及丙二醛含量上升(P<0.01),超氧化物歧化酶含量下降(P<0.01),Caspase 3活性上升(P<0.01),NF-κB p65磷酸化水平降低(P<0.01);与模型组比较,0.5,1,2μmol·L^(-1)左旋氨氯地平能显著细胞活力(P<0.05),提高超氧化物歧化酶含量(P<0.05),降低活性氧及丙二醛含量(P<0.05),抑制Caspase 3活性及NF-κB p65磷酸活化水平(P<0.05)。结论左旋氨氯地平可抵抗H_2O_2诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926细胞氧化应激作用,是通过抑制活性氧等物质的产生及细胞凋亡实现的。 展开更多

关键词 左旋氨氯地平 人血管内皮细胞株EA.hy926 氧化应激 细胞凋亡

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永生化小鼠Bend.3细胞株具有脑微血管内皮细胞的屏障特性 被引量：11

14

作者 何芳 尹飞 +3 位作者 彭镜 李孔昭 吴丽文 邓小鹿 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期474-478,共5页

目的评价永生化小鼠脑微血管内皮细胞株Bend.3是否具有脑微血管内皮细胞的屏障特性。方法将小鼠脑微血管内皮细胞株Bend.3接种于细胞培养插内,跨内皮细胞电阻抗(transendothelial electrical resist-ance,TEER)和辣根过氧化物酶(horsera... 目的评价永生化小鼠脑微血管内皮细胞株Bend.3是否具有脑微血管内皮细胞的屏障特性。方法将小鼠脑微血管内皮细胞株Bend.3接种于细胞培养插内,跨内皮细胞电阻抗(transendothelial electrical resist-ance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)通透性实验检测其屏障功能。Western blot法和直接荧光染色法观察其紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1的表达及细胞骨架蛋白F-actin的分布。结果 Bend.3细胞的TEER随培养时间延长逐渐升高,10d达82.3±6.0Ω.cm2,与培养3d时的37.3±3.1Ω.cm2相比,差异有统计学意义(P<0.05)。其培养10d和3d的平均HRP通透率在120min分别为(2.2±0.05)%和(4.3±0.20)%,差异有统计学意义(P<0.05)。培养10d时该细胞表达高浓度的紧密连接蛋白Occludin、ZO-1,且F-actin主要分布在细胞周边,线条完整连续,未见明显缝隙形成。结论小鼠脑微血管内皮细胞株Bend.3具有脑微血管内皮细胞的屏障特性,且其屏障功能在接种10d后可达到最理想的状态。 展开更多

关键词 屏障 紧密连接 脑微血管内皮细胞株 小鼠

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对羟基苯甲醛对血脑屏障的保护作用及机制研究 被引量：11

15

作者 祝燕平 李欣 +3 位作者 杜瑶 张璐 冉利 周宁娜 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1021-1027,共7页

脑缺血过程中由氧化应激导致血脑屏障（BBB）的破坏是引起继发性脑损伤的重要病理反应，该研究目的是探讨天麻酚性成分对羟基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde，p-HBA）对BBB的保护作用及相关机制。BBB主要由血管内皮细胞和星形胶质细胞... 脑缺血过程中由氧化应激导致血脑屏障（BBB）的破坏是引起继发性脑损伤的重要病理反应，该研究目的是探讨天麻酚性成分对羟基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde，p-HBA）对BBB的保护作用及相关机制。BBB主要由血管内皮细胞和星形胶质细胞组成，故该实验以小鼠脑微细血管内皮细胞株（bEnd．3）和星形胶质细胞（astrocyte，Ast）作为BBB模型进行研究。用H2O2诱导bEnd．3和Ast氧化应激的方法复制BBB损伤模型。采用不同浓度H2O2（0．125，0．25，0．5，0．75mmol·L^-1）诱导bEnd．3和Ast损伤4h；再用0．5mmol·L^-1H202诱导bEnd．3及Ast损伤1，2，4，6h，检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以筛选H2O2诱导细胞氧化损伤的最佳条件。不同浓度P-HBA（12．5，25，50mg·L^-1）干预后，检测bEnd．3和Ast细胞LDH漏出率；采用Westernblot法检测正常bEnd.3和Ast以及H2O2诱导损伤后Ast细胞中Nrf2，HO-1和NQ01蛋白表达量的变化；采用免疫荧光法和Westernblot法检测p-HBA对bEnd．3中紧密连接蛋白claudin-5和occludin表达的影响。结果显示，0．5rnmol·L^-1H202诱导bEnd．3和Ast损伤4h为最佳条件。不同浓度p-HBA均可降低H2O2诱导bEnd．3和Ast损伤后细胞LDH的漏出率；可增加bEnd．3中claudin-5，occludin，Nrt2，HO-1及NQ01蛋白的表达量；可增加Ast及H2O2诱导损伤后Ast中Nrf2，HO-1和NQ01蛋白表达量。结果提示，p-HBA可保护氧化应激诱导的BBB损伤，其机制与增加bEnd．3紧密连接蛋白claudin-5，OC-cludin的表达及激活bEnd-3和Ast细胞中抗氧化应激Nrt2／ARE通路、增强细胞内源性抗氧化能力有关。 展开更多

关键词 血脑屏障 氧化损伤 小鼠脑微细血管内皮细胞株 星形胶质细胞 对羟基苯甲醛

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嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66CGA47酌抑制脓毒症血清所致血管内皮细胞高通透性的研究 被引量：7

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作者 古妮娜 张丹 +4 位作者 罗丽 陈晓迎 谢明 刘景仑 姜丽萍 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期715-719,共5页

目的观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66（Chromfungin，CHR）对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用于人脐静脉内皮细胞株EA．hy926，采用四甲基偶氮唑... 目的观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66（Chromfungin，CHR）对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用于人脐静脉内皮细胞株EA．hy926，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、Transwell小室法测定EA．hy926的活性[吸光度（A）值]和通透性（A值），免疫荧光法镜下观察细胞纤维肌动蛋白（F—actin）的形态和分布。结果与空白对照组比较，1、10、100nmol／LCHR对EA．hy926细胞活性无明显影响（A值：1．219±0．253、1．179±0．065、1．179±0．062比1．306±0．162，均P〉0．05），而1000nmol/L CHR对EA．hy926细胞活性有显著抑制作用（A值：1．049±0．256比1．306±0．162，f=-2．390，P=0．031）。与空白对照组比较，1、10、100nmol/L CHR作用下EA．hy926细胞通透性明显降低（A值：1．619±0．324、1．496±0．356、1．132±0．280比2．315±0．440，P〈0．05或P〈0．01）；脓毒性休克患者血清或TNF—α单独作用下EA．hy926细胞通透性明显升高（血清组A值：1．204±0．248比0．277±0．017，P〈0．01；TNF-α组A值：2．485±0．113比1．602±0．679，P〈0．05）；1、10、100nmol／L的CHR既可明显降低脓毒性休克患者血清引起的高通透性（A值：0．299±0．065、0．224±0．028、0．131±0．015比1．204±0．248，均P〈0．01），也可明显降低TNF—α引起的高通透性（A值：1．995±0．394、1．920±0．096、1．744±0．475比2．485±0．113，P〈0．05或P〈0．01），且在1-100nmol／L范围内，CHR的上述作用呈现一定的剂量依赖性。与空白对照组比较，脓毒性休克患者血清或TNF-α单独作用下，F—actin细胞骨架发生明显重组和再分布，应力纤维形成增多，而CHR可以抑制上述变化的发生。结论CHR可以抑制脓毒性休克患者血清引起的血管内皮细胞的高通透性，且呈现一定的剂量依 展开更多

关键词 嗜铬粒蛋白A 嗜铬粒蛋白A衍生多肽 血管内皮细胞 人脐静脉内皮细胞株EA hy926 内皮细胞通透性 脓毒症

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三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞NF-κB及ICAM-1表达的影响 被引量：8

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作者 江小萍 李海全 +4 位作者 潘少霞 方永奇 刘桂娥 欧阳永红 沈祖泓 《中西医结合心脑血管病杂志》 2010年第9期1086-1088,共3页

目的探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组。对各... 目的探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组。对各组进行相应处理后,分别检测各组ECV304超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量、核转录因子-B(NF-κB)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果模型组,tPNS高,中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组细胞氧自由基清除功能明显低于正常组,NF-κB及ICAM-1表达明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于H/R组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于维拉帕米组及PDTC组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于维拉帕米组及PDTC组同期。结论 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-κB、ICAM-1活性,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞株 缺氧再给氧损伤 核转录因子 细胞间黏附分子-1 三七总皂苷

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三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞钙离子浓度及肌浆网Ca^(2+)-ATP酶活性的影响 被引量：8

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作者 江小萍 李海全 +4 位作者 潘少霞 方永奇 刘桂娥 欧阳永红 沈祖泓 《中华中医药学刊》 CAS 2011年第4期758-760,共3页

目的:探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法:将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组,对... 目的:探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法:将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组,对各组进行相应处理后,分别检测各组细胞内钙离子浓度[Ca2+]i、肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力的变化。结果:模型组、tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显低于正常组,[Ca2+]i明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于H/R组,[Ca2+]i明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于维拉帕米组及PDTC组,[Ca2+]i明显低于维拉帕米组及PDTC组。结论:H/R可激活ECV304,使细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显降低,[Ca2+]i明显升高;tPNS能有效改善肌浆网Ca2+-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞株ECV304 缺氧再给氧损伤 钙离子 CA2+-ATP酶 三七总皂苷

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幽门螺杆菌napA基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫性和致炎作用 被引量：4

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作者 王媛 严杰 毛亚飞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期98-102,共5页

目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)napA基因的原核表达系统 ,了解表达产物rNAPA免疫性和致炎作用。方法　采用PCR从Hp临床菌株Y0 6株DNA中扩增napA全长基因片段 ,T A克隆后测序 ,构建napA基因原核表达系统pET32a napA E .co... 目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)napA基因的原核表达系统 ,了解表达产物rNAPA免疫性和致炎作用。方法　采用PCR从Hp临床菌株Y0 6株DNA中扩增napA全长基因片段 ,T A克隆后测序 ,构建napA基因原核表达系统pET32a napA E .coliBL2 1DE3。采用SDS PAGE估计不同浓度IPTG诱导下rNAPA表达产量 ,Ni NTA亲和层析收集rNAPA。采用Westernblot和免疫扩散试验鉴定rNAPA的免疫性。采用ELISA分别检测 1 0 9株Hp临床菌株NAP(neutrophil activatingprotein)表达、1 2 5例Hp感染者血清中NAP抗体和rNAPA诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1、IL 8、TNF α和ICAM 1的作用。结果　所克隆的napA基因与报道的相应核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 .8%和 96 .9%。所构建的napA基因原核表达系统rNAPA表达量高达细菌总蛋白的 5 0 %以上。Hp全菌抗体商品 (DAKO)能识别rNAPA并与之结合 ,rNAPA兔抗血清的免疫扩散试验效价为 1∶8。 95 .4 %Hp临床菌株 (1 0 4 1 0 9)表达NAP ,92 .8%Hp感染者 (1 1 6 1 2 5 )血清中存在rNAPA抗体。 1～1 0 μg的rNAPA均可诱导人脐静脉内皮细胞株EVC 30 4IL 1、IL 8、TNF α和ICAM 1的分泌明显增加 (P<0 .0 5～ 0 .0 1 )。结论　成功地从Hp临床菌株Y0 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 致炎作用 表达产物 免疫性 基因原核表达 系统构建 原核表达系统 SDS-PAGE 免疫扩散试验 ICAM-1 Western 静脉内皮细胞株 TNF-α 临床菌株 E.coli Ni-NTA IL-1 IL-8 A基因 T-A克隆 ELISA 序列同源性 免疫反应性

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何首乌提取物对人脐静脉内皮细胞株ECV-304的VCAM-1、ICAM-1表达的影响 被引量：2

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作者 王晨 杨亚安 吴开云 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期286-286,334,共2页

关键词 ICAM-1表达 ECV-304 静脉内皮细胞株 VCAM-1 何首乌提取物 内皮细胞粘附分子 动脉粥样硬化(AS) 人脐 结构和功能 影响作用 文献报道 血管壁 生物体 受损

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