补阳还五汤联合MSCs移植对脑缺血再灌注模型大鼠VEGF及信号通路的影响 被引量：13

1

作者 张运克 张振强 宋军喜 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期806-809,共4页

目的揭示补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促进脑缺血血管新生的机制。方法选取雄性SD大鼠96只,随机分为脑缺血再灌注模型组、内皮细胞抑制素组、MSCs移植组及补阳还五汤联合MSCs移植组。参照改良的Longa法建立大鼠脑缺血再灌... 目的揭示补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促进脑缺血血管新生的机制。方法选取雄性SD大鼠96只,随机分为脑缺血再灌注模型组、内皮细胞抑制素组、MSCs移植组及补阳还五汤联合MSCs移植组。参照改良的Longa法建立大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)。模型组在立体定位仪下,用微量进样器通过侧脑室给予生理盐水10μl;抑制素组给予内皮细胞抑制素阿瓦斯汀5μl,生理盐水5μl;MSCs组及联合组给予阿瓦斯汀5μl、培养的MSCs 5μl。联合组术前3天给予补阳还五汤(10ml/kg)灌胃,其它各组以同等体积的生理盐水灌胃,每日一次。模型组、抑制素组及MSCs组48 h后,采集实验动物血清和脑组织;联合组分别于12h、24h、36h、48h采集,采用免疫组化法检测大鼠血清VEGF及缺血脑组织VEGF的表达;应用免疫印迹蛋白法检测VEGFR2、p-VEGFR2、ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的蛋白含量。结果抑制素组与模型组相比,大鼠血清及脑组织VEGF含量明显降低(P<0.05);ERK、AKT含量变化不大(P>0.05);VEGFR2、p VEGFR2、p ERK和p AKT表达均显著下降(P<0.05)。MSCs组与抑制素组相比,大鼠血清及脑组织VEGF含量明显升高(P<0.05);ERK、AKT含量影响不大(P>0.05);VEGFR2、p-VEGFR2、p-ERK和p-AKT表达均升高(P<0.05);联合组与抑制剂组相比,除ERK外,所有指标均有升高,以24h、36h、48h三个时间点最为明显(P<0.05、P<0.01)。结论内皮细胞抑制素(阿瓦斯汀)可通过抑制VEGFR2及其磷酸化,降低ERK、AKT的磷酸化水平,阻止经MAPK途径的胞內信号转导途径,从而抑制内皮细胞的增殖和迁移,阻止新生血管的形成;MSCs组及联合组主要经VEGFR-2所介导的信号通路及PI3K/AKT信号途径,诱导内皮细胞增殖和迁移,促进血管新生,对ERK途径的胞內信号影响不大。 展开更多

关键词 脑缺血再灌注 补阳还五汤 骨髓间充质干细胞 内皮细胞抑制素 血管新生 VEGF VEGFR P13K/AKT ERK

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血管生成抑制因子的研究进展 被引量：4

2

作者 吴江雪 徐本玲 黄文林 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期376-384,共9页

血管生成与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关,目前,以抑制血管生成为靶点治疗肿瘤有望成为抗肿瘤新疗法之一。近年来,研究发现了多种内源性血管生成抑制因子,其中一些已进入了临床试验阶段。本文对内源性血管生成抑制因子的结构、功能、... 血管生成与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关,目前,以抑制血管生成为靶点治疗肿瘤有望成为抗肿瘤新疗法之一。近年来,研究发现了多种内源性血管生成抑制因子,其中一些已进入了临床试验阶段。本文对内源性血管生成抑制因子的结构、功能、作用机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述。 展开更多

关键词 肿瘤 血管生成抑制因子 血管生成抑制素 内皮细胞抑制素

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乳腺癌组织和血清中内皮细胞抑制素VEGF表达与肿瘤血管生成 被引量：6

3

作者 赵建华 唐金海 +2 位作者 孟凡青 秦建伟 赵祥生 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期79-82,共4页

目的:研究乳腺癌患者癌组织和血清内皮细胞抑制素(ES)、VEGF表达和肿瘤血管生成间的关系,初步探讨乳腺癌血管生成调节机制。方法:采用免疫组化法检测59例乳腺癌组织ES、VEGF表达及其微血管密度(MVC);分别采用竞争性酶联免疫试验和ELISA... 目的:研究乳腺癌患者癌组织和血清内皮细胞抑制素(ES)、VEGF表达和肿瘤血管生成间的关系,初步探讨乳腺癌血管生成调节机制。方法:采用免疫组化法检测59例乳腺癌组织ES、VEGF表达及其微血管密度(MVC);分别采用竞争性酶联免疫试验和ELISA测定患者乳腺癌组织和手术前、后血清ES及VEGF水平。结果:1)癌组织ES、VEGF阳性表达率分别为69.5%和59.3%,明显高于癌旁组织(P<0.005)。2)手术前乳腺癌组血清ES和VEGF水平显著增高;手术3周后,血清VEGF水平明显下降,而ES仍保持在较高水平。3)癌组织VEGF表达、组织和血清VEGF水平间具有密切相关性(P<0.05);癌组织ES表达和血清ES水平间仅有弱的关联(P=0.06)。4)癌组织VEGF阳性和阴性组,MVC分别为37.5±10.3和22.8±8.3,有显著性差异(P<0.001),且血清VEGF浓度与MVC呈正相关(P<0.0001,r=0.63);癌组织VEGF表达阴性组,血清ES与MVC显示负相关(P=0.03,r=-0.45)。结论:VEGF是促进乳腺癌血管生成的直接相关因子,而ES可能是肿瘤及其转移的血管生成负调控因子。 展开更多

关键词 血管生成 乳腺癌 内皮细胞抑制素 VEGF

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菩人丹对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠VEGF及其受体VEGFR2/p-VEGFR2和Angiostatin、Endostatin的影响 被引量：5

4

作者 宋新龙 陈书 +2 位作者 苏冷高娃 张耀丹 庞宗然 《世界中西医结合杂志》 2015年第5期627-631,共5页

目的观察菩人丹(PuRen Dan)对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR2/p-VEGFR2)和血管生成抑制素(Angiostatin)、内皮细胞抑制素(Endostatin)的影响,探讨菩人丹修复胰腺微循环障碍的机制。方法... 目的观察菩人丹(PuRen Dan)对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR2/p-VEGFR2)和血管生成抑制素(Angiostatin)、内皮细胞抑制素(Endostatin)的影响,探讨菩人丹修复胰腺微循环障碍的机制。方法通过高脂饲料喂养(12周)与尾静脉快速注射小剂量链脲佐菌素(30 mg/kg)的方法建立大鼠模型。在同批次正常大鼠中随机选15只为正常对照组,后将成模大鼠随机分为:模型组、菩人丹组(1.77 g/kg)、降糖通脉片组(0.42 g/kg)和二甲双胍组(0.14 g/kg),每组15只。各组大鼠每天灌胃1次,正常对照组和模型组给予等剂量蒸馏水,连续给药4周后,提取各组大鼠胰腺组织总蛋白质,采用Western blot法测定各组大鼠胰腺组织中VEGF及其受体VEGFR2的蛋白质表达和磷酸化水平,以及Angiostatin、Endostatin的蛋白质表达水平。结果与正常对照组相比,模型组胰腺组织VEGF蛋白质表达水平和受体VEGFR2磷酸化水平明显降低(P<0.01),而Angiostatin、Endostatin蛋白质表达水平显著增高(P<0.01);菩人丹干预后,VEGF蛋白质表达水平和受体VEGFR2磷酸化水平均显著上调(P<0.01),而Angiostatin、Endostatin蛋白质表达则被抑制(P<0.01)。其与阳性对照药降糖通脉片和二甲双胍作用相当。结论菩人丹通过上调血管生成促进因子VEGF蛋白质表达及其受体VEGFR2磷酸化,抑制血管生成抑制因子Angiostatin、Endostatin的蛋白质表达,促进糖尿病状态下胰腺组织微血管新生,进而改善胰腺微循环障碍,发挥其对胰岛β细胞的保护、修复作用。 展开更多

关键词 菩人丹 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2 血管生成抑制素 内皮细胞抑制素

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内皮细胞抑制素酵母工程菌的高密度发酵及产物纯化和活性分析 被引量：2

5

作者 吴江雪 符武钊 +2 位作者 张添元 罗进贤 吴群悦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期224-228,共5页

用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程... 用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程菌GS115 (pPIC9K EDN)生物量的A60 0 值达到 2 5 0 ,分泌量为 15 0mg L .发酵液经StreamlineSP ,SepharoseSPFF离子交换柱和Sepharose HeparinHiTrap亲和柱纯化 ,产物纯度达 97%以上 ,回收率为 6 0 % .Western印迹结果表明 ,酵母工程菌GS115 (pPIC9K EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性 .MTT法和抑癌实验结果显示 :纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长 ,其平均抑瘤率是 94 2 % . 展开更多

关键词 内皮细胞抑制素 酵母工程菌 发酵 产物 纯化 毕赤酵母 生物活性

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化疗对乳腺癌患者血清血管生成调节因子水平的影响 被引量：4

6

作者 唐金海 赵建华 +3 位作者 龚建平 秦建伟 潘立群 许芝银 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期210-214,共5页

目的 探讨乳腺癌患者化疗期间血清血管内皮生长因子（VEGF）和内皮细胞抑制素（ES）水平的变化及其与疗效的关系。方法 收集40例转移性乳腺癌患者化疗前、化疗1个周期和5～6个周期后的系列血清标本120份，采用酶联免疫吸附试验（ELISA... 目的 探讨乳腺癌患者化疗期间血清血管内皮生长因子（VEGF）和内皮细胞抑制素（ES）水平的变化及其与疗效的关系。方法 收集40例转移性乳腺癌患者化疗前、化疗1个周期和5～6个周期后的系列血清标本120份，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测VEGF和ES水平；同时采用该方法检测血清可溶性血管细胞黏附因子．1（VCAM-1）水平。结果 （1）化疗前，乳腺癌患者血清VEGF中位水平为496．6pg／ml，是健康对照组的4．7倍（P〈0．001）；ES中位水平为95．5ng／ml，比健康对照组低18．3％（P=0．183）；VCAM-1中位水平为1077．1ng／ml，较健康对照组明显增高（P〈0．001）。化疗前VEGF与血清VCAM-1水平、疾病分期和转移部位相关（P〈0．05）。（2）化疗1个周期后，乳腺癌患者血清VEGF中位水平为524．8pg／ml，较化疗前增高（P=0．047）；ES中位水平为110．5ng／ml，与化疗前差异无统计学意义（P=0．055）；VCAM-1中位水平为975．6ng／ml，与化疗前差异亦无统计学意义（P=0．27）。（3）化疗5～6个周期后，乳腺癌患者血清VEGF中位水平为306．5pg／ml，较化疗前、化疗1个周期后明显下降（P值分别为0．009和0．005）；Es中位水平为113．3ng／ml，比化疗前明显增高（P=0．042），但与化疗1个周期差异无统计学意义（P〉0．05）。血清VEGF水平的变化与疗效相关。病情稳定或缓解的27例乳腺癌患者，VEGF均出现不同程度下降，13例病情进展者无VEGF下降；VCAM-1水平也出现了与VEGF类似的治疗相关反应；而Es水平与疗效无关（P〉0．05），提示化疗对ES水平影响可能较小。结论 乳腺癌全身化疗明显影响血清VEGF水平，VEGF下降可能是疾病得到控制的一个指标；随着治疗后病情的稳定或缓解，肿瘤血管生成具有向着抗血管生成活性状态发展的趋势。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 肿瘤血管生成 血管内皮生长因子 内皮细胞抑制素 化疗

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内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子_(151)融合基因治疗胃癌的作用及其机制 被引量：2

7

作者 李喆 方国恩 +3 位作者 华积德 毕建威 潘欣 戚中田 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1186-1189,共4页

目的探讨新型内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制。方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒AdhENDOVEGI151转染胃癌SGC7901、MKN28细胞和血管内皮ECV304细胞4h后,继续培养6d,噻唑... 目的探讨新型内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制。方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒AdhENDOVEGI151转染胃癌SGC7901、MKN28细胞和血管内皮ECV304细胞4h后,继续培养6d,噻唑蓝(MTT)比色法检测第1至6天3种细胞的存活率;流式细胞仪(FCM)丙化碘锭(PI)单染色法检测转染后48h胃癌和内皮细胞凋亡的情况;应用DNA片断化试验分析转染后12、24、36、48h时ECV304凋亡情况;应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(Westernblot)检测融合基因转染对SGC7901表达促血管生成因子VEGF165的影响。结果AdhENDOVEGI151治疗强烈抑制ECV304增殖,72h抑制率为55.18%,144h抑制率89.86%;FCM检测出现明显凋亡峰,凋亡细胞约占(20.70±5.83)%,并且出现G1期阻滞(65.41±2.38)%和S期明显减少(21.81±1.52)%,与AdLacZ组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);转染组细胞DNA出现典型的梯形条带,尤以转染后24～36h最为明显,AdLacZ组及对照组DNA无裂解。AdhENDOVEGI151转染对胃癌细胞无直接毒性作用,但明显下调胃癌细胞VEGF165的表达水平。结论AdhENDOVEGI151治疗一方面强烈抑制内皮细胞增殖,诱导凋亡;另一方面抑制胃癌细胞表达VEGF165,多角度联合抑制肿瘤新生血管形成,使肿瘤细胞因缺血而发生大量凋亡。 展开更多

关键词 胃癌 基因治疗 血管内皮细胞生长抑制因子151 血管内皮细胞生长抑制因子 融合基因治疗 内皮细胞抑制素 胃癌细胞 ECV-304细胞 SGC-7901 肿瘤新生血管形成

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内皮细胞抑制素 被引量：1

8

作者 盛节 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 1998年第6期282-284,共3页

内皮细胞抑制素是最新发现的能抑制血管内皮细胞增生,从而对癌症的生长和转移都有强烈的抑制作用的因子。有希望用于癌的诊断和治疗。本文讨论了它的发现、结构、功能和应用前景。

关键词 内皮细胞抑制素 结构与功能

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鼠内皮细胞抑制素的克隆及在COS-7细胞中的分泌表达

9

作者 汤宇澄 孙文长 +2 位作者 居中华 钱关祥 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第5期392-394,共3页

目的从小鼠肝脏中克隆出endostatin并在COS - 7细胞中分泌表达 ,为其在肿瘤抗血管基因治疗中的应用打下基础。　方法用RT -PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA并克隆入测序载体PUC -T测序证实后 ,装入分泌表达载体 pSEC -hygromycin ,... 目的从小鼠肝脏中克隆出endostatin并在COS - 7细胞中分泌表达 ,为其在肿瘤抗血管基因治疗中的应用打下基础。　方法用RT -PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA并克隆入测序载体PUC -T测序证实后 ,装入分泌表达载体 pSEC -hygromycin ,用DEAE -葡聚糖转染COS - 7细胞 ,从mRNA水平及蛋白水平检测内皮细胞抑制素的表达。　结果测序结果显示所克隆的小鼠endostatincDNA与文献报道的完全一致 ,RT -PCR显示转染后的COS - 7细胞有endostatin的mRNA表达 ,Western -blot显示转染后的COS - 7细胞上清及包浆内均有目的蛋白的表达。　结论成功克隆并分泌表达了小鼠endostatin。 展开更多

关键词 内皮细胞抑制素 克隆 COS-7细胞 分泌表达

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内皮细胞抑制素的研究进展

10

作者 倪之嘉 潘卫 +1 位作者 王元和 戚中田 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 2001年第6期372-375,共4页

内皮细胞抑制素是一种新发现的特异的血管内皮细胞增殖抑制剂 ,它可以有效地抑制内皮细胞生长 ,对肿瘤血管形成具有强烈的抑制作用 ,在抗实体瘤方面有显著的效果 ,本文就它的发现、结构、生物学活性。

关键词 ENDOSTATIN 内皮细胞抑制素 血管生成 抗肿瘤作用

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内皮细胞抑制素(Endostatin)及其抗肿瘤作用的研究进展

11

作者 马占龙 《国外医学（临床放射学分册）》 2002年第5期263-265,共3页

血管生成是恶性肿瘤生长和转移的病理学基础,Endostatin因为具有很强的抑血管作用而被广泛研究。介绍了Endostatin的生物学特征、抑血管及抗肿瘤作用。Endostatin的研究为肿瘤的介入治疗提供了新的方法。

关键词 内皮细胞抑制素 抗肿瘤作用 研究进展 分子生物学 血管生成因子 血管内皮细胞 细胞凋亡 介入治疗

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内皮细胞抑制素——一种新的抗肿瘤药物

12

作者 王廷 窦科峰 《国际外科学杂志》 2001年第1期17-19,共3页

内皮细胞抑制素 ( endostatin)是迄今发现的最强的血管生成抑制因子 ,其作用单一、低毒、不产生抗药性的特点使它成为一种极有前途的抗肿瘤药物。本文介绍了国内外对它的结构、功能及其应用的一些研究近况 。

关键词 内皮细胞抑制素 抗肿瘤 结构 功能

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内皮细胞的抑制素(Endostatin)

13

作者 盛节 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 1998年第3期82-85,共4页

内皮细胞抑制是最新发现的能抑制血管内皮细胞增生,从而对感症的生长和转移都有强烈的抑制作用的因子。有希望用于癌的诊断和治疗。本文讨论了它的发现、结构、功能和应用前景。

关键词 内皮细胞抑制素 结构与功能

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重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体的构建及其应用 被引量：3

14

作者 倪之嘉 潘卫 +4 位作者 王元和 戚中田 施靖华 付志仁 王强 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期141-143,共3页

目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组... 目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生重组腺病毒Ad IL3 Endo。体外转染人结肠癌SW62 0细胞并观察其上清对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)生长的影响。结果　扩增到的Ad IL3 Endo的滴度为 4 .3× 1 0 1 2 空斑形成单位 (pfu) /L ,多聚酶链反应 (PCR)显示在转染的细胞中有人EndostatincDNA的存在 ,Westernblot显示转染细胞上清中有人Endostatin蛋白表达 ,台盼蓝染色显示其上清作用 72h后HUVEC的生长被抑制了 67% (P <0 .0 5)。结论　所制备的重组人Endostatin腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人Endostatin 。 展开更多

关键词 腺病毒 基因表达 血管形成抑制剂 载体 重组人内皮细胞抑制素 ENDOSTATIN 基因治疗

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脂质体介导的鼠内皮细胞抑制素基因治疗人肝癌的研究 被引量：2

15

作者 汤宇澄 居中华 +1 位作者 钱关祥 陈诗书 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期187-190,共4页

目的 :利用内皮细胞抑制素进行肿瘤抗血管基因治疗的尝试。方法 :用RT PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA ,经测序证实后 ,装入分泌表达载体pSEC hygromycin ,用DEAE 葡聚糖将其转染COS 7细胞 ,从mRNA水平及蛋白水平检测内皮细胞抑... 目的 :利用内皮细胞抑制素进行肿瘤抗血管基因治疗的尝试。方法 :用RT PCR从鼠肝脏扩增出内皮细胞抑制素cDNA ,经测序证实后 ,装入分泌表达载体pSEC hygromycin ,用DEAE 葡聚糖将其转染COS 7细胞 ,从mRNA水平及蛋白水平检测内皮细胞抑制素的表达 ,并观察分泌上清是否具有特异性抑制bFGF刺激的内皮细胞增殖作用 ,并通过TDT介导的dUTP缺口末端标记法和琼脂糖电泳来探讨其作用机制。在体外利用阳离子脂质体介导分泌表达载体pSEC endo进行抗肿瘤研究。结果 :测序结果表明 ,克隆的鼠内皮细胞抑制素cDNA与文献报道的完全一致 ,RT PCR显示转染后的COS 7细胞有内皮细胞抑制素mRNA表达 ,Western blot证实转染COS 7细胞上清及包浆内均有目的蛋白表达。其分泌上清能抑制bFGF刺激的内皮细胞增殖作用 ,且这种作用是通过诱导细胞凋亡实现的 ,动物模型显示所构建分泌表达的载体能在肿瘤内表达 ,有效抑制荷瘤裸鼠人肝癌细胞周围的微血管形成及肿瘤的生长。结论 展开更多

关键词 鼠内皮细胞抑制素 肝癌 基因治疗 脂质体

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内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析 被引量：2

16

作者 吴江雪 符武钊 +2 位作者 张添元 罗进贤 吴群悦 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期83-86,共4页

采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K＿EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K＿EDN)。SDS＿P... 采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K＿EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K＿EDN)。SDS＿PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GS115(pPIC9K＿EDN)中获得高效表达。用30L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48h,生物量达到250OD,分泌量为150mg L,发酵液经SPStreamline,SPSepharoseFF阳离子交换柱和SepharoseHeparinHiTrap柱纯化,产物纯度达到98%。纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。 展开更多

关键词 人内皮细胞抑制素 基因表达 毕节酵母 高密度发酵 纯化 生物活性分析 肿瘤

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毕赤酵母高密度发酵生产重组人内皮细胞抑制素 被引量：1

17

作者 刘先俊 周慧云 黎波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期46-49,共4页

目的在microDCU-400发酵罐中探讨表达人血管内皮细胞抑制素(Endostatin)的毕赤酵母(GS115)工程菌株的高密度发酵条件。方法在发酵过程中,控制溶氧30%以上、温度30℃、pH5.3(生长阶段)或5.0(诱导表达阶段),在无机盐培养基中生长约18～22h... 目的在microDCU-400发酵罐中探讨表达人血管内皮细胞抑制素(Endostatin)的毕赤酵母(GS115)工程菌株的高密度发酵条件。方法在发酵过程中,控制溶氧30%以上、温度30℃、pH5.3(生长阶段)或5.0(诱导表达阶段),在无机盐培养基中生长约18～22h后,补加50%甘油继续生长约3～5h,OD600达到450以上,开始进行甘油-甲醇混合物逐渐过渡至甲醇、甲醇浓度由低至高、8h后达到最大诱导浓度(0.08ml/min/L)的诱导方式,维持诱导约60h。离心收集上清液。利用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶标检测试剂盒检测表达产物。结果在诱导表达阶段,OD600最高达到580以上(细胞湿重达到375g/L),表达产量为27.2mg/L,高于摇瓶表达水平(16.3mg/L)。结论在15L发酵罐中成功表达了人血管内皮细胞抑制素,为进一步大批量生产作了准备。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞抑制素 毕赤酵母 高密度发酵

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肿瘤切除和术后复发对乳腺癌患者血管生成平衡的影响 被引量：1

18

作者 唐金海 赵建华 +2 位作者 徐甫保 秦建伟 龚建平 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2005年第9期672-675,共4页

目的观察乳腺癌患者血清血管内皮生长因子(VEGF)和内皮细胞抑制素(ES)浓度比值在手术前、后及复发时的变化,探讨肿瘤切除和术后复发对体内血管生成平衡的可能影响。方法分别采用竞争性酶联免疫试验和ELISA法测定5 9例乳腺癌患者手术前... 目的观察乳腺癌患者血清血管内皮生长因子(VEGF)和内皮细胞抑制素(ES)浓度比值在手术前、后及复发时的变化,探讨肿瘤切除和术后复发对体内血管生成平衡的可能影响。方法分别采用竞争性酶联免疫试验和ELISA法测定5 9例乳腺癌患者手术前、后和复发时血清VEGF及ES水平,计算VEGF/ES比值,并与3 0例乳腺良性肿瘤和5 9例正常对照组比较。结果(1)手术前乳腺癌患者血清VEGF和ES水平与两对照组相比均显著增高(P<0.0 0 5),VEGF/ES比值为9.1;手术后3周时,血清VEGF水平明显下降,而ES仍保持在较高状态,VEGF/ES比值下降至3.3。(2)复发患者术后VEGF/ES比值与术前相比也有所下降(1 0.3 vs 7.4),但一旦疾病复发时VEGF水平又急剧上升,VEGF/ES比值升至1 4.2。多因素分析显示,术后VEGF/ES比值是影响乳腺癌患者复发转移率的一个独立因素。结论乳腺癌肿瘤切除可影响患者体内血清VEGF-ES间平衡,监测VEGF/ES比值对患者预后评估有一定的辅助意义。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/血液 血管内皮生长因子/血液 内皮细胞抑制素/血液

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血管内皮细胞抑制素的作用和应用前景

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作者 薛金晶 朱善德 《沈阳部队医药》 2004年第6期468-469,共2页

肿瘤细胞可以分泌多种血管生成因子，如成纤维细胞生长因子(FCF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)等，同时也产生许多血管生成抑制因子，如血管抑制素(angiostatin)、血管内皮细胞抑制素(endostatin)等。血管内皮细胞抑制素是迄今最强的血... 肿瘤细胞可以分泌多种血管生成因子，如成纤维细胞生长因子(FCF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)等，同时也产生许多血管生成抑制因子，如血管抑制素(angiostatin)、血管内皮细胞抑制素(endostatin)等。血管内皮细胞抑制素是迄今最强的血管形成抑制因子，能有效地抑制血管内皮增殖，促进肿瘤细胞凋亡，抑制几乎所有的实体癌的生长和转移。本文介绍其作用，并探讨其应用前景。 展开更多

关键词 血管内皮细胞抑制素 组织分布 血管生成抑制因子 基因治疗 内皮细胞凋亡

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血管内皮细胞抑制素的研究进展

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作者 黄纯 李凯 《中国肿瘤临床与康复》 2005年第3期277-280,共4页

关键词 肿瘤 血管内皮细胞抑制素

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