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水稻基因枪法多基因转化研究 被引量：23
1
作者 戴顺洪 李良材 +3 位作者 丁月云 何锶洁 曹守云 田文忠 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1998年第4期345-350,共6页
为探索多基因转化系统,利用基因枪法进行水稻3个质粒的共转化研究,结果从25个转基因植株中获得3个三转化植株N12、K4-39和K1-1-66,成功地将分别位于不同质粒载体上的GUS,hpt和RTBV CP基因同时导入到水稻中。3个三转化植株中N12、K4-39... 为探索多基因转化系统,利用基因枪法进行水稻3个质粒的共转化研究,结果从25个转基因植株中获得3个三转化植株N12、K4-39和K1-1-66,成功地将分别位于不同质粒载体上的GUS,hpt和RTBV CP基因同时导入到水稻中。3个三转化植株中N12、K4-39正常可育。对N12的后代遗传分析表明,该转基因植株中3个载体所携外源基因均呈孟德尔式分离(3:1),3个外源基因分别整合到水稻的两条染色体上。GUS基因与hpt连锁,RTBV CP位于另一条染色体上。 展开更多
关键词 水稻 基因枪法转化 多基因转化 共转化
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无选择标记转基因植物的培育 被引量：19
2
作者 陈松彪 李旭刚 +1 位作者 王锋 朱祯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期1-7,共7页
植物转基因研究中通常都要使用选择标记基因来筛选转化细胞并获得转基因植株。但是当转基因植株育成后,选择标记基因就失去了存在的意义。为了消除由选择标记基因引起的安全性隐患,人们发展了一些培育无选择标记转基因植物的策略。这些... 植物转基因研究中通常都要使用选择标记基因来筛选转化细胞并获得转基因植株。但是当转基因植株育成后,选择标记基因就失去了存在的意义。为了消除由选择标记基因引起的安全性隐患,人们发展了一些培育无选择标记转基因植物的策略。这些策略主要包括共转化、位点特异性重组和转座子转座等。去除选择标记基因将促进公众对转基因作物的接受。评述了无选择标记转基因植物的研究进展。 展开更多
关键词 选择标记 转基因植物 转座子 位点特异性 植物转基因 共转化 细胞 转基因植株 培育 育成
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通过共转化和花药培养快速获得直链淀粉含量降低且无抗性标记的转基因水稻 被引量：20
3
作者 沈革志 王新其 +2 位作者 殷丽青 蔡秀玲 王宗阳 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2004年第6期637-643,共7页
用根癌农杆菌共转化的方法将p13W8质粒(含反义蜡质基因)和pCAMBIA1300质粒(含潮霉素抗性基因)导入水稻。经PCR检测,发现在29个T1群体中发生抗潮霉素抗性基因和反义蜡质基因的分离;从1264个T1单株中筛选到183个只带反义蜡质基因片段的转... 用根癌农杆菌共转化的方法将p13W8质粒(含反义蜡质基因)和pCAMBIA1300质粒(含潮霉素抗性基因)导入水稻。经PCR检测,发现在29个T1群体中发生抗潮霉素抗性基因和反义蜡质基因的分离;从1264个T1单株中筛选到183个只带反义蜡质基因片段的转基因植株。选择了4个直链淀粉含量降低的T1单株进行花药培养,获得正常结实的花培苗34株;经PCR检测,有23株为只含反义蜡质基因而无潮霉素抗性基因的植株。从转化到获得直链淀粉含量降低、遗传稳定的转基因植株仅用了一年半时间。 展开更多
关键词 水稻 反义蜡质基因 共转化 直链淀粉含量
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共转化法获得无筛选标记的转PEPC、PPDK基因水稻恢复系纯合体 被引量：20
4
作者 袁定阳 段美娟 +3 位作者 谭炎宁 易自力 袁隆平 辛世文 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2007年第2期57-63,共7页
用根癌农杆菌共转化的方法将pSB130/CK质粒[目的基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)、磷酸丙酮酸二激酶基因(PPDK)与筛选标记潮霉素抗性基因HPT分别构建于2个T-DNA区]导入水稻恢复系R299,经PCR、Southern检测,筛选到T0代13个转基因... 用根癌农杆菌共转化的方法将pSB130/CK质粒[目的基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)、磷酸丙酮酸二激酶基因(PPDK)与筛选标记潮霉素抗性基因HPT分别构建于2个T-DNA区]导入水稻恢复系R299,经PCR、Southern检测,筛选到T0代13个转基因植株。对T1～T3代转基因后代进行PCR跟踪鉴定,分离出无潮霉素抗性基因的转基因植株(PEPC+PPDK+HPT-),分离株系比率为15%～21%,分离株系中PEPC+PPDK+HPT-型单株分离频率为7.2%～10.0%。在T3代成功获得了无筛选标记的转基因纯合系3个(06D351,06D352和06D353),PEPC酶活性和光合速率分析结果表明,其PEPC活性比对照提高了1.5～4.9倍,光合速率提高了19%～40%,说明这些转基因纯系材料在水稻高光效育种上具有很大的应用价值。 展开更多
关键词 水稻恢复系 共转化 C4基因 PEPC PPDK 高光效育种
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基因枪转多基因库安托杨的获得 被引量：18
5
作者 王建革 苏晓华 +4 位作者 纪丽丽 张冰玉 胡赞民 黄荣峰 田颖川 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2755-2760,共6页
通过基因枪共转化方法将枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因(SacB)、透明颤菌血红蛋白基因(vgb)、双价抗蛀干害虫基因(BtCry3A+OC-Ⅰ)、调节基因JERF36及报告基因NPTⅡ等外源基因导入库安托杨,共获得25株抗性植株.PCR及Southern杂交结果表明,外... 通过基因枪共转化方法将枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因(SacB)、透明颤菌血红蛋白基因(vgb)、双价抗蛀干害虫基因(BtCry3A+OC-Ⅰ)、调节基因JERF36及报告基因NPTⅡ等外源基因导入库安托杨,共获得25株抗性植株.PCR及Southern杂交结果表明,外源基因已整合到库安托杨基因组中,其中7株含有上述全部5个外源基因.BtCry3A ELISA实验表明,上述7株库安托杨BtCry3A基因已得到表达.且上述转基因植株在滨海盐碱地中生长良好. 展开更多
关键词 库安托杨 基因枪 多基因 共转化 转基因
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共转化法获得HAK1基因高表达烟草提高植株钾吸收能力 被引量：22
6
作者 谭颖 秦利军 +2 位作者 赵丹 赵杰宏 赵德刚 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期689-699,共11页
通过农杆菌介导,将仅含钾转运体蛋白基因HAK1和烟草TMV抗性蛋白基因CN的pSH-TH表达载体和仅含选择标记基因GUS::NPTII的pSH737表达载体共转化烟草K326,从抗性转化苗中筛选出32株T0代转基因植株,自交分离后经筛选获得43株无选择标记的T1... 通过农杆菌介导,将仅含钾转运体蛋白基因HAK1和烟草TMV抗性蛋白基因CN的pSH-TH表达载体和仅含选择标记基因GUS::NPTII的pSH737表达载体共转化烟草K326,从抗性转化苗中筛选出32株T0代转基因植株,自交分离后经筛选获得43株无选择标记的T1代转基因烟株,Southern blotting分析和PCR产物测序结果证明HAK1及CN功能基因已整合到烟草基因组中,且不含标记基因。转基因植株中的钾转运相关基因表达分析表明,细胞质膜P-H+-ATPase基因NHA1和烟草无机焦磷酸酶基因NVP1表达上调,烟草液泡膜V-H+-ATPase基因VAG1表达下调;而烟草钾外流通道蛋白基因TORK1表达在株系T1-87中下调,其余株系均上调;HAK1表达量除了在株系T1-141中下调外,在其他所有株系中均上调,其中株系T1-12、T1-51、T1-87和T1-100的HAK1表达量比野生型高3倍以上。株系T1-51、T1-87和T1-100的根系活力、ATPase活性、阳离子交换量(CEC)及钾含量均显著高于野生型,表明钾离子转运体基因HAK1超量表达显著提高了烟草植株的富钾能力,所获得的无标记的安全转基因株系可作为优质烟叶品质培育的亲本材料。 展开更多
关键词 烟草 共转化 HAK1 钾
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无载体主干序列的bar和cecropin B基因表达框共转化水稻 被引量：16
7
作者 赵艳 于彦春 +2 位作者 钱前 颜美仙 黄大年 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期135-141,共7页
基因枪等直接转化法可将去除质粒载体主干序列的外源基因表达框导入植物基因组 ,消除质粒主干序列对植物基因组的影响 ,同时由于转基因分子较小 ,比较容易实现多个基因的共转化 ,在植物基因工程育种上有重要的应用价值。研究了基因枪介... 基因枪等直接转化法可将去除质粒载体主干序列的外源基因表达框导入植物基因组 ,消除质粒主干序列对植物基因组的影响 ,同时由于转基因分子较小 ,比较容易实现多个基因的共转化 ,在植物基因工程育种上有重要的应用价值。研究了基因枪介导外源基因表达框 (包括启动子、基因开放阅读框和终止子 )转化水稻的影响因素和转基因的整合模式 ,结果表明 :(1)基因枪介导外源基因表达框转化水稻的频率约在 0 1%～ 0 5 %之间 ,非选择标记基因与选择标记基因的共转化频率约为 5 0 %～ 6 0 % ,增加基因表达框DNA浓度可提高转化率。相同基因构建物对不同品种水稻的转化率不同 ,基因构建物的侧边序列对基因枪转化的品种差异可能具有重要影响。 (2 )非选择标记基因cecropinB表达框在水稻基因组内整合模式简单 ,仅有 1～ 3个拷贝 ;筛选标记基因bar表达框却比完整质粒转化后的整合模式复杂得多 ,插入拷贝数在 4～ 14个之间。线形基因表达框的游离DNA末端和CaMV 展开更多
关键词 无载体主干序列 BAR CECROPIN B基因 表达框 共转化 水稻
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提高农杆菌介导转化水稻效率的因素 被引量：15
8
作者 李双成 王世全 +4 位作者 尹福强 邹良平 起登风 江洪 李平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期231-237,共7页
以3个籼稻品种和2个粳稻品种为对象,对农杆菌转化水稻过程中影响转化效率的因素进行了研究。结果表明,菌株AGL1和EHA105按一定比例混合共转化和转化前菌体重悬对抗性愈伤率有显著影响;琼脂粉加倍和超净工作台上风干4h的方法因能明显提... 以3个籼稻品种和2个粳稻品种为对象,对农杆菌转化水稻过程中影响转化效率的因素进行了研究。结果表明,菌株AGL1和EHA105按一定比例混合共转化和转化前菌体重悬对抗性愈伤率有显著影响;琼脂粉加倍和超净工作台上风干4h的方法因能明显提高抗性愈伤率和分化率而被认为是最适合的干燥培养方式;分化培养基中加入二甲基亚砜(DMSO)或脯氨酸(Pro)可以提高分化率;壮苗时加入适量的NAA有利于壮根并提高移栽成活率。应用此农杆菌转化系统,获得了一批经PCR和点杂交鉴定的转基因植株。 展开更多
关键词 农杆菌介导转化 水稻 农杆菌转化系统 二甲基亚砜 分化培养基 移栽成活率 转基因植株 粳稻品种 籼稻品种 转化效率 比例混合 培养方式 杂交鉴定 分化率 对抗性 共转化 高抗性 工作台 脯氨酸 NAA PCR 愈伤 体重 适量 壮苗
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农杆菌介导的水稻双载体共转化法中部分影响因素的研究 被引量：14
9
作者 陆美芳 刘巧泉 +1 位作者 于恒秀 顾铭洪 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期55-62,共8页
以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌... 以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌株搭配及其不同浓度配比对共转化效率的影响。结果表明,在两种农杆菌菌液浓度比为1:1的情况下,农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301组合共转化水稻的效率要高于其他菌株的组合;在以农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301进行共转化时,两种菌液浓度比为1:2时共转化效率最高。 展开更多
关键词 水稻 共转化 T-DNA区 GUS瞬间表达 水稻愈伤组织 农杆菌介导 共转化法 双元载体 GUS报告基因 中部 选择标记基因 转化效率 T-DNA
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利用共转化和花药培养技术快速获得无选择标记的三价转基因水稻 被引量：13
10
作者 朱丽 傅亚萍 +4 位作者 刘文真 胡国成 斯华敏 唐克轩 孙宗修 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期475-481,共7页
采用农杆菌介导的水稻转化体系,将包含选择标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)和目的基因人乳铁蛋白(hLF)、高赖氨酸(SB401)、高甲硫氨酸(RZ10)基因的双T-DNA表达载体p13HSR转化水稻。筛选潮霉素磷酸转移酶基因和目的基因都是阳性的转基因植... 采用农杆菌介导的水稻转化体系,将包含选择标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)和目的基因人乳铁蛋白(hLF)、高赖氨酸(SB401)、高甲硫氨酸(RZ10)基因的双T-DNA表达载体p13HSR转化水稻。筛选潮霉素磷酸转移酶基因和目的基因都是阳性的转基因植株,按单株进行花药培养,快速得到无选择标记而目的基因阳性的转基因纯合植株,得率为9.87%。RT-PCR检测结果显示外源基因已整合到转基因水稻基因组中并转录。同时观测到三价表达载体在转化过程中部分目的基因丢失。 展开更多
关键词 花药培养 共转化 无选择标记 转基因水稻 双T-DNA结构
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通过根癌农杆菌介导的共转化获得具有蜡质基因反义片段的转基因水稻 被引量：10
11
作者 沈革志 殷丽青 +2 位作者 王新其 蔡秀玲 王宗阳 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第6期569-575,共7页
在构建剔除潮霉素抗性基因的反义蜡质基因重组质粒p1 3W8的基础上 ,用分别携带p1 3W8质粒和有潮霉素抗性基因的pCAMBIA1 3 0 0质粒的根癌农杆菌 ,在不同处理条件下对粳稻 3个品种进行共转化。试验结果显示 ,共感染混合液中pCAMBIA1 3 0 ... 在构建剔除潮霉素抗性基因的反义蜡质基因重组质粒p1 3W8的基础上 ,用分别携带p1 3W8质粒和有潮霉素抗性基因的pCAMBIA1 3 0 0质粒的根癌农杆菌 ,在不同处理条件下对粳稻 3个品种进行共转化。试验结果显示 ,共感染混合液中pCAMBIA1 3 0 0菌液比例高 ,抗性愈伤组织的转化频率也较高 ;抗性愈伤组织的PCR检测结果表明 ,潮霉素抗性基因的阳性检测率为 98% ,反义蜡质基因的阳性检测率为68%。在 1 0 5株转基因植株中 ,反义蜡质基因阳性株为 3 0株 ,占转基因植株的 2 8.6%。乙酰丁香酮处理组的平均转化频率略高于未处理组 ;在乙酰丁香酮的各种处理中 ,直接浸泡愈伤组织的转化频率稍高于其它处理方式。 展开更多
关键词 反义蜡质基因 共转化 根癌农杆菌 转基因水稻
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Cre/lox定位重组系统共转化烟草及其精确重组 被引量：9
12
作者 李雷 刘松梅 +1 位作者 胡鸢雷 林忠平 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第21期2291-2295,共5页
将噬菌体P1的Cre/lox定位重组系统的cre基因和含lox识别位点的两种结构通过土壤农杆菌介导的共转化方法导入烟草 ,得到双抗阳性苗 .经PCR检测表明 ,共转化苗中已包含上述两种结构 ,实验证明Cre/lox定位重组系统在共转化烟草中已进行Cre... 将噬菌体P1的Cre/lox定位重组系统的cre基因和含lox识别位点的两种结构通过土壤农杆菌介导的共转化方法导入烟草 ,得到双抗阳性苗 .经PCR检测表明 ,共转化苗中已包含上述两种结构 ,实验证明Cre/lox定位重组系统在共转化烟草中已进行Cre酶介导的DNA删除 .对重组后的有关DNA片段进行再克隆 ,序列分析表明 ,Cre/lox定位重组系统在烟草基因组中进行了精确的DNA重组反应 . 展开更多
关键词 CRE/LOX 定位重组系统 烟草 共转化 精确重组
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不同转化方法培育无抗性选择标记转基因水稻效率的比较 被引量：11
13
作者 于恒秀 陆美芳 +3 位作者 陈秀花 龚志云 刘巧泉 顾铭洪 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期120-126,共7页
为研究不同的转化方法培育无抗性选择标记转基因水稻的效果,以4个籼粳稻品种为受体材料,比较了用农杆菌介导的双菌双载体和双T-DNA单载体两种共转化技术的共转化频率及随后获得的无抗性选择标记基因转化子的效率。结果表明,在双菌双载... 为研究不同的转化方法培育无抗性选择标记转基因水稻的效果,以4个籼粳稻品种为受体材料,比较了用农杆菌介导的双菌双载体和双T-DNA单载体两种共转化技术的共转化频率及随后获得的无抗性选择标记基因转化子的效率。结果表明,在双菌双载体介导的转化中,4个水稻品种的平均共转化频率为10.1%,其中55.6%的共转化植株自交后代中可筛选出无抗性选择标记的转基因水稻植株。在单载体双T-DNA介导的共转化中,平均共转化频率为45.0%,从其中60.0%的共转化植株自交后代中可获得无抗性选择标记的转基因植株,即双T-DNA单载体法的去选择标记的效率(27.0%)要较双菌双载体法(5.6%)高。 展开更多
关键词 水稻 农杆菌 无抗性选择标记 共转化
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Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究 被引量：4
14
作者 甄伟 汪阳明 +3 位作者 丁伟 陈溪 胡鸢雷 林忠平 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期477-482,共6页
对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxP位点的 (loxP p35S GUS loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS... 对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxP位点的 (loxP p35S GUS loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS基因的活性分析、分子检测、PCR检测及对重组后扩增DNA片段进行序列分析表明 :Cre loxP重组系统在转基因烟草中能精确高效地介导转基因的删除 ,但也存在部分植株不能完全删除的现象。 展开更多
关键词 Cre-loxP重组系统 转基因烟草 共转化 GUS活性分析 不完全删除 重组效率 LOXP位点
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双价抗虫基因共转化烟草叶绿体的研究 被引量：11
15
作者 苏宁 杨波 +4 位作者 孟昆 李佚女 孙萌 孙丙耀 沈桂芳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期394-398,共5页
分别构建苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因 [BtCryIA(C) ]和水稻巯基蛋白酶基因 (Oryzacystatin ,OC)叶绿体转化载体 ,其中Bt基因叶绿体转化载体以烟草叶绿体基因trnH psbA trnK为同源片段 ,以水稻 (OryzasativaL .)叶绿体 psbA基因启动子... 分别构建苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因 [BtCryIA(C) ]和水稻巯基蛋白酶基因 (Oryzacystatin ,OC)叶绿体转化载体 ,其中Bt基因叶绿体转化载体以烟草叶绿体基因trnH psbA trnK为同源片段 ,以水稻 (OryzasativaL .)叶绿体 psbA基因启动子和终止子为调控基因 ;OC基因叶绿体表达载体以烟草叶绿体基因片段 psbA ORF5 12为同源片段 ,以烟草叶绿体 16S启动子和终止子为调控基因 ;两载体均以壮观霉素抗性基因 (aadA)为筛选基因。利用基因枪方法 ,共转化烟草叶片 ,获得壮观霉素抗性植株。经Southern、Western检测、表达蛋白活性测定证明 ,双价抗虫基因己整合到烟草叶绿体中并得到表达。转基因植株抗棉铃虫试验表明 。 展开更多
关键词 双价抗虫基因 共转化 OC基因 BT基因 叶绿体转化 抗虫作用 转基因烟草
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用基因枪法获得转异天南星基因aha抗蚜虫小麦 被引量：13
16
作者 张彦 喻修道 +1 位作者 唐克轩 夏兰琴 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1538-1543,共6页
凝集素是一类具有特异糖结合活性的蛋白,对蚜虫等害虫有很强的抗杀作用。利用异天南星凝集素基因aha(Arisaema heterophyllum agglutinin)以及水稻Rubisco小亚基启动子,构建了aha基因植物绿色组织特异性表达载体,并采用基因枪转化方法,... 凝集素是一类具有特异糖结合活性的蛋白,对蚜虫等害虫有很强的抗杀作用。利用异天南星凝集素基因aha(Arisaema heterophyllum agglutinin)以及水稻Rubisco小亚基启动子,构建了aha基因植物绿色组织特异性表达载体,并采用基因枪转化方法,与携带bar基因的pAHC20载体共转化到小麦品种科农199中。经过愈伤诱导、再生和筛选以及PCR鉴定,获得aha转基因植株42株,平均转化效率为2.41%。对转aha基因植株后代PCR鉴定表明,T1代转基因植株的分离比例基本符合孟德尔遗传规律。利用室内多目标综合判别法评定抗蚜虫特性,8个T1代转基因株系中有高抗材料1份,低抗材料3份,占参试比例44.4%。本研究为获得抗蚜虫转基因小麦新材料奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 植物凝集素 Rubisco小亚基启动子 基因枪转化 共转化 抗虫性
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发根农杆菌介导的菠菜毛状根遗传转化体系的建立 被引量：13
17
作者 徐悦 曹英萍 +2 位作者 王玉 付春祥 戴绍军 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期515-521,共7页
发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染植物后可诱导植物产生毛状根。菠菜(Spinacia oleracea)是常见的食用蔬菜,目前尚未见菠菜毛状根的研究报道。经筛选得到适合诱导菠菜毛状根的发根农杆菌菌株LBA9402,LBA9402侵染菠菜外植体茎后... 发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染植物后可诱导植物产生毛状根。菠菜(Spinacia oleracea)是常见的食用蔬菜,目前尚未见菠菜毛状根的研究报道。经筛选得到适合诱导菠菜毛状根的发根农杆菌菌株LBA9402,LBA9402侵染菠菜外植体茎后,毛状根的诱导率最高可达16%。菠菜毛状根呈白色,具有丰富的根毛,能在无外源激素的固体培养基上快速增殖生长。通过诱导菠菜毛状根产生愈伤组织并进行分化,获得了菠菜毛状根的再生植株,再生率为8%。此外,LBA9402可将含有Ri质粒的T-DNA和携带外源GFP基因的Ti质粒T-DNA共同导入外植体中。PCR检测和荧光显微观察结果显示, rol B及GFP基因在菠菜毛状根基因组中稳定表达,共转化频率为50%。 展开更多
关键词 共转化 毛状根 植物再生体系 菠菜
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利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花 被引量：13
18
作者 孙磊 张启翔 +2 位作者 周琳 陆苗 蔡明 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期727-734,共8页
为获得具有无选择标记的转基因菊花,构建了一个双T-DNA超级双元载体pCAMBIA1301-gus,其中一个T-DNA结构域中含有选择标记基因hpt,另一个T-DNA结构域中含有目的基因gus,而且两个T-DNA结构顺序相连,中间没有其他插入序列。利用农杆菌介导... 为获得具有无选择标记的转基因菊花,构建了一个双T-DNA超级双元载体pCAMBIA1301-gus,其中一个T-DNA结构域中含有选择标记基因hpt,另一个T-DNA结构域中含有目的基因gus,而且两个T-DNA结构顺序相连,中间没有其他插入序列。利用农杆菌介导转化菊花幼嫩茎尖薄层细胞,共获得506个抗性植株,通过PCR和Southern杂交检测表明共转化率为38.4%,对其中17个同时整合了hpt和gus基因的植株自交获得的T1代株系进行检测,发现约有15.8%的T1代植株中不含选择标记基因hpt,结果表明双T-DNA载体系统能有效地用于培育无选择标记转基因植物。 展开更多
关键词 菊花 转基因 双T-DNA 共转化 无选择标记
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基因枪介导质粒共转化整合模式的FISH研究 被引量：4
19
作者 金危危 李宗芸 +3 位作者 宁顺斌 凌定厚 李立家 宋运淳 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第15期1281-1284,T001,共5页
利用多色荧光原位杂交（Ｍｕｌｔｉ－ｃｏｌｏｒ ＦＩＳＨ），在基因枪介导共转化的转基因水稻中检出了目的基因ｂａｒｎａｓｅ－ｐｓｌ片段和报告基因ｐＨｃｉｎｔＧ．在供试两单株的染色体上，这两个外源基因各有２－３个整合位点．... 利用多色荧光原位杂交（Ｍｕｌｔｉ－ｃｏｌｏｒ ＦＩＳＨ），在基因枪介导共转化的转基因水稻中检出了目的基因ｂａｒｎａｓｅ－ｐｓｌ片段和报告基因ｐＨｃｉｎｔＧ．在供试两单株的染色体上，这两个外源基因各有２－３个整合位点．多数情况下，ｂａｒｎａｓｅ－ｐｓｌ片段与ｐＨｃｉｎｔＧ整合在染色体的同一位置．同时，选株Ｑ１３的伸展ＤＮＡ纤维荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ ＦＩＳＨ）显示，两基因表现为衔接重复，重复间具有短的间隔．结合 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果，对基因枪介导共转化可能的整合模式进行了分析． 展开更多
关键词 FISH 转基因水稻 共转化 整合模式 荧光原位杂交技术 基因枪介导 整合位点
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SMART法构建蚕豆全植株cDNA文库 被引量：6
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作者 岳觇宇 吴润果 +1 位作者 田文洪 向本琼 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-193,共3页
采用了一种简单而快速的全长cDNA文库构建法,即SMART法,并应用cDNA片段与质粒共转化大肠杆菌的方法,成功地构建了蚕豆全植株cDNA文库.
关键词 SMART法 蚕豆全植株cDNA文库 共转化
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