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IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达 被引量：10
1
作者 何贤辉 徐丽慧 +3 位作者 刘毅 江逊 蔡小嫦 曾耀英 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期172-176,共5页
目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞... 目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果　从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论　成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体 。 展开更多
关键词 吲哚胺双加氧酶 绿色荧光蛋白 融合蛋白 软骨细胞 共聚焦显微术
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共聚焦显微术测定大鼠和黄鼠心肌细胞游离Ca^(2+)浓度与温度的关系 被引量：3
2
作者 王世强 周曾铨 钱洪 《中国科学（C辑）》 CSCD 1999年第3期240-245,共6页
运用共聚焦激光扫描显微成像术对比研究非冬眠动物大鼠和冬眠动物黄鼠心肌细胞胞内Ca2 +浓度 ( [Ca2 +]i)随温度的变化 .首先标定了不同温度下Ca2 +探针indo 1的解离常数 ,提出并证明按α定态设定标定溶液pH值的必要性 .细胞荧光分析显... 运用共聚焦激光扫描显微成像术对比研究非冬眠动物大鼠和冬眠动物黄鼠心肌细胞胞内Ca2 +浓度 ( [Ca2 +]i)随温度的变化 .首先标定了不同温度下Ca2 +探针indo 1的解离常数 ,提出并证明按α定态设定标定溶液pH值的必要性 .细胞荧光分析显示 ,大鼠心肌细胞 [Ca2 +]i 随温度降低显著上升 ,低温下频繁出现自发钙波 ,胞内发生钙超载 ;相比较冬眠动物黄鼠心肌细胞 [Ca2 +]i 在相同条件下保持稳定 ,避免发生钙超载 .认识其中的钙稳态机制可能对有关医学问题有潜在的指导意义 . 展开更多
关键词 心肌细胞 钙离子 心律失常 共聚焦显微术
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光学成像技术在膜离子通道研究中的应用
3
作者 陈谨 陈珏旭 吉永华 《自然杂志》 北大核心 2006年第6期333-336,共4页
离子通道在细胞生理功能中发挥着重要的作用。随着现代显微荧光成像技术的不断发展,该项技术已成为继现代电生理技术之后,又一种可对细胞膜上离子通道的生理功能进行在体实时监测的有效工具。本文就近年兴起的近场光学成像技术、全内反... 离子通道在细胞生理功能中发挥着重要的作用。随着现代显微荧光成像技术的不断发展,该项技术已成为继现代电生理技术之后,又一种可对细胞膜上离子通道的生理功能进行在体实时监测的有效工具。本文就近年兴起的近场光学成像技术、全内反射荧光显微术、共聚焦显微术和荧光共振能量转移显微术等的原理以及其在离子通道研究中的应用作了简要描述。 展开更多
关键词 全内反荧光显微术 共聚焦显微术 荧光共振能量转移显微术 离子通道
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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究 被引量：1
4
作者 何贤辉 徐丽慧 +2 位作者 刘毅 蔡小嫦 曾耀英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期135-139,共5页
目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。 展开更多
关键词 CTLA4 绿色荧光蛋白 融合蛋白 共聚焦显微术
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重症休克时平滑肌细胞内的钙动力学变化 被引量：1
5
作者 王水云 马晓冬 +1 位作者 晏芳 郑昌东 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第2期154-158,共5页
使用荧光比率方法研究血管平滑肌细胞钙动力学变化在重症休克血管反应性降低中的作用.复制SD大鼠失血性休克模型,分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC),使用荧光探针Fluo-3/AM、FuraRed双标记比率方法结合激光扫描共聚焦显微成像技术测定... 使用荧光比率方法研究血管平滑肌细胞钙动力学变化在重症休克血管反应性降低中的作用.复制SD大鼠失血性休克模型,分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC),使用荧光探针Fluo-3/AM、FuraRed双标记比率方法结合激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞钙动力学变化,观察ATP敏感钾通道(KATP)特异性阻滞剂优降糖对血管反应性和钙动力学影响.实验结果发现休克后2h(失代偿期),血管反应性明显降低,norepinephrine作用带来的平滑肌细胞内钙离子浓度升高的程度明显减弱;加入优降糖可明显提高NE对平滑肌细胞内钙离子的升高作用,改善细动脉对NE的反应性,带来血管反应性部分恢复. 展开更多
关键词 共聚焦显微术 荧光比率 血管反应性 钙离子
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IL-13及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位
6
作者 王育文 许勇臣 姜晓峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期207-211,共5页
目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EG... 目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白真核表达载体,转染C0S-7细胞,以激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及其在细胞内的分布情况。结果:两种融和蛋白表达载体均构建正确,将其转染COS-7细胞后,在阳性克隆胞浆内均可见明亮的绿色荧光,胞核空虚。结论:成功构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达,表达的两种融和蛋白细胞内分布特征没有区别,均位于胞浆内。 展开更多
关键词 白细胞介素-13 变异体 绿色荧光蛋白 融合蛋白 共聚焦显微术
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细胞外钙调素对百合花粉细胞内钙离子浓度的影响 被引量：17
7
作者 尚忠林 马力耕 +1 位作者 王学臣 孙大业 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第1期12-17,共6页
以川百合 (LiliumdavidiiDuchartre)花粉为材料 ,利用低温装载法在完整花粉粒中成功地装载了酯化形式的钙离子荧光指示剂fluo_3AM ,利用激光共聚焦显微技术研究了细胞外钙调素对细胞内游离钙离子浓度的影响。结果发现外源纯化钙调素可... 以川百合 (LiliumdavidiiDuchartre)花粉为材料 ,利用低温装载法在完整花粉粒中成功地装载了酯化形式的钙离子荧光指示剂fluo_3AM ,利用激光共聚焦显微技术研究了细胞外钙调素对细胞内游离钙离子浓度的影响。结果发现外源纯化钙调素可以使细胞内游离钙离子的浓度升高 ,在一定范围内促进效果与钙调素浓度呈正相关。不能透过细胞膜的钙调素拮抗剂W7_agarose和植物钙调素抗血清处理都可以使花粉细胞质中游离钙离子浓度降低 。 展开更多
关键词 川百合 花粉 细胞外钙调素 游离钙离子 低温装载 激光共聚焦显微术 植物发育生理
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同源四倍体水稻胚乳发育:极核融合和胚乳细胞化 被引量：22
8
作者 王兰 刘向东 +3 位作者 卢永根 冯九焕 徐雪宾 徐是雄 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期281-289,共9页
利用激光扫描共聚焦显微术和塑料包埋半薄切片技术观察同源四倍体水稻极核融合及游离核进一步发育的过程 ,发现同源四倍体水稻约有 1 /3子房极核融合过程和游离核进一步发育与其二倍体原种的基本一致 ;2 /3子房出现各种异常现象 ,如极... 利用激光扫描共聚焦显微术和塑料包埋半薄切片技术观察同源四倍体水稻极核融合及游离核进一步发育的过程 ,发现同源四倍体水稻约有 1 /3子房极核融合过程和游离核进一步发育与其二倍体原种的基本一致 ;2 /3子房出现各种异常现象 ,如极核未受精、受精异常和胚乳游离核发育滞后等。应用荧光增白剂染色对胚乳细胞化过程进行观察 ,直接观察到胚乳初生壁的出现和形成过程以及不同部位的胚乳细胞壁的形成机理。表明同源四倍体水稻与二倍体水稻胚乳的细胞化过程基本一致 ,胚乳细胞初始垂周壁来源于珠孔端胚囊壁内突向心游离生长 ,初始平周壁来源于游离核有丝分裂产生的成膜体 ,而中间胚乳细胞壁则有些来源于游离核有丝分裂产生的成膜体 ,有些是自由生长而来。同源四倍体水稻胚乳细胞化过程也出现相当比例的异常现象 ,如无细胞壁形成、细胞化不同步和产生分枝状的细胞壁等。同源四倍体水稻胚乳发育过程中出现的极核融合。 展开更多
关键词 同源四倍体 水稻 胚乳发育 极核融合 胚乳细胞化 激光扫描共聚焦显微术 荧光显微术
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百合花粉细胞中钙离子的荧光测定法 被引量：14
9
作者 尚忠林 王永飞 +2 位作者 钱洪 马力耕 孙大业 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2001年第4期319-332,共14页
以川百合花粉为材料 ,利用孵育法在花粉原生质体中 ,特别是利用低温装载法在完整花粉粒中 ,成功地载入酯化形式的钙离子荧光探针fluo 3AM。利用激光共聚焦显微技术对花粉细胞质中游离钙离子的分布特点进行研究的结果表明 ,花粉萌发初期... 以川百合花粉为材料 ,利用孵育法在花粉原生质体中 ,特别是利用低温装载法在完整花粉粒中 ,成功地载入酯化形式的钙离子荧光探针fluo 3AM。利用激光共聚焦显微技术对花粉细胞质中游离钙离子的分布特点进行研究的结果表明 ,花粉萌发初期细胞质内游离钙离子呈极性分布 ,萌发沟附近的钙离子浓度明显高于其他部位 ,萌发孔附近最高 ,花粉细胞核中较低。文中对低温装载法的可行性进行了讨论。 展开更多
关键词 川百合 花粉 游离钙离子 fluo-3AM激光共聚焦显微术
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同源四倍体水稻亚种间杂种胚囊的结构及受精特点 被引量：16
10
作者 肖波 刘向东 +2 位作者 卢永根 李金泉 赵杏娟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1150-1156,i0002-i0004,共10页
利用激光扫描共聚焦显微术对11份同源四倍体水稻亚种间杂种的胚囊结构和双受精特点进行研究，结果表明，所有四倍体杂种均存在一定频率的败育胚囊，败育频率因组合而异，最高的败育率为23．8％，最低为5．5％，平均14．3％。败育胚囊主... 利用激光扫描共聚焦显微术对11份同源四倍体水稻亚种间杂种的胚囊结构和双受精特点进行研究，结果表明，所有四倍体杂种均存在一定频率的败育胚囊，败育频率因组合而异，最高的败育率为23．8％，最低为5．5％，平均14．3％。败育胚囊主要有胚囊退化、异常小胚囊、无卵器、无雌性生殖单位和极核位置异常等5种类型。杂种在双受精过程中也存在一定频率的异常，包括胚囊结构正常但未能受精和受精停滞等，其中未能受精的频率为3．5％～11．9％。平均7．9％，受精停滞的频率为1．1％～6．2％，平均3．7％。另外，还存在低频率（平均4．7％）的胚乳发育受阻。认为部分胚囊败育和受精异常（包括未能受精和受精停滞）是导致同源四倍体水稻亚种间杂种结实率降低的主要原因。 展开更多
关键词 同源四倍体水稻亚种间杂种 胚囊 受精 激光扫描共聚焦显微术
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用激光共聚焦显微术在小鼠卵母细胞中检测蛋白激酶C 被引量：13
11
作者 范衡宇 佟超 +1 位作者 李满玉 孙青原 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期900-903,共4页
用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究了小鼠卵母细胞中蛋白激酶C (PKC)α和 βⅠ的表达和定位 ,以及蛋白激酶C (PKC)和皮质颗粒的双标记 ,探讨了以哺乳动物卵母细胞为实验对象进行免疫荧光共聚焦显微研究的简便方法 .结果发... 用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究了小鼠卵母细胞中蛋白激酶C (PKC)α和 βⅠ的表达和定位 ,以及蛋白激酶C (PKC)和皮质颗粒的双标记 ,探讨了以哺乳动物卵母细胞为实验对象进行免疫荧光共聚焦显微研究的简便方法 .结果发现 ,PKCα和 βⅠ在小鼠生发泡期和MⅡ期卵母细胞中都有表达 ,但表达部位存在差异 .说明采用改进的激光共聚焦显微术 ,可以方便、灵敏地检测特异蛋白质在卵母细胞中的表达部位 ,从而为生殖。 展开更多
关键词 激光共聚焦显微术 卵母细胞 蛋白激酶C 小鼠 检测
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利用激光扫描共聚焦显微术对同源四倍体水稻胚囊形成与发育的进一步观察 被引量：13
12
作者 郭海滨 卢永根 +2 位作者 冯九焕 杨秉耀 刘向东 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第2期111-117,共7页
应用改进的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术(WCLSM),对同源四倍体水稻PDER-2B-4x胚囊的形成与发育过程进行观察。发现其胚囊的形成发育过程与二倍体的一致,可以清楚地划分为8个发育时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、大孢... 应用改进的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术(WCLSM),对同源四倍体水稻PDER-2B-4x胚囊的形成与发育过程进行观察。发现其胚囊的形成发育过程与二倍体的一致,可以清楚地划分为8个发育时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、大孢子母细胞减数分裂期、功能大孢子形成期、单核胚囊形成期、胚囊有丝分裂期、八核胚囊发育期和成熟胚囊期。除正常发育的过程外,大孢子发育的各个过程均出现一些异常现象,包括:细胞退化、核位置异常、核数目异常和细胞分化异常等。这些异常可能最终导致多种结构异常成熟胚囊的形成。 展开更多
关键词 同源四倍体水稻 整体染色透明激光扫描共聚焦显微术(WCLSM) 胚囊 发育
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嗅鞘细胞对神经干细胞增殖分化的影响 被引量：12
13
作者 唐洲平 王萍 +4 位作者 康慧聪 雷霆 朱遂强 王伟 方思羽 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1123-1124,共2页
目的研究嗅鞘细胞(OECs)和神经干细胞(NSCs)分别及共培养的相互作用,为CNS神经损伤修复提供移植的理论依据。方法分离培养NSCs和OECs,在无血清DMEM/F12液中NSCs和OECs共培养,用免疫细胞化学和激光共聚焦显微术来分析结果。结果共培养7d... 目的研究嗅鞘细胞(OECs)和神经干细胞(NSCs)分别及共培养的相互作用,为CNS神经损伤修复提供移植的理论依据。方法分离培养NSCs和OECs,在无血清DMEM/F12液中NSCs和OECs共培养,用免疫细胞化学和激光共聚焦显微术来分析结果。结果共培养7d观察OECs能促进NSCs增殖分化,分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,其中神经元比例高达78.2%。结论OECs可促进NSCs的增殖分化,其分化的神经元比例高。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 神经干细胞 共培养 增殖 分化 细胞增殖分化 激光共聚焦显微术 OECS NSCS 免疫细胞化学
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利用激光扫描共聚焦显微镜研究植物细胞发育形态学变化 被引量：13
14
作者 刘向东 《激光生物学报》 CAS CSCD 2007年第2期173-178,共6页
通过激光扫描共聚焦显微镜,利用不同种类(波长)的激光研究植物细胞发育形态学变化。结果表明,利用紫外激光(351 nm)扫描可以清楚地观察到拟南芥叶片表皮细胞的形态及其变化,在已分化的叶片表皮上可观察到包括“铺垫”表皮细胞(epidermal... 通过激光扫描共聚焦显微镜,利用不同种类(波长)的激光研究植物细胞发育形态学变化。结果表明,利用紫外激光(351 nm)扫描可以清楚地观察到拟南芥叶片表皮细胞的形态及其变化,在已分化的叶片表皮上可观察到包括“铺垫”表皮细胞(epidermal pavement cells)、气孔保卫细胞(guard cell)、气孔伴胞(subsidiarycells)、表皮毛细胞(trichomes)和表皮毛的足细胞(socket cells)等多种形态不同的细胞种类;利用蓝光激光(488nm)辅助曙红浅染,可清晰地显示出拟南芥根生长区内部的各种原始细胞,包括静止区(quiescent center)细胞、皮层/内皮层原始细胞(cortex/endodermal initial cell)、表皮/根冠原始细胞(epidermal/root cap initial cell)和中柱/根冠原始细胞(columella/root cap initial cell)等。利用双光子激光(800 nm)连续扫描30 s可以诱发叶绿体产生自发荧光,并可观察到叶绿体在叶肉细胞中的运动轨迹。结果说明激光扫描共聚焦显微镜在植物细胞形态及发育研究上具有独特的功能。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微术 植物细胞 双光子 拟南芥
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不同运动负荷小鼠心肌活细胞游离钙动态变化的LSCM研究 被引量：8
15
作者 张志琪 田振军 张小玲 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期82-84,共3页
目的 :探讨运动与心脏重塑的生物学机制中心肌细胞内游离钙的动态变化。方法 :采用激光扫描共聚焦显微技术 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌活细胞内游离钙浓度的变化进行观察、记录和分析 ,采用多道生理记录仪经颈动脉插管 ,对不同运动... 目的 :探讨运动与心脏重塑的生物学机制中心肌细胞内游离钙的动态变化。方法 :采用激光扫描共聚焦显微技术 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌活细胞内游离钙浓度的变化进行观察、记录和分析 ,采用多道生理记录仪经颈动脉插管 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌收缩功能进行记录与分析。结果 :与对照组比较 ,有氧运动组心脏发生肥大 ,左室内压力二阶导数增加了 47 1 7%(P <0 0 0 1 ) ,表明心肌收缩功能增强 ,静息期心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 基值无显著性变化 ,峰值显著性增加了 1 5 7 2 % (P <0 0 0 1 ) ,达峰时间延长了 3 8 5 % (P <0 0 0 1 ) ;大强度疲劳组心肌肥大 ,但心肌收缩功能降低 (-3 5 2 4% ,P <0 0 0 1 ) ,静息期心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 基值和峰值分别显著增加了 41 9% (P <0 0 0 1 )和 2 0 6 3 % (P <0 0 0 1 ) ,达峰时间延长了 74 8% (P <0 0 0 1 )。有氧运动组与大强度疲劳组比较 ,心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 峰值和达峰时间均有显著性差异 (P <0 0 0 1 )。结论 :不同运动负荷影响心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 的变化 ,大强度疲劳训练可导致心肌细胞内游离[Ca2 + ]i 和静息态基值大幅度升高 。 展开更多
关键词 运动负荷 小鼠 心肌活细胞 游离钙 动态变化 LSCM 激光扫描共聚焦显微术
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同源四倍体水稻受精与胚胎形成过程的观察 被引量：11
16
作者 张华华 刘向东 +1 位作者 卢永根 冯九焕 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第1期9-14,共6页
激光扫描共聚焦显微术具有“组织与细胞CT”的功能,可以对整体组织进行扫描并构建三维结构。在水稻胚囊发育研究上建立的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术辅助D IC法,对同源四倍体水稻广陆矮4号-4x和L202-4x受精和胚胎发育过程进行了研... 激光扫描共聚焦显微术具有“组织与细胞CT”的功能,可以对整体组织进行扫描并构建三维结构。在水稻胚囊发育研究上建立的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术辅助D IC法,对同源四倍体水稻广陆矮4号-4x和L202-4x受精和胚胎发育过程进行了研究,描述授粉后不同时段胚囊发育的特点,发现同源四倍体水稻受精、胚胎和胚乳发育过程及特点与正常的二倍体水稻的基本一致,但在不同发育时段中存在无胚、无胚乳胚囊、胚乳吞噬胚、胚胎发育停滞、胚囊退化等异常。2份材料的异常情况存在差异。这些异常均可能导致结实率降低。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微术 同源四倍体水稻 双受精 胚胎形成
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龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响 被引量：8
17
作者 高世勇 王秋娟 季宇彬 《中国天然药物》 SCIE CAS CSCD 2006年第3期224-229,共6页
目的:观察龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响,阐明龙葵碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法:采用激光共聚焦扫描显微术和Western blot法检测caspase-3和Bcl-2蛋白含量,并对二者在细胞内的位置进行定位。结果:龙葵碱能... 目的:观察龙葵碱对HepG2细胞内caspase-3及Bcl-2蛋白含量的影响,阐明龙葵碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法:采用激光共聚焦扫描显微术和Western blot法检测caspase-3和Bcl-2蛋白含量,并对二者在细胞内的位置进行定位。结果:龙葵碱能够显著升高HepG2细胞内caspase-3蛋白含量,降低Bcl-2的含量,并且均具有剂量依赖性。Bcl-2蛋白和caspase-3蛋白均在细胞浆内呈不均匀分布,在细胞核中无分布,龙葵碱对二者的分布没有影响。结论:龙葵碱通过抑制Bcl-2的活性,激活caspase-3蛋白,诱导细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 龙葵碱 caspase-3 BEL-2 激光共聚焦显微术 Western hlot 抗肿瘤作用机制
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细胞骨架染色中不同固定方法的探讨 被引量：9
18
作者 张维 骞爱荣 +4 位作者 高翔 胡丽芳 瓮媛媛 韩晶 商澎 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第1期149-153,共5页
探讨不同细胞固定方法对细胞骨架染色的影响,以期发现适合于微丝与微管细胞骨架染色的固定方法。本文分别采用0.5%戊二醛、95%乙醇、4%甲醛及无水冷丙酮等四种固定液对人骨肉瘤细胞MG-63进行固定,然后分别对微丝和微管进行染色、封片,... 探讨不同细胞固定方法对细胞骨架染色的影响,以期发现适合于微丝与微管细胞骨架染色的固定方法。本文分别采用0.5%戊二醛、95%乙醇、4%甲醛及无水冷丙酮等四种固定液对人骨肉瘤细胞MG-63进行固定,然后分别对微丝和微管进行染色、封片,采用激光共聚焦扫描显微镜观察细胞微丝及微管骨架的形态。同时采用图像分析方法对细胞骨架微丝、微管荧光图像进行定量分析。结果表明,0.5%戊二醛固定的细胞,微丝呈清晰的束状纤维,微管呈有规律的束状纤维;95%乙醇固定的细胞,微丝纤维连贯性差,微管纤维非常清晰;4%甲醛固定的细胞,微丝纤维之间比较模糊,微管纤维呈圆弧状,联贯性较差;无水冷丙酮固定的细胞,微丝明显皱缩,呈模糊状,微管清晰可见,连贯性较好。因此,不同固定液固定的原理不同,要根据实验目的,选择合适的固定方法。 展开更多
关键词 细胞骨架 固定方法 激光共聚焦显微术 人骨肉瘤细胞
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双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用 被引量：7
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作者 田喜凤 卢思奇 +1 位作者 尚红伟 王凤云 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第20期1977-1981,共5页
目的：观测双氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用．方法：将用含双氢青蒿素的改良TYI-S-33培养基培养后的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体，用专一性结合f-肌动蛋白（f-actin）的荧光染料罗... 目的：观测双氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用．方法：将用含双氢青蒿素的改良TYI-S-33培养基培养后的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体，用专一性结合f-肌动蛋白（f-actin）的荧光染料罗丹明．鬼笔环肽（rhodanmine phalloidin，RDP）标记微丝，结合微管的紫杉醇（Paclitaxel，Oregen Green488，P22310）标记微管，用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测、分析，用激光共聚焦显微镜（confocal microscopy,CFM）观察滋养体微丝和微管的变化．结果：经双氢青蒿素0．002mg／L（LC50）作用12h．RDP标记后，流式细胞仪检测结果显示，滋养体的微丝结构有明显的损伤，其FCM激发光荧光强度值（16.18±11．02）明显低于对照组（81．7±6．43），二者有显著性差异（P〈0．01）；激光共聚焦显微镜观察显示，虫体形态及轮廓不完整．经P22310标记后，共聚焦显微镜下显示，虫体的吸盘和鞭毛轮廓不清，荧光强度降低或消失，实验组吸盘面积的荧光强度值与对照组比较有显著性差异（X^2=3．154，P〈0．01）．结论：双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架有明显的损伤作用． 展开更多
关键词 双氢青蒿素 蓝氏贾第鞭毛虫 细胞骨架 流式细胞术 激光共聚焦显微术
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TSA处理供体细胞对组蛋白乙酰化和核重编程效果的影响 被引量：6
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作者 张东 杨鹭 +4 位作者 王勇胜 刘根胜 刘利杰 万敏 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1007-1012,共6页
克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用75 nmol.L-1曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分别处理供体细胞6、12和24 h,通过... 克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用75 nmol.L-1曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分别处理供体细胞6、12和24 h,通过核移植检测克隆胚胎发育率,并应用激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术检测处理细胞和克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平和细胞周期。结果显示:随着TSA处理时间的延长,供体细胞组蛋白H3K18乙酰化水平不断提高;以75 nmol.L-1TSA处理供体细胞12 h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(23.5%vs 15.7%,P<0.05);供体细胞经TSA处理的克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平与未处理组相比差异不显著(P>0.5);处理组和对照组细胞G0/G1期和S期比例间存在显著差异(P<0.05)。结论:TSA对核供体细胞的处理存在时间效应,75 nmol.L-1TSA处理12 h的牛胎儿成纤维细胞更易被卵母细胞重编程,显著提高了克隆胚的体外发育能力,初步证实TSA是通过提高供体细胞组蛋白乙酰化水平来促进供体细胞重编程的。 展开更多
关键词 核移植 曲古抑菌素A 重编程 激光共聚焦显微术
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