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猪圆环病毒2型全基因组的克隆及病毒拯救
1
作者
王紫凝
高章照
+2 位作者
董沁芳
全滟平
姜永厚
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2018年第4期468-473,共6页
为构建猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型(PCV2)感染性DNA克隆,以淋巴结病料组织中分离的PCV2细胞培养适应毒株为材料,通过基因序列分析比对,在PCV2基因组序列XbaⅠ酶切位点区设计重叠引物,进行全长扩增并克隆至pMD-18T和pBluescri...
为构建猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型(PCV2)感染性DNA克隆,以淋巴结病料组织中分离的PCV2细胞培养适应毒株为材料,通过基因序列分析比对,在PCV2基因组序列XbaⅠ酶切位点区设计重叠引物,进行全长扩增并克隆至pMD-18T和pBluescript SK,获得载体pMD-PCV2和pBluescript SK-PCV2。将pMDPCV2重组质粒大量扩增后,用XbaⅠ切出PCV2全基因组,在体外用T4DNA连接酶使其自环化。通过脂质体法将PCV2自环化产物转染至PK15细胞,并且经15次连续传代,分别用PCR、RT-PCR和间接免疫荧光测定(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测到PCV2的复制、转录和蛋白表达。该研究成功构建具有感染性的PCV2全基因组DNA,为PCV2致病机理和基因功能研究奠定基础。
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关键词
猪圆环病毒2型
全长
基因组
克隆
细胞转染
病毒拯救
下载PDF
职称材料
欧洲型PRRSV弱毒株全长基因组cDNA克隆的构建与分析
被引量：
3
2
作者
庄金山
袁世山
张建武
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期658-664,共7页
为了获得欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,通过RT-PCR技术扩增了AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克...
为了获得欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,通过RT-PCR技术扩增了AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克隆入改造过的pBluescriptⅡKS(+)载体中,从而获得了病毒的全长基因组cDNA克隆。测序结果表明,该弱毒株基因组序列全长为15 098 bp(不包括poly(A)尾)。同源性比较结果显示,Ningbo42株ORF7基因(EF473137)、FJ0603株Nsp2基因(EF592535)与该弱毒株的相应基因之间的同源性分别为100%和98%。这些数据暗示,国内欧洲型PRRSV Ningbo42株和FJ0603株的存在与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3密切相关。测序及酶切鉴定结果表明,欧洲型PRRSV全长基因组cDNA克隆已构建成功。
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关键词
欧洲型PRRSV
全长
基因组
cDNA
克隆
序列分析
下载PDF
职称材料
题名
猪圆环病毒2型全基因组的克隆及病毒拯救
1
作者
王紫凝
高章照
董沁芳
全滟平
姜永厚
机构
浙江理工大学生命科学学院
出处
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2018年第4期468-473,共6页
基金
浙江省自然科学基金项目(LY15C010006)
浙江省科技厅项目(2018C37051)
国家自然科学基金项目(31101831)
文摘
为构建猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型(PCV2)感染性DNA克隆,以淋巴结病料组织中分离的PCV2细胞培养适应毒株为材料,通过基因序列分析比对,在PCV2基因组序列XbaⅠ酶切位点区设计重叠引物,进行全长扩增并克隆至pMD-18T和pBluescript SK,获得载体pMD-PCV2和pBluescript SK-PCV2。将pMDPCV2重组质粒大量扩增后,用XbaⅠ切出PCV2全基因组,在体外用T4DNA连接酶使其自环化。通过脂质体法将PCV2自环化产物转染至PK15细胞,并且经15次连续传代,分别用PCR、RT-PCR和间接免疫荧光测定(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测到PCV2的复制、转录和蛋白表达。该研究成功构建具有感染性的PCV2全基因组DNA,为PCV2致病机理和基因功能研究奠定基础。
关键词
猪圆环病毒2型
全长
基因组
克隆
细胞转染
病毒拯救
Keywords
Porcine circovirus type 2
full length genome cloning
cell transfection
virus rescue
分类号
Q939.47 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
欧洲型PRRSV弱毒株全长基因组cDNA克隆的构建与分析
被引量：
3
2
作者
庄金山
袁世山
张建武
机构
中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期658-664,共7页
基金
国家自然科学基金项目(30530580)
文摘
为了获得欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,通过RT-PCR技术扩增了AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克隆入改造过的pBluescriptⅡKS(+)载体中,从而获得了病毒的全长基因组cDNA克隆。测序结果表明,该弱毒株基因组序列全长为15 098 bp(不包括poly(A)尾)。同源性比较结果显示,Ningbo42株ORF7基因(EF473137)、FJ0603株Nsp2基因(EF592535)与该弱毒株的相应基因之间的同源性分别为100%和98%。这些数据暗示,国内欧洲型PRRSV Ningbo42株和FJ0603株的存在与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3密切相关。测序及酶切鉴定结果表明,欧洲型PRRSV全长基因组cDNA克隆已构建成功。
关键词
欧洲型PRRSV
全长
基因组
cDNA
克隆
序列分析
Keywords
European-type PRRSV
full length genomie eDNA clone
sequence analysis
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒2型全基因组的克隆及病毒拯救
王紫凝
高章照
董沁芳
全滟平
姜永厚
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2018
0
下载PDF
职称材料
2
欧洲型PRRSV弱毒株全长基因组cDNA克隆的构建与分析
庄金山
袁世山
张建武
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008
3
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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