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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 被引量：8
1
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 韩雪清 刘在新 张永国 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-493,共4页
应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2... 应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM 5Zf(+)载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 4和pGEM 5Zf(+)/F5 7,再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM 5Zf(+)载体,构建出了CSFVC 株全长cDNA重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 C-株 脾淋毒 CDNA 分子克隆 兔脾组织 RNA 克隆 多片段一步连接法
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中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析 被引量：11
2
作者 韩雪清 李红卫 +11 位作者 刘湘涛 李小兵 马军武 涂长春 胡弘博 殷震 蒋帅 刘伯华 赵启祖 李健强 李忠润 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-57,共6页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (S... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (SK6)毒、C 株疫苗 (犊牛睾丸细胞 ,HCLV C)毒、HCV SM株 (石门 )毒、Brescia株 (荷兰 )毒、Alfort株 (德国 )毒的E2核苷酸序列同源性分别为 98 87%、98 34 %、94 58%、91 0 0 %、80 78% ;氨基酸同源性分别为 98 95%、97 37%、94 2 2 %、91 60 %、89 2 3%。对C 株兔脾毒与C 株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较 ,其结果为 :C 株兔脾毒与C 株细胞毒的差异很小甚至没有差异 ,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和 90年代流行毒之间有明显的差异 ,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 展开更多
关键词 猪瘟 兔化弱毒株 兔脾组织毒E2基因 序列分析
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兔脾淋组织肌肉注射对猪外周血细胞转录谱的影响 被引量：1
3
作者 庄许诺 陆芍华 +4 位作者 严梦涵 何晴 包松英 江兴华 王全溪 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第2期243-248,共6页
选取10头经检测确定为猪瘟抗原抗体双阴性的断奶外三元仔猪,随机分为A、B组,每组5头.A组(对照组)仔猪肌肉注射灭菌生理盐水(1 mL·头^(-1)),B组(兔脾淋组织注射组)仔猪肌肉注射兔脾淋组织(1 mL·头^(-1)).注射后的第3天,采集仔... 选取10头经检测确定为猪瘟抗原抗体双阴性的断奶外三元仔猪,随机分为A、B组,每组5头.A组(对照组)仔猪肌肉注射灭菌生理盐水(1 mL·头^(-1)),B组(兔脾淋组织注射组)仔猪肌肉注射兔脾淋组织(1 mL·头^(-1)).注射后的第3天,采集仔猪外周血,基于Illumina测序平台进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,进行基因本体(GO)及京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,并采用RT-qPCR验证差异表达基因的表达水平.结果显示:A、B两组样品的测序长度均约为6×10^(-9)bp,测序质量符合要求;两组外周血细胞共筛选到差异表达基因1246个.GO富集结果表明,差异表达基因富集到的生物过程有56个GO条目,细胞组成有19个GO条目,分子功能有10个GO条目.KEGG富集结果表明,共有17条显著性富集KEGG通路.本研究重点分析了A、B两组样品T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路,验证差异表达基因的表达水平,结果显示,与A组相比,B组CD4/8、TCRα、AP-1、NAFT基因的表达水平显著上调,与转录组数据一致.以上结果表明,兔脾淋组织肌肉注射第3天可显著影响猪外周血转录组谱,特别是可调节T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路,提高猪的免疫功能. 展开更多
关键词 兔脾淋组织 转录谱 差异表达基因 猪 外周血
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兔脾淋组织液对猪瘟疫苗的免疫增强试验 被引量：18
4
作者 蒋冬福 施万球 +2 位作者 韦家槐 李德富 黄小曼 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第7期10-11,共2页
关键词 猪瘟 疫苗 免疫增强作用 兔脾淋组织液
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兔脾淋组织液增强猪瘟细胞苗免疫抗体效价的试验 被引量：5
5
作者 刘新平 许宝华 《南昌高专学报》 2006年第4期111-113,共3页
采用1％健康兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗分别免疫10日龄经猪瘟乳前免疫的仔猪和经60。65日龄采用细胞苗二免的120日龄中猪，与生理盐水稀释组对照，免疫后15d采血检测抗体（IHA法）。二次试验结果表明：用兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗免... 采用1％健康兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗分别免疫10日龄经猪瘟乳前免疫的仔猪和经60。65日龄采用细胞苗二免的120日龄中猪，与生理盐水稀释组对照，免疫后15d采血检测抗体（IHA法）。二次试验结果表明：用兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗免疫猪比用生理盐水稀释猪瘟细胞苗免疫猪可产生更高的保护性抗体效价，两者的差异均极显著（P〈0．01）。 展开更多
关键词 兔脾淋组织液 猪瘟细胞苗 抗体效价 增强试验
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