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空肠弯曲菌的磁捕获_-荧光PCR检测方法的建立 被引量：19
1
作者 刘光明 苏文金 +3 位作者 蔡慧农 谢明星 刘棠 彭小莉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期336-340,共5页
为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立... 为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立空肠弯曲菌的磁捕获_荧光聚合酶链反应 (IMC_FPCR)方法。IMC_FPCR法检测空肠弯曲菌方法简便易行 ,可在 2 4h内完成 ,特异性好 ,检测低限达到 10cfu mL ,抗干扰性强。IMC_FPCR方法可望解决非可培养状态的空肠弯曲菌检测难题 ,是一种适用于检验检疫、卫生防疫和农产品安全检验等领域的快速方法。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 免疫磁珠捕获 荧光PCR 检测
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一种检测活的非可培养状态空肠弯曲菌的新方法 被引量：6
2
作者 刘光明 蔡慧农 +1 位作者 曹敏杰 苏文金 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第4期122-126,共5页
为提高活的非可培养状态空肠弯曲菌的检出率,建立了一种免疫磁珠捕获-荧光聚合酶链式反应法。该法包括应用免疫磁珠技术制备弯曲菌免疫磁珠,以直接捕获受检样品中的空肠弯曲菌,并设计了检测空肠弯曲菌马尿酸酶(hipO)基因的引物与荧光标... 为提高活的非可培养状态空肠弯曲菌的检出率,建立了一种免疫磁珠捕获-荧光聚合酶链式反应法。该法包括应用免疫磁珠技术制备弯曲菌免疫磁珠,以直接捕获受检样品中的空肠弯曲菌,并设计了检测空肠弯曲菌马尿酸酶(hipO)基因的引物与荧光标记探针。结果表明:磁捕获-荧光聚合酶链式反应法可直接检测空肠弯曲菌,无需增菌培养,具有灵敏度高、选择性好、简便、快速等特点,可在24h内完成样品中活的非可培养状态空肠弯曲菌的检测。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 活的非可培养状态 免疫磁珠捕获 荧光聚合酶链式反应
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免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究 被引量：4
3
作者 王震 龚玉华 +4 位作者 钱彩娣 孙春红 周丽萍 傅行礼 邵启祥 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第21期2931-2933,共3页
目的采用免疫磁珠捕获（IMC）联合双内标PCR-ELISA（IMC-PCR-ELISA）技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠（Dynabeads）。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群I... 目的采用免疫磁珠捕获（IMC）联合双内标PCR-ELISA（IMC-PCR-ELISA）技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠（Dynabeads）。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列,设计2对特异性引物（上游引物的5′端用生物素修饰）,以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段（其与扩增模板在引物区的序列相同）和3套捕获探针（3′端用地高辛标记）。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌,再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌,全过程约4h,检测限为5×10^3 copies/mL,当低内标模板浓度在30-70copies/mL,高内标模板浓度在8 000-12 000copies/mL时,计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系（r^2=0.998）,未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法,此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 免疫磁珠捕获 双内标 PCR-ELISA
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应用磁免疫技术快速检测三种新发病原菌 被引量：2
4
作者 郭惠 杨晋川 +3 位作者 张雷 许静静 王路梅 景怀琦 《疾病监测》 CAS 2011年第4期322-324,共3页
目的应用磁免疫分离技术（IMS）建立对3种新发病原菌（O139群霍乱弧菌、EHEC O157∶H7、单增李斯特菌）的快速检测方法。方法将IMS分别与显色培养（chromogenic media,Ch）和荧光定量PCR技术结合,建立了IMS-Ch、IMS-PCR两种新方法,研究... 目的应用磁免疫分离技术（IMS）建立对3种新发病原菌（O139群霍乱弧菌、EHEC O157∶H7、单增李斯特菌）的快速检测方法。方法将IMS分别与显色培养（chromogenic media,Ch）和荧光定量PCR技术结合,建立了IMS-Ch、IMS-PCR两种新方法,研究不同方法的灵敏性和特异性,并对高危样品的检测效果进行评价。结果 IMS-Ch法24 h能检出目标菌含量≥50 cfu/10 g的样品,IMS-PCR法用于检测EHEC O157∶H7和霍乱弧菌,9 h可达检出限为10~20 cfu/10 g,实际检测效果评价的尤等指数〉95%。结论 IMS-PCR是一种可信的快速筛选方法,IMS-Ch法为较国标法灵敏、快速的确证方法。 展开更多
关键词 新发病原菌 免疫磁珠捕获 荧光定量PCR 显色培养
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3种快速检测生肉中单核增生李斯特菌的方法研究 被引量：2
5
作者 郭惠 杨晋川 +2 位作者 王路梅 许静静 张雷 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期106-108,共3页
目的应用荧光定量PCR技术（Real-time PCR）和磁免疫分离技术（Immunomagnetic separation，IMS）及显色培养技术优化组合，建立对生肉中单增李斯特菌的快速检测方法。方法应用3种快速检测方法检测模拟样品和423份肉制品中的目标菌，比... 目的应用荧光定量PCR技术（Real-time PCR）和磁免疫分离技术（Immunomagnetic separation，IMS）及显色培养技术优化组合，建立对生肉中单增李斯特菌的快速检测方法。方法应用3种快速检测方法检测模拟样品和423份肉制品中的目标菌，比较不同方法的敏感度和特异度。结果用PCR—IMS法48h可达检出限为10～20CFU／10g，实际检测效果显著优于其他两种方法。结论PCR-IMS是检测单增李斯特菌可靠、灵敏、快速的确证方法。 展开更多
关键词 单核增生李斯特菌 免疫磁珠捕获 荧光定量PCR 显色培养
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四种快速检测大肠杆菌O_(157):H_7的方法研究 被引量：1
6
作者 郭惠 杨晋川 +3 位作者 张雷 许静静 王路梅 杜阳光 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第5期1148-1149,共2页
目的:将磁免疫分离技术(immunomagnetic separation,IMS)与显色培养(chromogenic media,Ch)和荧光定量(Re-al-time,R-t)PCR技术结合建立快速检测肉制品中EHECO157:H7的方法。方法:应用四种快速检测方法检测模拟样品和423份肉制品中的EHE... 目的:将磁免疫分离技术(immunomagnetic separation,IMS)与显色培养(chromogenic media,Ch)和荧光定量(Re-al-time,R-t)PCR技术结合建立快速检测肉制品中EHECO157:H7的方法。方法:应用四种快速检测方法检测模拟样品和423份肉制品中的EHECO157:H7,比较不同方法的灵敏度和特异度。结果:IMS-Ch法特异性最好,24 h对目标菌含量1-5 CFU/10 g的样品检出率为95%。IMS-PCR对实际样品检测效果评价的尤等指数最高。结论:IMS-PCR是一种可信的快速筛选方法,IMS-Ch法为灵敏、快速的确证方法。 展开更多
关键词 EHECO157:H7 免疫磁珠捕获 荧光定量PCR 显色培养基
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23起疑似霍乱疫情的快速诊断和分子流行病学分析
7
作者 郭惠 杨晋川 +3 位作者 王路梅 许静静 张雷 景怀琦 《中华全科医学》 2015年第9期1393-1395,共3页
目的应用建立的4种快速检测技术检测霍乱疫情标本,根据霍乱病例诊断结论,优化快速诊断方案来鉴定和识别霍乱疫情。方法应用免疫胶体金(IMG)、免疫磁珠富集(IMS)、实时荧光PCR(Rt-PCR)、显色培养基(Ch)四种快速检测技术优化组合,建立了IM... 目的应用建立的4种快速检测技术检测霍乱疫情标本,根据霍乱病例诊断结论,优化快速诊断方案来鉴定和识别霍乱疫情。方法应用免疫胶体金(IMG)、免疫磁珠富集(IMS)、实时荧光PCR(Rt-PCR)、显色培养基(Ch)四种快速检测技术优化组合,建立了IMG,IMS-PCR,IMS-Chr,Rt-PCR四种方法,用于腹泻疫情样品中霍乱弧菌(O1、O139)的快速检测。通过对23起疑似霍乱疫情的123份标本,239份霍乱流行期外环境样品的实际检测,评价4种方法的灵敏度,特异度,尤登指数。选择最佳组合方案用于霍乱疫情诊断。结果 IMS-PCR用于检测腹泻粪便和外环境样品中的霍乱弧菌,尤登指数>90%,较一般的快速筛选方法具有更高的准确性,适用于快速确认检测。Realtime-PCR法的灵敏度最高,适于快速筛选。结论通过IMS-PCR和Realtime-PCR法的联合诊断,效果最佳。优化的快速检测方案,能够对霍乱疫情实现有效及时的监控。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 免疫磁珠捕获 实时荧光PCR 酶底物显色培养基
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用免疫胶体金快速诊断卡初筛粪便中的O157∶H7大肠杆菌 被引量：13
8
作者 杨晋川 景怀琦 +5 位作者 李洪卫 逄波 赵广法 权太淑 范天锐 徐建国 《疾病监测》 CAS 2001年第9期327-329,共3页
我们用O15 7∶H7大肠杆菌免疫胶体金快速诊断卡 ,对腹泻患者粪便标本中的E .coliO15 7∶H7进行初筛 ,然后再用免疫磁珠捕获集菌及病原菌的分离和鉴定。结果发现 ,该诊断卡可检测到每卡 70个菌细胞。诊断卡强阳性的粪便标本 ,91 18%可以... 我们用O15 7∶H7大肠杆菌免疫胶体金快速诊断卡 ,对腹泻患者粪便标本中的E .coliO15 7∶H7进行初筛 ,然后再用免疫磁珠捕获集菌及病原菌的分离和鉴定。结果发现 ,该诊断卡可检测到每卡 70个菌细胞。诊断卡强阳性的粪便标本 ,91 18%可以分离到O15 7∶H7大肠杆菌 (31/34 ) ;诊断卡弱阳性的粪便标本 ,5 47% (7/12 8)可以分离到O15 7∶H7大肠杆菌 ;诊断卡阴性的粪便标本 ,没有分离到病原菌。O15 7∶H7大肠杆菌免疫胶体金快速诊断卡是一种快速、灵敏、简便的技术 ,可用于对疑似病例的早期诊断和对粪便标本进行初筛 ,减少了工作量 ,值得推广。 展开更多
关键词 O157:H7大肠杆菌 免疫胶体金快速诊断卡 免疫磁珠捕获法
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