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题名RSPO1蛋白的纯化及其免疫淘选
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作者
杜梦阳
许剑锋
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机构
上海海洋大学食品学院农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024年第9期1080-1084,共5页
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基金
国家自然科学基金(82173731)。
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文摘
目的通过噬菌体展示技术,从免疫骆驼的外周淋巴血液中获得与RSPO1结合的纳米抗体,纯化后构建RSPO1噬菌体展示文库,并进行免疫淘选。方法将RSPO1基因与pCMV-Fc载体连接后,构建质粒RSPO1-pCMVFc,瞬时转染HEK-293F细胞,表达RSPO1蛋白;经Protein A凝胶柱、HiLoad^(TM)16/600 Superdex^(TM)200pg柱、Superdex^(TM)24 Increase10/300 GL柱依次纯化RSPO1蛋白后,免疫骆驼,收集外周血并分离淋巴细胞;提取细胞RNA,反转录合成cDNA,通过2步巣式PCR扩增VHH片段,克隆至pMECS噬菌粒载体中,构建噬菌体展示文库,经2轮淘选使与RSPO1结合的噬菌体得到聚集后,进行ELISA鉴定并测序。结果质粒RSPO1-pCMV-Fc经PCR及测序鉴定证明构建正确。表达的RSPO1蛋白相对分子质量约172000,纯度约为70%;RSPO1噬菌体展示文库库容为1.2×10^(8)cfu,经2轮淘选使噬菌体富集度达到12;共获得19个纳米抗体序列。结论获得了多样性良好的纳米抗体序列,为了解与RSPO1相关的Wnt信号通路提供了可能。
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关键词
RSPO1
纳米抗体
噬菌体展示技术
抗体库
免疫淘选
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Keywords
RSPOl
Nanobody
Phage display technology
Antibody library
Immunopanning
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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