犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究 被引量：39

1

作者 王中力 宋晓晖 +1 位作者 陈西召 陈国胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期62-66,共5页

建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试... 建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1∶40以上,试纸条均能检测到为阳性。CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应。且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%。试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查。 展开更多

关键词 免疫层析方法 胶体金 犬细小病毒 试纸条 抗原检测

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荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中4种硝基呋喃代谢物 被引量：12

2

作者 吴烁 张彪 +3 位作者 张万利 邵静梅 刘飘雪 生威 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第20期299-304,共6页

采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法(fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA),并应用于水产品中4种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明:呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃... 采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法(fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA),并应用于水产品中4种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明:呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林代谢物FMICA试纸条的检出限分别为0.004(以1-氨基-乙内酰脲衍生物计算)、0.01(以5-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算)、0.008(以3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算)、0.009(以氨基脲衍生物计算)μg/L;检测线性范围分别为0.005~5、0.01~10、0.01~10、0.01~10μg/L;最佳检测时间为10 min,方法特异性良好。水产样品经衍生化处理后,经检测硝基呋喃代谢物的加标回收率在75.88%~104.81%之间,变异系数均小于15%。FMICA方法操作简单、快速、成本低,适用于水产品中硝基呋喃类兽药代谢物快速定量检测。 展开更多

关键词 硝基呋喃 荧光微球 定量检测 免疫层析方法 水产品

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聚集诱导发光微球免疫层析试纸条定量检测水产品中孔雀石绿

3

作者 罗凯 张威 +2 位作者 刘文娟 郭平 熊勇华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第6期83-92,共10页

目的建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测... 目的建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测。结果本方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较高的检测灵敏度,其50%抑制率达到0.17μg/kg,最低检出限为0.05μg/kg。样本加标0.25、0.50、1.00μg/kg的平均回收率介于116.01%~122.76%,变异系数介于8.66%~11.71%(n=10),表明所建立的荧光免疫层析方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较好的准确性、精密度。通过检测30份孔雀石绿阴性以及12份阳性的水产样本,结果表明所建立的荧光免疫层析方法无假阳性,且检测孔雀石绿含量与液相色谱-串联质谱法具有良好的一致性(线性相关系数为0.9695)。结论本研究以聚集诱导发光荧光微球为新型标记探针,建立了一种高灵敏检测水产品中孔雀石绿的定量方法,为水产品中孔雀石绿的筛查检测提供了技术支撑。 展开更多

关键词 聚集诱导发光荧光微球 孔雀石绿 免疫层析方法

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鹅细小病毒胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量：2

4

作者 邵周伍林 白小飞 +1 位作者 刘明 张云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期486-489,共4页

为建立一种快速、简便地检测鹅细小病毒(GPV)的方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其标记于抗GPV VP3蛋白单克隆抗体2D5上,在硝酸纤维素膜上喷涂抗GPV VP3蛋白单克隆抗体4A8和山羊抗小鼠IgG抗体作为检测线和质控线,制成检测GPV的... 为建立一种快速、简便地检测鹅细小病毒(GPV)的方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其标记于抗GPV VP3蛋白单克隆抗体2D5上,在硝酸纤维素膜上喷涂抗GPV VP3蛋白单克隆抗体4A8和山羊抗小鼠IgG抗体作为检测线和质控线,制成检测GPV的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条检测GPV的最低TCID50为1×104.15/mL,用制备的试纸条仅检测GPV为阳性,而检测其他主要水禽病的病原结果均为阴性;同一批次和不同批次的试纸条对GPV阳性样品的检测结果均无差异。使用该试纸条对已知的80份粪便样品进行检测,阳性及阴性样品的检测符合率分别为96.49%和100%。结果表明,制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,为"小鹅瘟"的快速诊断提供了新的方法。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 胶体金 单克隆抗体 免疫层析方法

原文传递

快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析方法的建立 被引量：1

5

作者 王旗 管笛 +3 位作者 武会娟 裴星瑶 彭涛 江海洋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期71-73,I0002,共4页

本研究旨在研制一种快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析试纸条。将包被抗原(0.80 mg/mL)和羊抗鼠IgG(1.01 mg/mL)喷涂在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质检线。对制备荧光微球抗体免疫复合物(免疫探针)的工艺参数做了一系... 本研究旨在研制一种快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析试纸条。将包被抗原(0.80 mg/mL)和羊抗鼠IgG(1.01 mg/mL)喷涂在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质检线。对制备荧光微球抗体免疫复合物(免疫探针)的工艺参数做了一系列的优化,同时比较了不同标记方法对标记效率及稳定性的影响。结果表明,在pH值为6.0的最佳缓冲体系条件下,催化剂碳化二亚胺(EDC)用量为5μg,抗体100倍稀释添加20μL,检测时间低于25 min,检测限为25μg/L。本试验研制的荧光微球免疫层析试纸条具有简便快速、特异性良好、样本无需前处理等特点,可用于基层奶站和现场快速筛选。 展开更多

关键词 荧光微球 泰乐菌素 免疫层析方法 试纸条

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布病胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量：12

6

作者 唐景峰 李晓艳 +1 位作者 王兴龙 梅建军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期119-121,128,共4页

目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,... 目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。 展开更多

关键词 布鲁菌病 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法

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应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系 被引量：7

7

作者 吴锦雅 杨培良 +2 位作者 周晓红 李华 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期538-541,共4页

目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高... 目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合。胶体金标记4株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测。结果8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L^2.82×10-10mol/L。根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合。标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果最佳。对rSjP38的最低检测量为12.5ng/ml。抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性。结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38。 展开更多

关键词 血吸虫 日本 P38 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法

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抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立 被引量：7

8

作者 李妍 宁云山 +3 位作者 李莉 彭丹丹 董文其 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期435-438,共4页

目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-... 目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8～2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒. 展开更多

关键词 疟原虫 恶性 谷氨酸脱氢酶 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法

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基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究 被引量：3

9

作者 丁豪杰 丁建祖 +4 位作者 孔庆明 郑斌 楼涤 陈睿 陆绍红 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2017年第4期205-211,共7页

为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶... 为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和羊抗鼠Ig G作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10μg/mL,最适pH分别需要加入16和12μL体积的0.2 mol/L K_2CO_3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 虫卵抗原 纳米抗体 胶体金免疫层析方法

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应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系 被引量：2

10

作者 唐景峰 李晓艳 +2 位作者 梅建军 刘锴 王兴龙 《中国农学通报》 CSCD 2006年第11期28-32,共5页

[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb... [目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8￣2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。 展开更多

关键词 B.melitensis 16M 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法

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非洲猪瘟病毒p30二聚体鉴定及胶体金免疫层析方法建立

11

作者 张胜楠 周雅维 +3 位作者 张子羿 单玉平 夏晓莉 张鑫宇 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2023年第6期77-83,共7页

为建立一种制备简单、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗原快速检测方法,利用双表达载体pIRES在293A细胞上表达带有His标签和Flag标签的p30重组蛋白,裂解细胞后,通过免疫共沉淀发现p30重组蛋白以聚合体形式存在,进一步用质谱方法对原核系... 为建立一种制备简单、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗原快速检测方法,利用双表达载体pIRES在293A细胞上表达带有His标签和Flag标签的p30重组蛋白,裂解细胞后,通过免疫共沉淀发现p30重组蛋白以聚合体形式存在,进一步用质谱方法对原核系统表达纯化的p30重组蛋白进行分子量测定,结果证实,ASFV p30能自发形成二聚体。在此基础上,用抗p30的单克隆抗体6H9A10建立了单一单克隆抗体夹心检测p30二聚体的胶体金免疫层析方法,该方法对p30重组抗原最低检测浓度为2.1 ng·mL^(-1),对PRV、CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV、PPV、SVA等抗原检测结果均为阴性;用该胶体金免疫层析方法检测已知的100份临床样品,其中包含20份ASFV阴性血清、20份ASFV阴性组织、10份ASFV阴性血浆、21份ASFV阳性血清、21份ASFV阳性组织、8份ASFV阳性血浆,结果显示,检测出的48份阴性样品和49份阳性样品与已知结果一致。综上,建立的单个单克隆抗体夹心检测p30的胶体金免疫层析方法具有良好的特异性和敏感性,有望用于ASFV抗原的临床快速检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 P30 二聚体 胶体金免疫层析方法

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食品中违法添加奥沙普嗪的荧光免疫层析方法研究

12

作者 陈华龙 黄婉琼 +3 位作者 张敏滢 刘萌 姜丽君 郭杰标 《中南药学》 CAS 2018年第4期518-521,共4页

目的建立一种筛查食品中违法添加的奥沙普嗪荧光微球免疫层析法(FICA)。方法以改良活泼酯法将奥沙普嗪连接到牛血白蛋白和卵清白蛋白,合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对抗奥沙普嗪抗体;以抗体标记的荧光微球(40 nm),在检测线和... 目的建立一种筛查食品中违法添加的奥沙普嗪荧光微球免疫层析法(FICA)。方法以改良活泼酯法将奥沙普嗪连接到牛血白蛋白和卵清白蛋白,合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对抗奥沙普嗪抗体;以抗体标记的荧光微球(40 nm),在检测线和质控线发生免疫反应,分别形成荧光检测信号,构建荧光免疫层析方法。结果在ELISA体系检测奥沙普嗪的IC50值为13.2 ng·m L-1,与8种相关药物交叉反应率都小于0.1%,优化FICA试剂条对奥沙普嗪的最低检测限为2.0 ng·m L-1。优化的FICA试剂对50个市售样品的检测结果,与HPLC验证结果吻合。结论本方法灵敏、特异、简便、快速,是筛查食品中违法添加奥沙普嗪的有效工具。 展开更多

关键词 奥沙普嗪 人工抗原 免疫微球 荧光免疫层析方法

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寄生虫学

13

《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第5期287-292,共6页

关键词 恶性疟原虫海南株 寄生虫学 EBA-175Ⅱ区 胶体金免疫层析方法 单克隆抗体 基因检测 PFCRT IFN-Γ 伯氏疟原虫

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简单、快速同时检测乙肝表面抗原和甲胎蛋白胶体金免疫层析方法的建立

14

作者 王玉金 杨书豪 +5 位作者 杨艳艳 王玉珠 边倩茹 张玉梅 卢秀云 张燕 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期829-830,共2页

关键词 检测 乙肝表面抗原 甲胎蛋白 胶体金免疫层析方法 乙型肝炎病毒感染

原文传递

神经胶质瘤细胞热休克蛋白抗原肽复合物的研究 被引量：3

15

作者 陈赞 杨立庄 +6 位作者 叶伟 王伊龙 赵鹏 李永利 康军 郑永日 曹阳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期466-467,共2页

目的　探讨从神经胶质瘤细胞中提取热休克蛋白抗原肽复合物 (HAC)的方法。方法采用免疫亲和层析技术提取神经胶质瘤细胞中热休克蛋白抗原肽复合物 ,采用Westenblot方法对提取物进行鉴定。结果　采用免疫亲和层析方法成功提取了神经胶质... 目的　探讨从神经胶质瘤细胞中提取热休克蛋白抗原肽复合物 (HAC)的方法。方法采用免疫亲和层析技术提取神经胶质瘤细胞中热休克蛋白抗原肽复合物 ,采用Westenblot方法对提取物进行鉴定。结果　采用免疫亲和层析方法成功提取了神经胶质瘤细胞中热休克蛋白抗原肽复合物 ,并经过Westenblot方法鉴定。结论　采用亲和层析方法可有效的提取神经胶质瘤细胞中的热休克蛋白抗原肽复合物。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 细胞热休克蛋白 抗原肽复合物 免疫亲和层析方法

原文传递

保健食品中违法添加双氯芬酸钠免疫层析筛查方法的建立 被引量：2

16

作者 陈华龙 蓝献泉 +3 位作者 刘旺培 刘萌 姜丽君 郭杰标 《中南药学》 CAS 2017年第10期1434-1437,共4页

目的为了筛查食品中违法添加的双氯芬酸钠,本研究建立相关胶体金免疫层析检测方法(ICA)。方法以活泼酯机制将双氯芬酸钠连接到不同蛋白质载体,分别合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对双氯芬酸钠的特异性抗体;抗体标记的胶体金(40 ... 目的为了筛查食品中违法添加的双氯芬酸钠,本研究建立相关胶体金免疫层析检测方法(ICA)。方法以活泼酯机制将双氯芬酸钠连接到不同蛋白质载体,分别合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对双氯芬酸钠的特异性抗体;抗体标记的胶体金(40 nm)包被在胶体金垫,检测抗原和二抗喷涂在硝酸纤维素膜(NC膜)上,分别构建检测线(T线)和质控线(C线)。组装胶金垫、NC膜、样品垫和吸水垫,组成ICA试剂条。结果在ELISA体系检测双氯芬酸钠的IC50值为9.3 ng·mL^(-1),与8种相关药物交叉反应率都小于0.01%,以ICA试剂条对双氯芬酸钠的最低检测限为2.0 ng·mL^(-1)。IAC试剂对60个市售样品的检测结果,HPLC验证完全吻合。结论本方法简便、价廉、灵敏、特异,适用于筛查食品中违法添加的双氯芬酸钠。 展开更多

关键词 双氯芬酸钠 违法添加 免疫层析检测方法 人工抗原 保健食品

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食品中转基因成分检测方法的研究进展 被引量：17

17

作者 陈颖 葛毅强 +1 位作者 苏宁 徐宝梁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期82-86,共5页

随着各国政府和有关食品监督机构对转基因食品检测的日益重视 ,转基因食品检测方法的研究进展十分迅速。这篇文章就目前国内外常用的 2种转基因食品检测方法进行了概述。

关键词 食品 转基因成分 检测方法 PCR方法 ELISA法 免疫层析试纸条方法

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筛查食品中违法添加奥沙普嗪荧光免疫层析方法研究 被引量：1

18

作者 黄婉琼 张敏滢 +3 位作者 陈华龙 刘萌 姜丽君 郭杰标 《海峡药学》 2018年第8期35-38,共4页

目的本研究建立了一种筛查食品中违法添加的奥沙普嗪胶体金免疫检测试纸条(ICA);方法以改良活泼酯法将奥沙普嗪发表连接到BSA和OVA,合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对抗奥沙普嗪抗体;以胶金垫、NC膜、样品垫和吸水垫组装IAC试剂... 目的本研究建立了一种筛查食品中违法添加的奥沙普嗪胶体金免疫检测试纸条(ICA);方法以改良活泼酯法将奥沙普嗪发表连接到BSA和OVA,合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对抗奥沙普嗪抗体;以胶金垫、NC膜、样品垫和吸水垫组装IAC试剂条,以标记抗体的40nm胶体金,分别与NC膜上的检测抗原和山羊抗兔IgG二抗进行免疫反应,形成检测线(T线)和质控线(C线)。结果在ELISA体系检测奥沙普嗪的IC_(50)值为13.2ng·mL^(-1),与8种相关药物交叉反应率都小于0.1%,优化IAC试剂条对奥沙普嗪的最低检测限为2.0ng·mL^(-1)。IAC试剂对30个市售样品的检测结果,与HPLC验证结果吻合。结论本方法灵敏、特异、简便、快速,是对违法添加奥沙普嗪的食品进行筛查的有效工具。 展开更多

关键词 奥沙普嗪 违法添加 荧光免疫层析检测方法 人工抗原

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基于Me-MLiverpool重组蛋白的新孢子虫胶体金免疫层析检测方法的建立

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作者 任宏琪 乔军 +5 位作者 孟庆玲 张国武 张艳玲 贡莎莎 王熙凤 才学鹏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第11期1-6,共6页

根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒p... 根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证。以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法(CGIA)。重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GICA可检测出的Nc阳性血清最大稀释倍数为1∶512;对92份牛血清样品进行检测,与商品化的新孢子虫ELISA检测试剂盒检测结果一致,表明建立的GICA准确性较高。综上所述,研究建立的基于新孢子虫Nc-livepoor基因胶体金免疫层析检测试纸条具有较高的灵敏性和特异性,可为新孢子虫病的诊断提供技术支撑。 展开更多

关键词 新孢子虫 Nc-livepoor 原核表达 胶体金免疫层析检测方法

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