期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到1篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
两种处理方法对小鼠骨髓源性树突状细胞体外递呈布鲁氏菌免疫多肽组分析的影响
1
作者 李婷婷 刘子超 +4 位作者 周永顺 何营 耿方豪 陈洁然 高剑峰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3730-3739,共10页
【目的】利用布鲁氏菌GFP-M5侵染小鼠骨髓源性树突细胞(DCs),比较侵染后细胞的两种处理方法对免疫多肽组分析的影响,建立布鲁氏菌侵染髓系DCs后免疫多肽组分离纯化技术。【方法】使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与重组... 【目的】利用布鲁氏菌GFP-M5侵染小鼠骨髓源性树突细胞(DCs),比较侵染后细胞的两种处理方法对免疫多肽组分析的影响,建立布鲁氏菌侵染髓系DCs后免疫多肽组分离纯化技术。【方法】使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与重组小鼠白介素4(IL-4)诱导培养小鼠骨髓细胞向DCs分化及增殖;然后用布鲁氏菌GFP-M5菌株侵染小鼠骨髓源性DCs后通过扫描电子显微镜观察侵染前后细胞表面形态变化。同时,利用两种方法处理布鲁氏菌侵染后的DCs:(1)试剂盒法:用Mem-PER^(TM)Plus试剂盒提取DCs表面抗原肽-主要组织相容性复合体Ⅱ(pMHCⅡ)复合物及其他膜蛋白组分,BCA法测定蛋白浓度;(2)低渗溶胀法:低渗缓冲液处理侵染后的细胞,计算不同离心力下的除菌率,通过倒置显微镜观察不同离心力下细胞膜碎片悬浮液中细胞膜的损耗程度,收集含pMCHⅡ复合物的细胞膜碎片悬浮液。通过免疫共沉淀(Co-IP)试验以及液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS)分析,识别并筛选MHCⅡ结合的属于布鲁氏菌的肽段,并对两种处理方法获得的细胞膜蛋白组分中筛选出的肽段进行比较。【结果】扫描电镜观察用GFP-M5菌株侵染DCs后,细胞形态发生明显变化,附着在细胞表面的布鲁氏菌多集中在细胞表面的分支处,呈杆状。Mem-PER^(TM)Plus试剂盒提取2.5×10^(7)个细胞的膜蛋白,蛋白浓度为1.4918 mg/mL;共筛选出7个与MHCⅡ分子结合的布鲁氏菌的肽序列。在低渗缓冲液∶细胞悬液1∶20,3 000 r/min离心10 min的条件下,可以达到较高的除菌率(91.00%),同时细胞膜损耗较小;分离出的细胞膜共筛选出289个与MHCⅡ分子结合的布鲁氏菌的肽序列。【结论】试剂盒法处理所耗时间较短,后续试验处理较简便,但提取的膜蛋白样品中筛选出的MHCⅡ分子结合的肽序列较少;低渗溶胀法步骤比较简单易懂,所用试剂较少,处理的细胞膜碎片悬 展开更多
关键词 布鲁氏菌 细胞膜蛋白 细胞膜分离 免疫多肽组
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部