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基因组、克隆重组DNA探针平行检测恶性疟原虫的初步研究
1
作者 吴银华 许云良 +1 位作者 顾亚萍 罗国湘 《实用寄生虫病杂志》 1994年第2期1-6,共6页
本文报告实验室制备恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ分离株）基因组ＤＮＡ．酶切冻融回收克隆重组ｐＰＦ１４ＤＮＡ，经３２Ｐ缺口移位法标记作为探针，按ＤＮＡ—ＤＮＡ斑点杂交试验平行检测Ｐ．ｆ．ＤＮＡ及血样中恶性疟原虫的初步结果... 本文报告实验室制备恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ分离株）基因组ＤＮＡ．酶切冻融回收克隆重组ｐＰＦ１４ＤＮＡ，经３２Ｐ缺口移位法标记作为探针，按ＤＮＡ—ＤＮＡ斑点杂交试验平行检测Ｐ．ｆ．ＤＮＡ及血样中恶性疟原虫的初步结果．两探针检测人工培养的恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ）敏感度，基因组探针为０．０００７８％原虫血症和７．８３ｐｇ原虫ＤＮＡ，ｐＰＦ１４探针为０．００７８％和１５．６３ｐｇ。镜检确诊并复核后的５６例云南恶性疟病人血样，基因组探针检出５３例（９４．６４％），ｐＰＦ１４探针检出５１例（９１．０７％）．９例间日疟病人血样，基因组探针阳性７例，ｐＰＦ１４探针均未显示杂交．２例伯氏鼠疟、１例刚地弓形虫阳性鼠及１０例正常人血样皆为阴性．结果揭示：这两种探针似可用于我国疟疾主要流行区恶性疟原虫检测。与基因组探针相比，ｐＰＦ１４探针似是发展适合于我因恶性疟原虫大规模核酸诊断技术中，比较经济、方便的探针来源。 展开更多
关键词 疟原虫 基因组 DNA探针 克隆重组
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淋病奈瑟菌表面蛋白A克隆、表达和免疫原性鉴定
2
作者 杜蓬 吴森林 +1 位作者 钟雅文 孙爱华 《中国现代医生》 2012年第3期9-10,15,共3页
目的克隆并构建淋病奈瑟菌表面蛋白A(nspA)基因原核表达系统,并对重组产物rNspA进行免疫原性鉴定。方法采用PCR扩增nspA基因,构建nspA基因原核表达系统。SDS-PAGE检测目的重组蛋白rNspA表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNspA,免疫双扩散... 目的克隆并构建淋病奈瑟菌表面蛋白A(nspA)基因原核表达系统,并对重组产物rNspA进行免疫原性鉴定。方法采用PCR扩增nspA基因,构建nspA基因原核表达系统。SDS-PAGE检测目的重组蛋白rNspA表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNspA,免疫双扩散试验及Western Blot鉴定rNspA的免疫原性。结果克隆的nspA基因与GenBank中相关序列相似性为100%,rNspA表达量为细菌总蛋白的40.1%,提纯的rNspA在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rNspA抗血清免疫双扩散效价为1∶4,rNspA抗血清能有效识别rNspA。结论所构建的nspA基因原核表达系统能高效表达rNspA,表达的产物有良好的免疫原性,为淋病奈瑟菌免疫疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 淋病奈瑟菌 nspA基因 克隆/重组表达 免疫原性鉴定
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含绿色荧光蛋白基因的PRRSV感染性克隆的制备及特性分析
3
作者 张考 仲飞 +3 位作者 李秀锦 陈慧慧 李文艳 温洁霞 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期305-305,共1页
为直观形象地观察PRRSV对细胞的感染,本文拟构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,并对其某些特性进行分析。首先依据PRRSV病毒株(GenBank:AY545985.1)的序列,以其感染性克隆重组质粒(FL-12)和... 为直观形象地观察PRRSV对细胞的感染,本文拟构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,并对其某些特性进行分析。首先依据PRRSV病毒株(GenBank:AY545985.1)的序列,以其感染性克隆重组质粒(FL-12)和含有GFP基因的质粒(PCDNA-EF1-GFP)为模板,采用重叠PCR的方法,扩增出上。 展开更多
关键词 感染性克隆 PRRSV感染 克隆重组质粒 病毒株 特性分析 非结构蛋白 体外转录 基因片段 致病性 猪呼吸
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